刘启威
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：上海市科委科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 差异显示法分析不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的研究被引量：3
- 2006年
- 目的对比分析不同生长环境中的脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达变化。方法采用静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞,1周后收获CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的差异。结果在所使用的差异显示条件下,得到30个差异表达基因片段,其中一个差异表达片段为RAN基因,该基因属于RAS癌基因家族,可能与造血细胞增殖有关。结论不同生长环境影响CD34+造血干/祖细胞的基因表达,这些差异表达的基因可为优化体外培养环境,扩增造血细胞提供分子基础。
- 李群良刘启威蔡海波谭文松
- 关键词：脐血CD34^+造血干/祖细胞培养环境
- 脐血细胞在搅拌悬浮生物反应器中的生长特性被引量：2
- 2006年
- 目的:了解脐血细胞在搅拌悬浮生物反应器中的生长特性,为开发搅拌悬浮生物反应器大规模生产造血细胞提供实验依据。方法:实验于2003-06/11在华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室动物细胞与组织工程研究室完成。脐血细胞在基本细胞因子组合干细胞因子+白细胞介素3+白细胞介素6的刺激作用下,考察其在静态和动态培养系统中的生长规律,搅拌转速(30,60r/min)对脐血细胞细胞周期分布和凋亡的影响以及不同形状搅拌桨(平翼桨、搅拌棒)对脐血细胞生长的影响。结果:①总细胞的扩增:随着细胞逐步适应体外生存环境,总细胞开始表现出增殖的趋势,且转瓶扩增效果略好于孔板,但差异不显著。②CD34+细胞的扩增:在相同细胞因子组合的培养条件下,动态培养在短期培养(1周左右)过程中表现出了明显的增殖优势,而静态培养更有利于维持造血干/祖细胞状态。③总集落形成细胞的扩增:在短期培养中动态培养系统具有明显的生长优势,随着培养时间的延长,静态培养对总集落形成细胞的维持作用优于动态培养。④不同搅拌转速对脐血细胞细胞周期分布和凋亡的影响:相对于静态培养,CD34+细胞除了G2期含量显著增加外,对其他细胞周期和凋亡无显著影响,随着搅拌转速从30r/min提高到60r/min时,CD34+细胞周期分布和凋亡差异不明显,而细胞周期分布和凋亡比率在静态培养和60r/min的转瓶培养情况下更为相似,表明流体作用力的增强对CD34+细胞的生长行为没有影响。⑤不同搅拌桨形状对造血细胞培养的影响:相同搅拌转速(30r/min)下培养来源相同的脐血细胞,1周后平翼桨转瓶中的单个核细胞数锐减,而搅拌棒转瓶却能保持基本不变,且差异显著(P<0.05)。说明不同搅拌桨形式导致混合方式的差异以及由此产生的不同流体作用力等对造血细胞增殖造成某种程度的影响。结论:�
- 李群良刘启威蔡海波谭文松
- 关键词：造血干细胞脐血CD34细胞培养
- 体外培养CD34<'+>细胞差异表达基因的筛选
- 本文选用DDRT-PCR和RAP-PCR两种经典技术来筛选体外短期扩增培养CD34+造血干/祖细胞的差异表达基因。在DDRT-PCR实验中，选用3个锚定引物和8个随机引物进行排列组合，得到8张具有代表性的RNA指纹图谱，...
- 刘启威
- 关键词：DDRT-PCR差异表达基因体外培养MRNA
- 文献传递网络资源链接
- 体外培养前后脐血CD34^+细胞差异表达基因的筛选
- 2006年
- 目的筛选扩增培养前后脐血CD34+细胞差异表达基因。方法将新鲜分离的CD34+细胞设为对照组,经静态和动态培养系统扩增的CD34+细胞设为试验组,应用基因差异显示技术(DDRT-PCR)比较两组之间的基因表达差异,对差异表达基因片段进行克隆、测序及生物信息学分析,并且通过半定量RT-PCR方法验证基因差异表达的真实性。结果应用差异显示技术筛选出5个差异表达基因,其中4个为已知功能基因,1个为未知功能基因,对其中2个基因RAN和DC24进行半定量RT-PCR检测表明,在静态和动态体系扩增培养后的CD34+细胞内,RANmRNA的表达水平分别是新鲜分离细胞的1.521和3.978倍,DC24mRNA的表达水平分别是新鲜分离CD34+细胞的14.275和2.374倍。结论发现了与CD34+细胞体外增殖相关的一些重要基因,为从基因水平调控CD34+细胞体外增殖提供依据。
- 刘启威李群良蔡海波谭文松
- 关键词：CD34^+细胞体外培养脐血基因
- 脐血CD34^+造血干/祖细胞基因表达图谱的研究被引量：4
- 2007年
- 目的通过脐血CD34+造血干/祖细胞的基因表达分析,理解造血干/祖细胞生物学特性。方法利用Min-iMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测CD34+造血干/祖细胞表达的基因。结果在所检测的588个基因中,发现63个基因具有显著的表达水平,其中18个基因强表达。这些基因主要涉及造血干细胞增殖、分化、应激响应、凋亡、转录调节以及细胞周期等。结论对理解脐血干/祖细胞生物学性质以及指导造血干细胞体外培养提供了分子生物学基础。
- 李群良蔡海波刘启威谭文松
- 关键词：脐血CD34^+造血干/祖细胞
- 体外培养环境对脐血CD34^+造血干/祖细胞基因表达的影响
- 2006年
- 目的研究体外培养环境对脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响。方法脐血单个核细胞(MNC)在静态和动态培养系统中培养7d后,收集CD34+造血干/祖细胞,利用SMART-PCR技术从少量RNA中扩增cDNA用于标记探针,与基因芯片杂交后分析培养前后以及不同培养模式下培养的CD34+造血干/祖细胞基因表达的差异。结果在所检测的588个基因中,45个基因在培养前后的CD34+造血干/祖细胞中差异表达,其中20个基因在培养后表达上调,25个基因表达下调。另外,12个基因在不同培养模式中差异表达,只有CCL2在动态培养中高表达,而其余11个基因均在静态培养中高表达。结论通过分析体外培养环境对CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响,可以在分子水平上理解CD34+造血干/祖细胞对培养环境的生理响应。
- 李群良蔡海波刘启威谭文松
- 关键词：脐血CD34^+造血干/祖细胞培养环境基因表达
