刘新艳
- 作品数：14 被引量：29H指数：4
- 供职机构：广州医学院药物研究中心更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广州市教育局市属高校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗蝰蛇毒卵黄抗体的制备及其免疫特性研究被引量：3
- 2008年
- 目的制备一种新的抗蝰蛇毒卵黄抗体,并研究其免疫特性。方法将产卵母鸡分为低剂量(A组)和高剂量(B组)免疫组。以甲醛减毒法制备的蝰蛇毒抗原免疫母鸡;以水稀释法联合硫酸铵沉淀和超滤法分离纯化卵黄抗体;总蛋白质通过改良Lowry法测定;以ELISA法测定卵黄抗体的效价、总卵黄抗体与特异抗体含量、交叉反应。结果低、高剂量组均诱导母鸡产生有效免疫应答。高剂量组免疫效价高于低剂量组(P<0.05),高剂量组于免疫后约40d抗体效价达高峰,持续约4周;而低剂量组在免疫后约50d抗体效价达高峰,持续约2周。免疫过程中,两组总卵黄蛋白无显差异(P>0.05),但高剂量组卵黄中平均特异性抗体(0.29±0.04)mg/ml明显高于低剂量组(0.21±0.03)mg/ml(P<0.05).制备的抗蝰蛇毒IgY与蝰蛇毒抗原具有较高特异性,但与五步蛇(54.3%)、蝮蛇(47.5%)及竹叶青蛇(43.1%)有明显交叉反应,与眼镜蛇(11.7%)有轻度的交叉反应。结论研究证实蝰毒抗原易诱导母鸡产生良好的免疫应答,并成功制备了抗蝰蛇毒的卵黄抗体,为蛇伤防治提供新的途径。
- 王桂平廖洪映刘新艳韦敏周琼
- 关键词：免疫特性
- 抗肺炎支原体卵黄抗体的制备及其免疫特性被引量：3
- 2008年
- 目的制备抗肺炎支原体卵黄抗体,并研究其免疫特异性。方法以超声粉碎法制备肺炎支原体抗原;以ELISA法测定卵黄抗体的效价及免疫特异性;以水稀释法联合疏水层析的方法分离纯化卵黄抗体;应用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度;改良Lowry法测定蛋白含量。结果低、高剂量组均诱导母鸡产生有效免疫应答,高剂量组免疫效价高于低剂量组。高剂量组于初免疫后约50d抗体效价达高峰,持续约2个月;而低剂量组在初免疫后约60d抗体效价达高峰,持续约1个月。之后效价逐渐下降,在免疫约120d,高剂量组由13log2下降到10log2;而低剂量组则由11log2下降到7log2。以水稀释法联合疏水层析法制备了电泳纯抗肺炎支原体IgY,分子量约178KD,平均每1ml卵黄液可获得较纯抗体6.4mg。制备的IgY与肺炎支原体具有较高特异性,与解脲支原体和人型支原体无明显交叉反应,与生殖支原体有轻度的交叉反应。结论本研究初步制备了抗肺炎支原体卵黄抗体,为肺炎支原体的防治与检测提供新的途径。
- 王桂平廖洪映刘新艳韦敏周琼徐玉琳
- 关键词：肺炎支原体卵黄抗体酶联免疫吸附测定
- 眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞生长及其生化机制初探被引量：1
- 2009年
- 目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分（CCVAF）抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞（BAVEC）生长的作用及其生化机制。方法用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,荧光标记流式细胞法测荧光强度表胞内钙离子浓度[Ca^2＋]i及分光光度法测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及一氧化氮（NO）的含量。结果CCVAF（0.625-20μg/mL）剂量依赖性地抑制内皮细胞的生长,IC50=2.45μg/mL。CCVAF与BAVEC共同孵育后,引起细胞间连接减少,细胞F-actin分布混乱;细胞上清液中LDH活力及NO的含量及胞内[Ca^2＋]i分别增加。结论CCVAF抑制BAVEC增殖,可能与CCVAF导致细胞骨架改变,LDH及NO分泌量及胞内Ca^2＋浓度增加等生化机制有关。
- 朱柳余清声袁牧刘新艳王桂平余红娥楼晓华滕脉坤
- 关键词：蛇毒中华眼镜蛇毒内皮
- 卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究被引量：6
- 2005年
- 目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析.结果检测的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32～750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100 μg·L-1)、中(300 μg·L-1)、高(1 000 μg·L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%～3%之内,板间变异系数在8%以内.结论 特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点.该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据.
- 王桂平余清声刘新艳朱柳覃媛黄劭
- 关键词：眼镜王蛇毒IGG类抗体
- 中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡的机制
- 2011年
- 目的通过检测内皮细胞Bcl-2和caspase3的表达水平,探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的可能机制。方法采用血管内消化法原代培养牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)。实验分为不同浓度的CCVAF组(1.25,2.5,5,10 mg/L)和对照组(等体积的培养基)。采用流式细胞仪检测CCVAF作用24 h后各组BAVEC的Bcl-2表达水平;采用比色法测定caspase3的活性。结果经CCVAF作用后,流式细胞仪测定各组均未见到有阳性峰出现在M1,抗凋亡蛋白Bcl-2表达并没有受到药物的影响。而与对照组相比,capase3活性在1.25mg/L组即出现升高,此后随浓度的增加而升高,呈剂量依赖性(r=0.929,P<0.05)。各浓度组加入capase3活性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)后,capase3活性明显降低,但仍然高于对照组(P<0.05)。结论 CCVAF不影响内皮细胞Bcl-2的表达,而能够上调capase3的活性。其可能不经Bcl-2影响的线粒体所在的凋亡通路调节细胞的凋亡。
- 刘新艳余清声王桂平余红娥朱柳袁牧楼晓华腾脉坤
- 关键词：眼镜蛇毒内皮细胞BCL-2凋亡血管生成
- 中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡被引量：3
- 2008年
- 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的作用。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pulm onalis vascular endothelialcells,BAVEC)凋亡形态学、DNA、细胞周期以及凋亡指数的影响。结果经AO染色、流式细胞仪分析均证实CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡。荧光显微镜下观察到CCVAF各浓度(0.15625、0.3125、0.625、1.25μmol.L-1)组处理的内皮细胞,核染色质固缩或断裂成片段状,染色不均匀,出现凋亡小体,凋亡细胞的比例随浓度升高而增加,0.625μmol.L-1组视野内凋亡细胞最多;流式细胞仪分析结果表明CCVAF在浓度低于0.625μmol.L-1,细胞生长被阻滞在S期,1.25μmol.L-1时则被阻滞在G0/G1期,且细胞凋亡率随浓度升高而逐渐增加。结论CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡,通过此途径抑制内皮细胞的生长增殖,这可能是其对抗血管生成的机制。
- 刘新艳余清声余红娥朱柳王桂平袁牧楼晓华腾脉坤
- 关键词：眼镜蛇毒内皮细胞细胞凋亡血管生成肿瘤
- 抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其对眼镜王蛇毒的中和作用被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒的中和作用。结果:嗜硫色谱法制备的卵黄抗体具有良好的免疫活性,并且对眼镜王蛇毒素显示较好的中和效应,在体外6mg/kg抗眼镜王蛇毒卵黄抗体可有效地中和约4LD50(约1.6mg/kg)的眼镜王蛇毒素,而在体内可有效地中和约3LD50(约1.2mg/kg)的眼镜王蛇毒素。结论:抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有良好的中和作用,本项目为抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的进一步研究开发提供实验依据。
- 王桂平刘新艳朱柳余清声
- 关键词：眼镜王蛇毒卵黄抗体免疫活性
- 中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf被引量：8
- 2005年
- 目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299VEGF、bFGF表达的抑制作用。方法:采用RTPCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGFmRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量。结果:不同浓度的(2.0、4.0μg·ml-1)CCVAF对H1299bFGFmRNA水平有降低作用,其中4.0μg·ml-1CCVAF作用7h后bFGFmRNA的表达明显降低,但对VEGFmRNA的表达无明显影响。CCVAF作用H1299细胞24h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGFmRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达。
- 余红娥余清声刘新艳朱柳楼晓华腾脉坤
- 关键词：中华眼镜蛇毒肺癌细胞VEGFBFGF
- 没食子儿茶素没食子酸酯抑制牛主动脉内皮细胞增殖和对细胞周期分布的影响被引量：1
- 2009年
- 背景:血管内皮细胞在肿瘤血管生成中起关键作用,没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)可抑制内皮细胞生长和增殖,但其作用机制仍不清楚。目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯对牛主动脉内皮细胞增殖和细胞周期分布的影响。设计、时间及地点:以细胞为观察对象的随机分组实验,于2006-08/2008-05在广州医学院完成。材料:出生1d、未哺乳的新生牛,取主动脉内皮细胞进行原代培养。方法:将指数生长期密度为5×107L-1的牛主动脉内皮细胞接种于96孔培养板,实验分为2组:实验组和对照组分别加入以培养基RPMI1640配制的不同浓度的EGCG180μL(终浓度为5,10,20,40,80g/L)及等体积不含EGCG的培养基,全自动酶标仪上测定不同时间3,6,12,24,36h各孔吸光度值,并计算细胞生长抑制率。选择适当的药物浓度和作用时间点进行EGCG抑制作用的半数抑制浓度(IC50)实验。收集对数生长期的牛主动脉内皮细胞,实验组加入不同浓度(10,20,30,40g/L)的EGCG,对照组加入不含药物的培养基,Multicycle软件分析G1/G0期、S期和G2/M期细胞所占比例。主要观察指标:①不同剂量EGCG在不同时间点对牛主动脉内皮细胞生长、增殖的影响。②运用直线回归分析EGCG对牛主动脉内皮细胞抑制的IC50。③流式细胞仪检测EGCG对内皮细胞周期分布的影响。结果:①EGCG呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:EGCG作用12h后,细胞抑制率达高峰,此后其抑制率逐渐下降(P<0.05);从10g/L起,EGCG对内皮细胞增殖的抑制效应逐渐增加,40g/L即达高峰(P<0.05);40g/L与80g/L剂量组相比,抑制率无明显差异(P>0.05)。②在3,6,12,24h和36h等时间点EGCG的IC50分别为23.14,18.79,13.23,14.19,17.45g/L,IC50在12h达高峰,时间继续延长,作用并不增加。③各组G2/M期细胞所占比率无明显差异(P>0.05)。S期细胞比率由(58.02±1.21)%下降为(27.62±3.12)%,其中30g/L和40g/L剂量组与对照�
- 王桂平叶云潘学宾刘新艳
- 关键词：牛主动脉内皮细胞细胞周期细胞增殖EGCG
- 卵黄抗体用于眼镜王蛇毒抗原检测的初步研究
- 2005年
- 王桂平余清声刘新艳朱柳覃媛黄劭
- 关键词：眼镜王蛇毒抗原检测IGG类抗体卵黄抗体竹叶青蛇毒眼镜蛇科
