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重组绵羊朊蛋白（OvPrP<'C>）的构象转化与Prion疾病发生机制的研究: 传染性海绵状脑病是由于正常细胞膜蛋白——朊蛋白(prionprotein，PrPC)，发生构象改变后形成致病型朊蛋白(也称“痒病相关朊蛋白”，PrPSc)，PrPSc聚集并在脑组织沉积，引起人和多种动物的一类慢性神经退行...; 刘美丽; 关键词：传染性海绵状脑病朊蛋白; 文献传递

一种牛朊病毒抗体及其制备方法: 本发明公开了一种牛朊病毒抗体及其制备方法。本发明所提供的制备牛朊病毒抗体的方法，是以选自下述多肽家族之一的多肽为抗原免疫动物得到的抗体；所述多肽家族由以下多肽组成：1)具有序列表中序列1的氨基酸残基序列的多肽；2)从序列...; 赵德明杨建民刘美丽尹晓敏马李颖周向梅; 文献传递

铜离子对绵羊PrP^C重组蛋白结构转化的影响: 2007年; 为探明铜离子在朊蛋白构象转化中的作用机制,进一步研究构象病发生机制提供基础数据,利用DNA重组技术,绵羊朊病毒蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得绵羊PrPC重组蛋白(OvPrPC),与氯化铜在体外结合。对CuCl2处理后的蛋白进行圆二色谱(CD)和蛋白酶K(PK)消化试验进行转化调节后蛋白抗性分析。结果表明,OvPrPC分子量为25172.80u,其二级结构主要由α-螺旋构成,含少量β-折叠。经过CuCl2体外调节后,OvPrPC结构中α-螺旋减少,β-折叠增加。而蛋白酶K消化后,CuCl2作用后的蛋白产生了PK抗性。为进一步的神经细胞毒性试验提供了宝贵的材料,进而为探讨构象病发生机理提供有力的科学依据。; 刘美丽赵德明周向梅尹晓敏; 关键词：CUCL2 圆二色谱

实时荧光定量PCR构建绵羊PrP基因标准品质粒和标准曲线被引量：4: 2005年; Here we report the construction of sheep PrP gene standard plasmid DNA and curve using real-time RT-PCR.Total RNA was extracted from each sample and the fragments of target gene were amplified by RT-PCR.The plasmid was constructed for calibrating unknown samples.In this study,the constructed plasmid containing only the target gene was used to construct a calibration curve.The absolute standard curve method was shown to be of high linearity,sensitivity and reproducibility.The purpose of this study is to investigate the quantification of PrP mRNA expression for knowing the scrapie pathogenesis and providing powerful tool for further studies on prion diseases pathogenesis.; 韩彩霞赵德明吴长德宁章勇杨建民刘美丽马李颖; 关键词：PRP 实时荧光定量PCR 绵羊

绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析被引量：1: 2006年; 利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrP^C插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21 (DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(23～256)。经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在。将包涵体蛋白用8mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni-NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的目的蛋白。由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象。采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右。为了进行重组朊蛋白的结构分析,将重组蛋白进行超滤浓缩,至蛋白浓度为0．4mg/mL时,采用远紫外线圆二色谱(CD)分析其二级结构,并对其高级结构进行了预测。结果表明：通过Western-blotting鉴定,表达的绵羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量为25172．80u左右。经过Jascow32软件分析后,测得OvPrP(23～256)的二级结构含量为：α螺旋为39．4%,β折叠为0%,转角为0%,无规卷曲为60．6%。绵羊重组朊蛋白高级结构的分析为朊病毒疾病的发生机理的探讨提供科学依据。; 刘美丽赵德明周向梅尹小敏; 关键词：原核表达圆二色谱

绵羊朊病毒蛋白基因的原核表达与Ni-NTA纯化: 朊病毒(Prion)是一种传染性的、抗蛋白酶水解的糖蛋白,它具有与普通病原微生物不同的理化和生物学特性,而且至今未发现其含有核酸.'唯蛋白学说'认为Prion是人和传染性海绵状脑病(TransmissibleSpongi...; 刘美丽赵德明; 关键词：绵羊原核表达生物学特性; 文献传递

用实时荧光定量RT-PCR方法定量绵羊PrP基因的表达被引量：12: 2006年; 为快速、准确定量绵羊PrP基因的mRNA,建立了绵羊PrP基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法。根据已报道的绵羊PrP基因序列,设计合成引物;采用RT-PCR方法扩增目的片段;构建标准重组质粒制备标准曲线,用于样品检测。结果发现,中枢神经系统组织PrP基因的表达量(copies/ng总RNA,39420)比外周组织(为7845)的高;在中枢神经系统中,脑干的PrP基因的表达量最高(为67020);外周器官中,淋巴结PrP基因的表达量最高(为29086),肾脏的表达量最低(为125)。建立绵羊PrP基因实时荧光定量PCR方法,对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量分析,为进一步研究绵羊组织器官的PrP表达在传染性海绵状脑病发生中的作用提供基础数据。; 韩彩霞赵德明吴长德宁章勇杨建民刘美丽马李颖; 关键词：朊蛋白基因表达实时荧光定量PCR

绵羊朊病毒蛋白基因的原核表达与Ni-NTA纯化: ＜正＞朊病毒（Prion）是一种传染性的、抗蛋白酶水解的糖蛋白,它具有与普通病原微生物不同的理化和生物学特性,而且至今未发现其含有核酸。“唯蛋白学说”认为Prion是人和传染性海绵状脑病（TransmissibleSp...; 刘美丽赵德明; 文献传递

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刘美丽