刘锋
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：陕西省科技统筹创新工程计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰I2PP2A基因表达对NB4-R1细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨沉默蛋白磷酸酯酶抑制因子-2（I2PP2A）基因表达对人急性早幼粒细胞白血病（APL）维甲酸耐药细胞株NB4-R1增殖和凋亡的影响.方法 设计、构建靶向I2PP2A基因的RNA 干扰慢病毒载体I2PP2A-shRNA,在聚凝胺（polybrene）介导下转染NB4-R1细胞,用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）和Western blot法检测转染前后I2PP2A表达水平;CCK-8比色法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡比例;Western blot法检测caspase-8及PARP蛋白表达水平.结果 qRT-PCR和Western blot结果显示I2PP2A-shRNA转染组I2PP2A基因表达水平均明显下调,I2PP2A mRNA表达水平较空白对照组和阴性对照组分别下调（70.0±9.6）％和（64.0±6.2）％（P＜ 0.05）;I2PP2A蛋白表达水平下调幅度与mRNA一致.CCK-8增殖实验结果显示I2PP2A-shRNA转染组NB4-R1细胞增殖率比空白对照和阴性对照组均明显降低（P＜0.05）.流式细胞术检测结果显示I2PP2A-shRNA转染组较空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率分别增加了（6.30±0.67）倍和（6.04±0.56）倍（P＜0.01）;封闭I2PP2A基因表达后caspase-8和PARP前体蛋白表达较空白对照组分别降低（44.0±3.1）％和（57.0±4.0）％（P＜0.05）,而caspase-8 （p43）和PARP（p89）剪切体蛋白表达则较空白对照组分别增加了（36.0±2.5）％和（45.0±4.8）％（P＜ 0.05）.结论 利用RNA干扰技术沉默I2PP2A基因表达可以显著抑制NB4-R1细胞增殖并促进NB4-R1细胞凋亡,其机制可能与激活caspase-8,启动外源性细胞凋亡通路密切相关.
- 刘雁峰贺鹏程刘锋程小岩张梅
- 关键词：RNA干扰细胞增殖
- 过表达prohibitin促进NB4-R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡被引量：4
- 2014年
- 目的构建人prohibitin基因真核过表达载体,探讨上调prohibitin对NB4-R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡的影响。方法 PCR钓取目的基因prohibitin,与pEGFP-N1-3FLAG真核载体定向连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。将阳性重组载体pEGFP-N1-3FLAG-prohibitin转染NB4-R1细胞,以实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测过表达效果,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测prohibitin过表达对NB4-R1细胞凋亡的影响。结果 PCR筛选及测序比对,证明成功构建了prohibitin基因过表达载体;对NB4-R1细胞转染率可达70%以上;qRT-PCR结果显示转染pEGFP-N1-3FLAG-prohibitin过表达载体组(OE)prohibitin mRNA表达水平较空白对照组(CON)和阴性对照组(NC)分别上调(1.64±0.37)倍和(1.58±0.43)倍(P<0.05),Western blot结果显示OE组prohibitin蛋白表达水平较CON组和NC组分别上调(1.91±0.33)倍和(1.99±0.37)倍(P<0.05);流式细胞术结果表明CON组、NC组和OE组NB4-R1细胞凋亡率分别为(5.88±0.43)%、(6.63±0.46)%和(28.22±1.33)%,OE组较CON组和NC组细胞凋亡率分别增加了(3.80±0.24)倍和(3.39±0.30)倍(P<0.05)。结论过表达prohibitin可诱导NB4-R1细胞凋亡。
- 刘雁峰贺鹏程刘锋程小岩张梅
- 关键词：PROHIBITIN过表达凋亡急性早幼粒细胞白血病
