包方
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 供职机构：江苏大学生命科学研究院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 家蚕浓核病毒中国株非结构蛋白1(NS1)的表达被引量：3
- 2008年
- 利用PCR技术扩增出BmDNV-3 NS1基因,将目的基因与原核表达载体pET-30a进行连接,转化BL2l star菌并在该菌中表达,经Western blot鉴定表达的产物为BmDNV-3 NS1蛋白,纯化NS1蛋白并制备兔多克隆抗体。同时BmDNV-3 NS1基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTb-eGFP中,转化BmDH10BAC感受态细胞,提取的重组Bacmid通过脂质体包埋转染家蚕BmN细胞,再以收获的重组病毒感染家蚕幼虫。家蚕BmN细胞和幼虫感染重组病毒2d后均观察到绿色荧光,经SDS-PAGE分析真核表达的产物与预测的NS1-eGFP融合蛋白大小不一致,说明NS1-eGFP融合蛋白被昆虫内源性的蛋白酶降解。降解的产物用NS1蛋白抗体进行Western blot鉴定为BmDNV-3 NS1蛋白。
- 余蔚姚勤郭忠建包方尹慧娟陈克平
- 关键词：家蚕浓核病毒杆状病毒表达系统WESTERNBLOT
- 家蚕对浓核病毒中国株(BmDNV-3)抗性及感性品系中肠的差异蛋白质分析被引量：5
- 2007年
- 【目的】通过比较家蚕Bombyx mori抗性及感性品系的中肠蛋白质表达谱,获得家蚕对家蚕浓核病毒中国株(BmDNV-3)抗性相关的蛋白。【方法】利用双向电泳(2-DE)对感性品种华八35和抗性品种秋丰接种病毒后48h的蛋白质表达谱进行比较分析,并对其中的差异蛋白进行MALDI-TOF-TOF质谱分析,通过NCBInr和MSDB数据库进行蛋白点的鉴定和功能分析。【结果】获得重复性较好的差异蛋白点16个,其中质谱鉴定出5种蛋白,它们分别是糖基转移酶(glycosyltransferase)、糖基转移酶-S(GlcAT-S)、21.5kD小热休克蛋白(21.5kDsmall heat shock protein)、V-ATP酶(vacuolar ATPsynthase)和精氨酸激酶(arginine kinase)。这5种蛋白在抗性品系秋丰中的表达量均高于感性品系华八35。【结论】糖基转移酶和糖基转移酶-S仅在抗性品系中存在,提示它们可能是与抗性有关的蛋白。此外,增强的应激反应和能量代谢也可能与家蚕对BmDNV-3的抗性产生相关。
- 包方姚勤李军刘晓勇余蔚尹慧娟陈克平
- 关键词：家蚕浓核病毒抗性MALDI
- 家蚕浓核病毒(中国镇江株)在不同感受性宿主体内的复制被引量：3
- 2007年
- 家蚕浓核病毒中国镇江株是一株双生浓核病毒（bidensovirus）。其宿主感染后的病症与典型的家蚕浓核病毒（BmDNV-1伊那株）表现相似，病蚕软化，中肠的圆筒型细胞呈浓核症。该病毒的最大特点是基因组中含有二套DNA分子（VD1，VD2），这两种核酸分子以单链（＋VD1，-VD1，＋VD2，-VD2）线型方式被分开包装在各自的衣壳蛋白中，成为四种病毒体，而且它自身编码DNA聚合酶。有部分蚕品种对该病毒表现完全抗性，即不发病。分别对敏感性家蚕品种（华八35）和抗性家蚕品种（秋丰d）的幼虫进行经口接种病毒。在接种后，从2h到96h分9个时间点，对中肠组织进行取样。以家蚕细胞质肌动蛋白A3（actin A3）基因作为参比基因，用来标定取样组织细胞数。针对VD1和VD2分别设计特异引物，用荧光定量PCR的方法分别检测各个时间点的样品中的病毒基因组VD1和VD2拷贝数。结果表明：无论是在感性还是在抗性宿主体内，家蚕浓核病毒中国株的基因组VD1和VD2在各时间点拷贝数相近，表现出VD1和VD2是同步复制的；病毒侵入两种宿主中肠的初始量（接种后2h）基本相等，每个细胞约为6～10拷贝数。在敏感性宿主体内病毒感染过程表现为潜伏期，指数增长期，平台期。从接种后2h到12h为病毒潜伏期；12h到36h为指数增长期，倍增时间为1．71h，大约扩增15次；36h到96h为平台期，进入平台期病毒的拷贝数达到20万个。在抗性宿主体内病毒处于一种极低水平的增殖，从添毒后2h的6～10拷贝数到96h的150～200拷贝数，病毒复制倍增时间分别为3h和12h，大约扩增5次。推测家蚕对浓核病毒中国株的抗病性，只是一种慢性的带毒不发病的表现。
- 韩序姚勤高路王永杰包方陈克平
- 关键词：家蚕体内增殖荧光定量PCR
- 家蚕浓核病毒(中国株)结构蛋白质谱鉴定
- 家蚕双分子浓核病毒-中国株(简称BmDNV-3)结构蛋白被分离、纯化,PAGE电泳显示有5条蛋白带,质谱和数据库分析有3条带同源于家蚕BmDNV-3同一个编码框编码的结构蛋白。数据库检索为家蚕BmDNV-3和BmDNV-...
- 姚勤韩旭王永杰王林玲包方陈克平
- 文献传递
