吴德生
- 作品数：13 被引量：26H指数：3
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 荧光素酶在生物医学中的研究进展
- 荧光素酶（Luciferase）作为一种生物体催化自身发光的蛋白质,由于其检测快速、简便、灵敏,而被广泛应用于生物学、医学等领域,荧光素酶基因作为报告基因,在生物医学以及基因工程方面有着广泛的应用前景。
- 吴德生王晓云
- 关键词：荧光素酶荧光素酶基因生物医学
- 文献传递
- pIRES2-EGFP-DAZ3质粒构建及金黄地鼠2-细胞胚中人DAZ基因的复制与表达
- 2006年
- 背景与目的:人Yq11.2上AZF区(内含DAZ基因家族)的缺失是多数男性不育的病因。本研究旨在探讨DAZ3基因导入精子的可能性以及导入基因在2-细胞胚中的功能。材料和方法:构建pIRES2-EGFP-DAZ3质粒,经鉴定无误后将其导入金黄地鼠精子。将携带DAZ3基因的精子与金黄地鼠卵母细胞进行体外受精。用FISH、PCR、RT-PCR技术分别检测DAZ3基因在精子头部、雄原核上的整合以及在2-细胞胚中的复制与表达。结果:构建的pIRES2-EGFP-DAZ3质粒经酶切、PCR和绿色荧光蛋白表达鉴定构建成功。采用FISH在精子头部、单细胞胚雄原核和2-细胞胚两个间期核上观察到阳性杂交信号。采用RT-PCR在2-细胞胚样本中观察到DAZ3cDNA的特异条带。结论:外源性DAZ3基因能被导入精子基因组。携带DAZ3基因的精子可与卵母细胞完成正常的受精过程。导入的DAZ3基因在早期胚胎细胞中能够随细胞分裂自我复制并表达其功能。本研究结果为DAZ基因缺失所致男性不育的治疗提供了新的线索。
- 徐珊珊黄天华谢庆东吴丛梅吴德生
- 关键词：男性不育金黄地鼠
- 低剂量辐射联合pEgr-P16基因治疗诱导食管癌细胞凋亡的研究被引量：5
- 2005年
- 目的:研究大剂量(2Gy)和低剂量(0.075Gy)X射线诱导pEgr P16重组质粒稳定转染的食管癌细胞株EC9706凋亡的作用。方法:将脂质体包裹的pEgr P16重组质粒,转染食管癌细胞系EC9706中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞;采用Westernblot方法检测不同剂量X射线诱导后P16的表达;观察不同剂量X射线照射后,EC9706细胞凋亡率的变化。结果:pEgr P16重组质粒转染EC9706细胞,并获得稳定转染的细胞;2Gy和0.075GyX射线照射均可诱导P16表达增强;稳定转染的细胞经2Gy和0.075GyX射线照射,细胞凋亡率明显高于假照射(0Gy)组(P<0.05～0.01)。结论:0.075GyX射线照射可诱导稳定转染的EC9706细胞中P16表达增强,使诱导细胞凋亡率提高。
- 吴丛梅黄天华吴德生谢庆东李德锐陈秀如徐小虎
- 关键词：低剂量辐射基因治疗EC9706细胞X射线诱导食管癌细胞系
- pEgr-TNFα基因联合放疗抑制食管癌细胞生长的实验研究被引量：2
- 2006年
- 背景与目的：研究pEgr-TNFα重组质粒在稳定转染的食管癌细胞中的辐射诱导表达，及其联合放射治疗抑制食管癌细胞生长的效果。材料与方法：将脂质体包裹的pEgr-TNFα重组质粒，转染食管癌细胞系EC9706中，经G418筛选，获得稳定表达的细胞；采用ELISA方法检测0．075Gy和2Gy剂量x射线诱导后TNFα的表达；观察该工种剂量X射线照射后，EC9706细胞的增长情况。结果：pEgr-TNFα重组质粒转染EC9706细胞，并获得稳定转染的细胞；大剂量x射线照射和低剂量X射线照射均可诱导TNFα表达增强，为对照组的6～6．3倍（P〈0．01）；稳定转染的细胞经0．075Gy和2GyX射线照射，8d后细胞数明显低于未转染细胞组（P〈0．01）和稳定转染的假照射组（P〈0．01）。结论：体外pEgr-TNFα基因．放射联合治疗有明显的抑制食管癌细胞生长的作用。
- 吴丛梅黄天华吴德生谢庆东李德锐陈秀如徐小虎
- 关键词：X射线照射食管癌细胞低剂量照射
- 一种新型小分子化合物增强PC3细胞的辐射敏感性
- 2009年
- 目的检测小分子化合物8-氧-8H-苊并[1,2-b]吡咯-9-腈的氨基取代衍生物(S1)对前列腺癌细胞系PC3辐射敏感性的作用。方法采用流式细胞术分别检测不同剂量X射线和不同浓度S1化合物以及两者联合作用后,PC3细胞凋亡率的变化;采用Western blot方法检测S1作用后不同时间Bcl-2蛋白在PC3细胞中的表达变化。结果X射线诱导PC3细胞凋亡具有剂量依赖特性,2Gy、5GyX射线照射未发现明显的凋亡,10Gy、20Gy照射组有明显的凋亡产生(P<0.01);S1化合物能够显著诱导PC3细胞凋亡,并具有剂量依赖特性,其中5μmol/L和10μmol/L组凋亡率明显高于对照组(P<0.01);S1作用后2～12hPC3细胞中Bcl-2蛋白表达逐渐减低;S1作用后,分别给予PC3细胞2Gy和8GyX射线照射,细胞凋亡率明显高于单独照射组和单独S1作用组(P<0.01)。结论S1能够增强PC3细胞对X射线的敏感性,可望为临床提高前列腺癌放疗效果,降低辐射损伤提供新的治疗方案。
- 吴丛梅殷玉和吴德生
- 关键词：前列腺癌放疗增敏
- 重组pEgr-Endostatin-EGFP质粒的辐射诱导特性及其在基因-放射治疗中的应用
- [背景与目的]在肿瘤的治疗中,将治疗性的基因导入肿瘤细胞或正常组织,逐渐成为肿瘤治疗研究的重要策略之一。然而,由于基因转导系统,转基因的表达对于肿瘤的靶向性及调节的局限性,使得实验室的观察结果难以应用于临床实践。最近有研...
- 吴德生
- 关键词：内皮抑素基因导入
- 文献传递
- 脂质体介导外源DNA体外转染金黄地鼠卵母细胞的研究被引量：10
- 2004年
- 背景与目的 :研究外源DNA在金黄地鼠卵母细胞染色体上的整合率 ,探索卵母细胞作为外源基因载体的可行性。材料与方法 :在体外 ,用脂质体包裹外源NF_Luc质粒 ,将其与金黄地鼠卵母细胞共培养后收获细胞 ,分别用斑点杂交、Southern杂交以及荧光原位杂交分析检测Luc +基因在卵母细胞中的整合。结果 :Southern杂交分析 ,在13个样本DNA中发现9个样本有Luc+基因特异性条带扩增 ;阳性率为69.2 %(48.2 %～94.5 %),荧光原位杂交分析显示 ,在253个转染后卵母细胞中发现 ,2例中期相染色体及3例间期核上有明显的Luc+基因阳性杂交信号。结论 :在国内首次证实金黄地鼠卵母细胞可被脂质体包裹的外源DNA转染 ,即金黄地鼠卵母细胞可以作为外源基因的载体 。
- 吴德生王晓云吴丛梅谢庆东黄天华
- 关键词：卵母细胞脂质体
- 重组质粒pEgr-P16在EC9706细胞中的辐射诱导凋亡作用被引量：1
- 2004年
- 背景与目的 :研究pEgr_P16重组质粒在食管癌细胞系EC9706中的辐射诱导凋亡作用。 材料与方法 :pEgr_P16重组质粒通过脂质体介导转染人食管癌EC9706细胞 ,定量RT -PCR检测2Gyγ射线照射后被转染细胞中P16的表达和细胞凋亡率的变化。结果 :对照组无P16蛋白表达 ,转染质粒组细胞接受2Gyγ射线照射后2～24hP16表达量与时间呈曲线关系 ,在22h时P16的mRNA水平最高 ;P16基因联合放射可诱导食管癌细胞凋亡 ,凋亡率高于单纯照射组和单纯基因诱导组。结论 :γ射线可诱导 pEgr_P16重组质粒在人EC9706细胞中表达并显著提高EC9706细胞的凋亡率。本研究结果为食管癌基因
- 吴丛梅黄天华谢庆东李德锐陈秀如吴德生徐小虎
- 关键词：EGR-1启动子Γ射线P16表达凋亡
- 采用全胚胎培养法研究酒精对胚胎发育的毒性影响被引量：5
- 1999年
- 目的化学物质的毒性作用常因其在体内代谢而变化。为探讨酒精在代谢条件下的发育毒性，本研究应用植入后全胚胎培养技术研究了酒精对胚胎发育的影响。方法：孕９５天大鼠胚胎于体外条件下移植分离培养在含４０、１００、２０、４０ｍｇ／ｄｌ内含Ｓ９的即可离心大鼠血清培养基中连续培养４８小时，观察酒精对胚胎生长发育和器官形态分化的影响。结果：４０ｍｇ／ｄｌ＋Ｓ９组与对照组各指标无显著性差异，１００ｍｇ／ｄｌ＋Ｓ９组则导致胚胎的体长、ＤＮＡ、蛋白质含量及部分器官形态评分呈剂量相关的下降，但前脑、中脑评分并无影响。随染毒剂量增加，胚胎的绝大多数指标显著降低，胚胎致畸率和死亡率相应增高。结论：酒精在Ｓ９作用下转化为乙醛后，毒性作用的靶器官发生改变，表现为肢芽、心脏等器官发育异常为主，代谢产物乙醛也有一定的致畸作用。
- 屈卫东张本忠张本忠邓莹吴德生吴德生
- 关键词：全胚胎培养胚胎发育
- pETNF-P16质粒的构建及其在食管癌细胞中的辐射诱导表达特性
- 2004年
- 目的 构建重组质粒pETNF P16并研究其在食管鳞状细胞癌细胞系EC970 6中X射线照射诱导表达特性和基因 放射治疗食管癌的可行性。方法 构建重组质粒pETNF P16 ,通过脂质体介导转染EC970 6细胞。利用ELISA ,Westernblot和免疫细胞化学的方法检测pETNF P16在被转染的EC970 6细胞中的X射线照射诱导表达特性。结果 成功构建真核载体pETNF P16并转染EC970 6细胞。在不同剂量X射线照射后被转染细胞中TNFα的表达量明显高于 0Gy组 (P <0 0 5或P <0 0 1)。 2GyX射线照射后 2～ 4 8hTNFα和P16的表达量明显高于对照组 (P <0 0 5或P <0 0 0 1)。在正常的EC970 6细胞中没有P16的表达 ,在转染组和辐射诱导组中P16有较强的表达。结论 在pETNF P16质粒转染的EC970 6细胞中X射线可诱导TNFα和P16的表达增强。本研究结果为临床食管癌基因
- 吴丛梅黄天华谢庆东李德锐吴德生徐小虎
- 关键词：X射线照射TNFΑEC细胞表达量质粒
