吴锦艳
- 作品数：189 被引量：365H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家肉羊产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 小反刍兽疫病毒H蛋白的表达及间接ELISA方法的建立被引量：6
- 2016年
- 利用原核表达系统表达了小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)血凝素蛋白(H)作为ELISA包被抗原,建立了PPR抗体检测的间接ELISA方法,并对所建立方法的相关条件进行了优化。优化结果显示:抗原的最佳包被质量浓度为20mg/L;血清最佳稀释度为1∶80;酶标二抗的最佳浓度为1∶20 000;抗原抗体反应时间和酶标二抗孵育时间均为45min。批内及批间重复试验结果变异系数均小于10%,说明该方法具有较好的可重复性。检测羊口疮、羊痘、蓝舌病和山羊支原体血清结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。检测临床血清样品80份,并与国外c-ELISA试剂盒比较,符合率为93.75%。因此,本方法可以用于小反刍兽疫的临床血清抗体检测及流行病学调查。
- 栾志舫陈妍吴锦艳王光祥田宏尹双辉杨顺利尚佑军张志东刘湘涛
- 关键词：小反刍兽疫原核表达间接酶联免疫吸附试验
- 一种用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒及其检测方法
- 本发明提供了一种用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的检测方法，通过设计一对引物和一条探针对样品的DNA模板进行实时荧光定量PCR检测，本发明还提供了利用上述检测方法检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒。本发明针对ORFV的保守区域...
- 刘湘涛田宏吴锦艳陈妍尚佑军张克山尹双辉王光祥杨顺利刘永杰
- 文献传递
- 猪生殖与呼吸综合征病毒NX／ZhW／07株的分离鉴定及其ORF5、Nsp2基因特性分析
- 2009年
- 将2007年宁夏送检的疑似猪高热病病料处理后接种于Marc-145细胞,结果Marc-145细胞出现典型的细胞病变,应用猪生殖与呼吸综合征(PRRS)病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,将其命名为NX/ZhW/07。采用RT-PCR方法扩增该分离株的ORF5和Nsp2基因,并进行序列分析。结果表明,NX/ZhW/07株的ORF5基因与GXHP-5、Hainan-1、HUB1、Hunan-1、JIANGSU、Jiangxi-1、LN-5和SHH-5株的核苷酸序列的同源性分别为92%～94%,其中与CH-1a株的核苷酸序列的同源性最高,达99.2%。Nsp2基因序列分析显示,出现30个氨基酸的不连续缺失,与国内高热病分离株JXA1的缺失位置完全一致。由此推测NX/ZhW/07株属于PRRSV美洲型变异株。
- 满自萍田宏吴锦艳赵娜尚佑军杨春生何生虎刘湘涛
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒ORF5基因NSP2基因
- 稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立被引量：2
- 2008年
- 从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。
- 田宏吴锦艳龚真莉郑海学孙世琪尚佑军刘湘涛谢庆阁
- 关键词：重组逆转录病毒载体PK-15细胞基因表达
- 基于单域抗体9-4-1免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑1免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑1通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑1免...
- 吴锦艳尚佑军田宏侯俊玲吕律刘永杰何继军李玲霞杜国玉张成孙健飞
- 一种用于检测猪繁殖与呼吸综合症病毒的试剂盒和检测方法
- 一种用于检测猪繁殖与呼吸综合症病毒的试剂盒和检测方法，所述试剂盒包含RNA酶抑制剂、AMV逆转录酶、Taq酶、无RNA酶水、One Step RNA PCR混合液、阴性对照以及序列SEQ ID NO：1至SEQ ID N...
- 刘湘涛田宏吴锦艳尚佑军尹双辉靳野
- 文献传递
- 高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析被引量：21
- 2009年
- 将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明:该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为83.0%,氨基酸同源性为72.7%;与高致病性变异毒株NX和SD核苷酸同源性为95.5%,氨基酸同源性为90.9%,可见该毒来源于2006-2007年流行毒株,说明高致病性猪蓝耳病变异病毒已经在甘肃省存在。该毒株的成功分离为高致病性猪蓝耳病流行病学调查分析提供数据,也为预防控制该病积累了资料。Nsp2的特性分析为揭示高致病性猪蓝耳病PRRSV在甘肃省的流行特点提供参考。
- 吴锦艳田宏尚佑军刘湘涛郑海学靳野尹双辉满自萍赵娜蔡承茹蔺芳谢庆阁
- 关键词：高致病性猪蓝耳病病毒NSP2特性分析
- 一种羊胎儿皮肤成纤维细胞、其分离方法与应用
- 本发明公开了一种羊胎儿皮肤成纤维细胞、其分离方法与应用，其中，所述成纤维细胞的保藏号为CCTCC No：C2019202。本发明在羊胎儿皮肤成纤维细胞SFSFS的分离过程中分别采用含0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA...
- 吴锦艳尚佑军杜国玉候俊玲尚振华刘丹李玲霞康赛红
- 一种用于检测小反刍兽疫病毒的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒
- 本发明公开了一种用于检测小反刍兽疫病毒的TaqmanReal-timeRT-PCR试剂盒，包含扩增预混液、阴性对照、阳性对照以及序列SEQIDNO.1至SEQIDNO.2的扩增引物及SEQIDNO.3的探针引物的混合物。...
- 刘湘涛吴锦艳田宏陈妍尚佑军王光祥
- 文献传递
- 一种基于双峰驼抗山羊痘病毒VHH-4-1及用途
- 本发明提供了一种基于双峰驼抗羊痘病毒VHH‑4‑1及用途，属于生物技术领域，包含抗山羊痘病毒VHH‑4‑1，VHH‑4‑1的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明...
- 吴锦艳尚佑军田宏曹小安惠小婷关玉华王耀杰刘湘涛刘永生
