孙爱华
- 作品数：188 被引量：698H指数：13
- 供职机构：杭州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金国家自然科学基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌CysA2抗原的基因克隆、表达及在血清诊断中的应用
- 2013年
- 目的克隆并构建结核分枝杆菌CysA2基因原核表达系统,建立基于rCysA2的ELISA并检测rCysA2-ELISA在肺结核患者血清学诊断中的敏感性和特异性。方法采用PCR扩增CysA2基因,构建CysA2基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rCysA2表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCysA2,免疫印迹鉴定rCysA2的免疫反应性。以rCysA2为包被抗原,建立rCysA2-ELISA并用于检测132例血清抗体,其中涂片阳性和阴性肺结核患者血清分别占96例和36例,非肺结核肺部疾病病人血清抗体30例,健康对照血清50例。结果克隆的CysA2基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rCysA2表达量为细菌总蛋白的25.4%。提纯的rCysA2在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。rCysA2-ELISA检测涂片阳性和涂片阴性的肺结核患者血清抗体检出率分别为63.5%和61.1%,50例健康对照全部阴性、30例非肺结核肺部疾病患者1例呈现阳性,此方法的灵敏度为62.9%(83/132),特异性为98.8%(79/80)。结论本研究成功地克隆并构建了结核分枝杆菌CysA2基因及其原核表达系统。以rCysA2为包被抗原的rCysA2-ELISA方法有较高的灵敏度和很好的特异性,能有效检测涂片阴性患者血清抗体,rCysA2有望成为结核病血清诊断的有效候选抗原之一。
- 吴华军张佳皱洪兴王宇军孙爱华
- 关键词：结核分枝杆菌酶联免疫吸附试验血清学检测
- 临床专业(社区医学方向)生命科学课程设置的初步探讨被引量：1
- 2012年
- 以调查问卷形式,随机抽样调查6所社区卫生服务中心各科临床医师60人。结果显示,临床专业(社区医学方向)生命科学课程设置要以社区医院临床医师对知识点的实际需求为基础,辅以生命科学研究新进展;删繁就简,重点突出,实现生命科学各分支学科间的整合。
- 王黎芳张琦杜蓬孙爱华周海鸥谢月英
- 关键词：生命科学课程设置
- katG基因二个不同区域基因变异与结核分枝杆菌异烟肼耐药的相关性研究被引量：4
- 2011年
- 目的 分析结核分枝杆菌katG基因2个不同区域的基因变异，并确定与INH耐药的相关性。方法 从痰液分离并鉴定结核分枝杆菌耐INH菌株53株，用PCR扩增katG基因的2个区域：区域1为第1位密码子至150位密码子，区域2为第227位密码子至470位密码子，并分别测序。结果 3株对INH耐药但2个区域都不发生突变。14株区域1存在突变，其中5株只在区域1存在突变，5株在区域1出现缺失突变，并呈现高度耐药。点突变是区域2的主要特点，特别是S315位密码子，60．4％（32／53）S315发生突变，最常见的是S315N（AGC→AAC）（18株）；katG S315在高度INH耐药和低度INH耐药的结核分枝杆菌中突变率分别是84．4％（27／32）、15．6％（5／32），两组间差异有统计学意义（，=30．25，P〈0．01）。27株S315突变呈高度耐药，占S315突变菌株总数的84．4％，其余18株至少有一个非S315点突变的耐药株中高度耐药只有5株，占27．7％，两组间差异有统计学意义（X^2=16．02，P〈0．01）。对INH耐药的结核分枝杆菌区域2的突变发生率为84．9％。5株只在区域1存在突变，通过检测基因突变诊断INH耐药的检出率上升至94．3％。结论 S315突变发生率最高，突变类型和位置与耐药程度密切相关，分析区域1能使检出率提高9．4％。
- 李召东魏慧张艳陈瑜杜蓬孙爱华
- 关键词：异烟肼细菌蛋白质类
- 大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型及其诱导表达与抑制的研究被引量：5
- 2015年
- 目的了解浙江地区大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型及其携带模式、β-内酰胺类抗生素诱导β-内酰胺酶基因表达及组氨酸激酶抑制剂氯氰碘柳胺（CLO）抑制其表达的作用。方法采用微量稀释法和E—test检测大肠埃希菌临床菌株对β-内酰胺类抗生素耐药率和最低抑菌浓度（MIC）。采用PCR及其产物测序法检测大肠埃希菌耐药菌株β-内酰胺酶基因型及携带模式。采用实时荧光定量RT-PCR和β-内酰胺酶确证试验分别检测1／4MIC头孢噻肟或青霉素及CLO对大肠埃希菌耐药菌株6一内酰胺酶基因转录和表达的影响。结果浙江地区61．7％（285／462）大肠埃希菌对青霉素、氨苄青霉素、头孢西丁、头孢噻肟和头孢他啶耐药。285株耐药菌株中，TEM和CTX-M基因检出率（83．2％和75．1％）显著高于KPC、SHV和OXA基因（1．4％～10．2％）（P〈0．01），两种以上β-内酰胺酶基因携带率（68．8％）显著高于单基因（31．2％）（P〈0．01），其中61．4％菌株携带TEM＋CTX—M基因（P〈0．01）。除KPC基因外，1／4MIC头孢噻肟和青霉素能诱导89株β-内酰胺酶单基因菌株TEM、CTX．M、SHV和OXAmRNA水平迅速升高（P〈0．01），但可被50～500μg／ml CLO所抑制（P〈0．01）。100gg／ml CLO预处理后，82．8％～85．6％耐药菌株对上述抗生素敏感（P〈0．01），β-内酰胺酶检出率也从95．1％下降至16．1％（P〈0．01）。结论TEM和CTX．M是浙江地区大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型，并以TEM-1＋CTX．M为优势携带模式。低浓度头孢噻肟和青霉素可经细菌二元信号系统上调β-内酰胺酶基因表达，但可被组氨酸激酶抑制剂CLO所抑制。
- 谈潘莉汪浙炯孙爱华严杰赵金方
- 关键词：大肠埃希菌Β-内酰胺类抗生素
- 2005—2009年徐州地区341株肺炎链球菌耐药性分析被引量：6
- 2010年
- 目的了解近年徐州地区肺炎链球菌对不同抗生素耐药性的变化。方法采集徐州地区2005年至2009年341株肺炎链球菌临床菌株,二倍微量稀释法检测其对11种抗生素的最低抑菌浓度。结果 341株肺炎链球菌临床菌株对青霉素敏感（PSSP）145株、中度耐药（PISP）80株、高度耐药（PRSP）116株,分别占42.5%、23.5%和34.0%,从2005年至2009年耐药率由35.9%逐渐上升至77.8%。5年中,万古霉素未见耐药株;左氧氟沙星和氯霉素总耐药率分别为10.6%和12.9%;阿奇霉素、四环素和复方新诺明的耐药程度高,总耐药率分别为86.8%、85.9%和77.7%。145株PSSP对3代头孢菌素较敏感,耐药率仅为4.1%~8.3%,青霉素不敏感株（PNSP,包括PISP和PRSP）对3代头孢菌素耐药率为26.5%~58.7%。红霉素对PSSP与PNSP的耐药率分别为22.8%和91.8%。结论肺炎链球菌临床菌株对青霉素耐药率逐年上升,万古霉素、氯霉素和左氧氟沙星对肺炎链球菌临床菌株较敏感,阿奇霉素、四环素和复方新诺明的耐药程度高。
- 徐银海孙爱华
- 关键词：肺炎链球菌耐药性抗生素
- 幽门螺杆菌空泡毒素表达系统的构建及其鉴定
- 2003年
- 采用常规酚 氯仿法提取幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)临床菌株Y0 6株基因组DNA ,用PCR扩增空泡毒素 (vacA)基因 ,T A克隆后测序 ,亚克隆构建表达载体 ,采用Ni NTA亲和层析法提纯表达产物 ,SDS PAGE和Westernblot分别检测表达产物的分子量和免疫性。所构建的表达系统能表达vacA ,其产物可与相应抗体结合。重组vacA能有效地诱导家兔产生抗体 ,该抗体也能与重组vacA发生结合反应。
- 孙爱华严杰
- 关键词：幽门螺杆菌空泡毒素免疫性
- 浙江省杭嘉湖地区妇女宫颈人乳头瘤病毒感染情况分析被引量：11
- 2013年
- 目的 分析浙江省宫颈病变及宫颈细胞学正常的妇女宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染率及其基因型分布特点.方法 收集2010年1月至2012年12月在浙江省人民医院、杭州市红十字会医院、浙江省富阳市妇幼保健院和浙江医学高等专科学校基础医学部的经液基细胞学检查诊断为宫颈病变患者865例(宫颈病变组),并选择经液基细胞学检查宫颈细胞学正常的630名同期体检者为健康对照.采用导流杂交基因芯片技术(HybriMax)对所有研究对象进行21种HPV基因型分型检测,并采用x2检验或确切概率法比较两组HPV感染率及其21种基因型的检出情况.结果 宫颈病变组检出HPV阳性236例,阳性率为27.28％,健康对照组检出HPV阳性65例,阳性率为10.32％,二组HPV阳性率比较差异有统计学意义(x2=65.2,P＜0.01)).宫颈病变组HPV基因不同型别重叠感染60例,其中双重感染42例,三重、四重和五重感染分别有12例,5例和1例,重叠感染率为25.42％ (60/236)；健康对照组HPV重叠感染仅1例,重叠感染率为1.54％(1/65),二组重叠感染率比较差异有统计学意义(x2=18.0,P＜0.01).宫颈病变组共检测到321株HPV病毒株,19种HPV基因型,高危型、低危型和其他类型HPV分别占58.57％(188/321),35.51％(114/321)和5.92％(19/321),其中高危型HPV基因型检出率居前5位的分别为HPV-16,HPV-58,HPV-33,HPV-52和HPV-39；健康对照组共检出66株HPV病毒株,16种HPV基因型,检出率居前5位的分别为HPV-52,HPV-16,HPV-31,HPV-58和HPV-ep8304.结论 本地区宫颈病变妇女HPV感染率及重叠感染率明显高于宫颈细胞学正常的妇女,且以HPV-16,HPV-58,HPV-33,HPV-52和HPV-39等高危型HPV感染为主.
- 杨广宇徐美华崔卫东孙爱华
- 关键词：乳头状瘤病毒感染宫颈炎宫颈肿瘤基因型
- 抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其产物体外抗病毒活性的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗病毒活性。方法:采用基因工程技术构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量。采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法,提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK。采用CPE观察和MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抗IV-A3、CV-B4和RSV-E6株的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAllofer-on-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗病毒活性比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。该原核重组表达系统串联式表达的目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。25μg/ml的各Alloferon-1s均无明显的抗病毒作用,50μg/ml和100μg/ml的各Alloferon-1s有抗IV-A3和RSV-E6株作用且活性相似(P>0.05),但各Alloferon-1s均无抗CV-B4株的作用。结论:本研究成功地构建了串联表达Alloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗病毒活性。
- 孙琦孙爱华严杰
- 关键词：抗菌肽抗病毒活性
- 肺炎链球菌临床分离株喹诺酮耐药决定区突变与左氧氟沙星敏感性下降相关性研究被引量：2
- 2014年
- 目的分析杭州市肺炎链球菌临床菌株parC/parE和gyrA/gyrB喹诺酮耐药决定区（QRDR）突变,及与喹诺酮类药物敏感性下降的相关性。方法采用琼脂稀释法检测37株临床菌株对8种抗生素的最小抑菌浓度（MIC）,PCR法扩增目的基因并测序。结果对左氧氟沙星、莫西沙星和万古霉素全部敏感,其余抗生素耐药率都〉60%,对左氧氟沙星MIC≤1 mg/L和MIC=2 mg/L分别有21株和16株。所有菌株gyrA/gyrB的均无突变,其中3株parC/parE也未见突变;34株临床菌株parE有突变,其中10株同时存在parC基因突变,parE基因分别有33株和8株发生I460V和D435N突变,parC基因有8株发生S79F突变。MIC=2 mg/L的菌株中parC/parE基因同时突变、S79F和/或D435N突变明显高于MIC≤1 mg/L菌株（χ2=4.2～6.2,P〈0.05）。结论本地区未发现左氧氟沙星耐药肺炎链球菌株,parC/parE同时突变、S79F和/或D435N突变使左氧氟沙星MIC提高。监测临床菌株parC/parE和gyrA/gyrB突变情况,防止药物诱导耐药株的产生。
- 贺培园孙颜红张幼芳孙爱华
- 关键词：肺炎链球菌喹诺酮类耐药最小抑菌浓度
- 微生物学“革兰氏染色法”的说课设计被引量：5
- 2017年
- 说课可以强化课堂教学的效果,提高教师备课的质量,同时提升教师的职业素质。微生物学革兰氏染色法是药学专业学生最为常用的知识点。为了提高该课程的教学质量,本文从教学目标的确定、教学内容的处理、教学过程的设计、教学方法的运用以及教学效果的评价等5个方面对该内容进行了说课方案设计。
- 冀磊蒋锦琴孙爱华蔡大敏花扣珍
- 关键词：微生物学革兰氏染色法说课设计
