宋芹芹
- 作品数：38 被引量：50H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- BSL-2实验室开展SARS-CoV-2核酸检测过程中的生物安全管理被引量：5
- 2021年
- 目的:总结生物安全二级(bio-safety level 2,BSL-2)实验室开展新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核酸检测过程中的生物安全管理经验与效果。方法:检测样本来源于2020年2月21日到2020年11月5日送达中国疾控中心病毒病预防控制所病毒资源中心科室的人体咽拭子、鼻拭子、痰液、尿液、便液等。在遵循常规生物安全管理要求的基础上,在检测过程中积极进行人员、岗位、标本、过程、安全巡视等生物安全管理。结果:共开展了27692人次样本的SARS-CoV-2核酸检测,平均每天检测(2.32±0.11)批样本,每批平均检测(87.22±6.83)件样本,BSL-2实验室平均每天工作时间(3.43±0.23)h。在检测过程中未出现任何生物安全问题。结论:BSL-2实验室在长时间的SARS-CoV-2核酸检测过程中,要积极从多方面加强生物安全管理,从而保障检测工作安全有序进行。
- 夏志强杜海军夏冬梅国勇王文军王瑞芳宋芹芹宋娟王衍海韩俊
- 关键词：核酸检测
- 指环病毒6实时荧光定量PCR检测体系的建立与验证被引量：1
- 2019年
- 目的 建立指环病毒(Torque teno virus,TTV)6实时荧光定量PCR检测体系,并验证检测体系的敏感性与特异性。方法 根据GenBank中登录的TTV6基因序列设计引物与FAM-Eclipse探针,建立基于FAM-Eclipse探针法的实时荧光定量PCR检测方法,建立标准曲线并进行敏感性与特异性分析。结果 建立了能够特异检测TTV6的荧光定量PCR检测方法,标准曲线方程为y=-3.0921x + 28.36,扩增效率和R2分别为99.6%和1.000。该方法检测TTV6的敏感度为1.0×10拷贝/μl,与其他病毒无交叉反应。在临床呼吸道感染人群56份咽拭子样本中检出1例TTV6阳性。结论 基于FAM-Eclipse探针建立的检测TTV6实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强与灵敏度高等优点,可为临床上TTV6的检出与定量病毒含量提供了一种有效的手段。
- 夏志强宋娟刘宓宋芹芹刘一瑾郝鑫昊韩俊
- 关键词：实时荧光定量PCR敏感性特异性
- CVB32A蛋白酶抑制帽样结构依赖的蛋白翻译
- 2013年
- 目的探讨CVB3的蛋白酶2A对真核细胞帽样蛋白翻译和内部核糖体进入位点（IRES）翻译机制的影响。方法构建表达载体pcDNA3．1—2A，将此表达载体分别与pEGFP—N1、pGL3（F-luc）以及pIRES-GFP载体共转染细胞后，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，检测荧光素酶蛋白的表达。WesternBlot检测CVB3病毒和pcDNA3．1-2A对真核生物翻译起始因子4GI（eIF4GI）及多聚A尾结合蛋白（PABP）的影响。结果pcDNA3．1之A可以减少帽样依赖的GFP和荧光素酶蛋白的表达，但可以促进IRES依赖的GFP表达。CVB32A基因质粒转染和CVB3感染后，均可发现细胞内elF4G的切割现象；同时CVB3对PABP也有降解作用，而CVB32A基因转染对PABP无明显作用。结论CVB3的蛋白酶2A抑制真核细胞帽样途径蛋白翻译，促进IRES途径的翻译。
- 卢明枝宋娟孙鹏宋芹芹盛琳君王宝栋迟苗苗姚海兰李朝品韩俊
- 关键词：柯萨奇病毒感染蛋白激酶类核糖体
- EV71通过2A蛋白酶切割Nup62而抑制核转运被引量：6
- 2013年
- 为了解EV71病毒对细胞核转运机制的影响,本研究构建了具有核定位信号的绿色荧光蛋白表达载体(pG-FP-NLS)。将此表达载体转染细胞后,使用EV71病毒感染转染细胞,结果发现EV71病毒可以有效阻止绿色荧光蛋白的核转移。将EV71病毒的2A蛋白酶真核表达载体与pGFP-NLS共转染RD细胞,可以发现2A蛋白酶可阻止具有核定位信号的绿色荧光蛋白的核转移而使绿色荧光蛋白表达于细胞浆。为了进一步研究病毒阻止核转移的机制,病毒感染细胞或通过转染2A蛋白酶真核表达载体进行Nup62的Western blotting检测,结果显示病毒以及2A蛋白酶均可引起Nup62表达下降。证明EV71可通过2A蛋白酶切割Nup62从而抑制核转运。
- 张亚洲甘星宋娟孙鹏宋芹芹李公启盛琳君王宝栋卢明枝李灵敏韩俊
- 关键词：肠道病毒71型核转运
- 脑炎心肌炎病毒3C蛋白酶抗体的制备和检测
- 2021年
- 目的:制备脑炎心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)的3C蛋白酶抗体并检测抗体特异性反应位点。方法:构建原核表达载体pQE30-3C,将蛋白进行体外原核表达,免疫纯种BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,通过Western blot检测制备的抗体与3C蛋白结合的特异性,通过免疫荧光和Western blot检测抗体与EMCV病毒中表达的3C蛋白酶结合的特异性。原核表达具有不同抗原性的EMCV 3C的3个不同片段,并通过Western blot检测单克隆抗体与EMCV 3C蛋白酶不同片段的反应特异性。结果:单克隆抗体与原核表达的3C蛋白酶反应良好,通过Western blot可以检测到病毒中表达的3C蛋白,通过免疫荧光也可以检测到EMCV病毒中的3C蛋白。通过与3C片段的反应发现,单克隆抗体与C端反应,即抗体针对的是C端处的抗原决定簇。结论:成功制备EMCV 3C蛋白酶的抗体,能与原核表达的3C蛋白和病毒3C蛋白反应,且针对的是C端的抗原决定簇。
- 宋芹芹李公启韩俊
- 关键词：单克隆抗体
- 转染RNA拯救CVB3方法的建立
- 2024年
- 目的建立转染RNA拯救CVB3的方法,为优化CVB3的分离鉴定和体外培养提供技术参考。方法比较Qiagen 57704、Qiagen 52904和Trizol三种核酸提取试剂提取CVB3基因组RNA的效率及Lipofectamine 2000和Lipofectamine 3000两种转染试剂转染病毒RNA的效率;探究提取RNA时增加洗脱次数对病毒拯救效率的影响;比较使用HeLa细胞、Vero细胞和HEK293T细胞拯救CVB3的效率。由此确定转染病毒RNA拯救CVB3的最适条件。结果Qiagen 57704、Qiagen 52904、Tizol试剂盒提取RNA拯救病毒的噬斑数分别为13.33±1.53、150.00±15.00、1.67±0.58,三种方法提取CVB3 RNA拯救病毒RNA的效率差异具有统计学意义(F=268.920,P<0.001);Lipofectamine3000、Lipofectamine2000转染病毒RNA形成的噬斑数分别为74.50±3.00、22.00±5.00,差异具有统计学意义(P<0.01);HEK293T细胞培养病毒拯救CVB3的效率高于HeLa细胞和Vero细胞,三种细胞拯救病毒的拷贝数分别为6.09×10^(7)±8.00×10^(5)、5.18×10^(3)±6.17×10^(2)、0,差异具有统计学意义(F=17383.644,P<0.001),同时发现提取RNA时通过多次洗脱可以提高病毒拯救的效率。结论本研究成功建立了一种优化的转染RNA拯救CVB3的方法,选用Qiagen 52904核酸提取试剂盒、增加洗脱次数、使用Lipofectamine 3000转染试剂、HEK293T细胞转染等方法,可以有效提升病毒的拯救效率。
- 李梅王欣玲宋芹芹迟苗苗韩俊宋娟
- 关键词：柯萨奇病毒B3病毒分离转染病毒拯救
- 2021-2022年绵阳地区流感样病例样本中的鼻病毒特征分析
- 2024年
- 目的了解绵阳地区的流感样病例患者的鼻病毒(human rhinovirus,HRV)流行情况及病原特征。方法收集2021—2022年绵阳地区哨点医院呼吸道感染且诊断为流感样病例(influenza-like illness,ILIs)患者的咽拭子,采用实时荧光定量PCR技术对16种常见病原体进行检测。巢氏PCR扩增HRV阳性样本的VP4/VP2编码区基因。从GenBank数据库下载国内外各血清型代表株进行系统发育、一致性及氨基酸变异分析。结果共采集绵阳地区ILIs样本332例,病毒检出率为58.73%(195/332)。其中HRV阳性样本23例,检出率为6.92%(23/332),成功扩增出18条HRV流行株序列。经比对发现绵阳地区ILIs病例流行的HRV涉及13种血清型,分属于HRV-A(12种)、HRV-B(5种)和HRV-C(1种)3种基因型。同源性分析表明其核苷酸和氨基酸相对保守,但与参考株相比,HRV-A型和HRV-B型存在多处变异。结论HRV是2021—2022年绵阳地区ILI感染的病原体之一,以HRV-A型为主。
- 宫悦潘明陈果宋芹芹王衍海高晨夏志强王璐璐程迁宗可鑫韩俊
- 关键词：流感样病例鼻病毒病原特征遗传进化
- 肠道病毒71型抵抗I型干扰素诱导的抗病毒作用被引量：6
- 2012年
- 目的研究肠道病毒71型（EV71）抵抗I型干扰素（interferon，IFN）诱导的抗病毒作用。方法将1000U／ml的I型干扰素（α，β）加入HeLa细胞后，去除上清中的干扰素，感染带有GFP的重组单纯疱疹病毒（HSV-1）和EV71，观察GFP的表达和PCR检测HSV-1核酸，判断I型干扰素对HSV，1的作用。通过RT—PCR方法检测EV712A基因的表达从而判断EV71病毒的复制能力。结果I型干扰素（α，β）诱导HeLa细胞产生抗病毒蛋白而有效地抑制重组HSV-1GFP的表达和核酸扩增。而EV712A的RT—PCR结果证实EV71可在I型干扰素（α，β）作用后的HeLa细胞中有效增殖。结论I型干扰素（α，β）诱导产生抗病毒蛋白；EV71可在I型干扰素（α，β）诱导产生抗病毒蛋白的HeLa细胞中有效增殖。
- 崔雨宋娟宋芹芹孙鹏甘星李公启王克霞韩俊
- 关键词：肠道病毒属干扰素I型
- 《人间传染的病原微生物目录》中病毒部分的解读
- 2023年
- 为了更好的落实《中华人民共和国生物安全法》和《病原微生物实验室生物安全管理条例》相关规定,2023年8月国家卫生健康委发布通告国卫科教发〔2023〕24号,正式印发了《人间传染的病原微生物目录》(以下简称《目录》)。随着新的病原微生物不断出现,对现有病原微生物认识不断更新,以及实验室生物安全研究不断深入,原有的《人间传染的病原微生物名录》已不能够满足需求,因此颁布了《目录》。本文旨在详细解读《目录》中病毒部分,包括制定背景、原则、过程以及主要内容,以便更好的了解和认识《目录》。
- 高晨宋芹芹宋娟韩俊
- 关键词：病原微生物生物安全
- 2015-2021年江苏省徐州市住院儿童严重急性呼吸道感染病例鼻病毒感染分析被引量：2
- 2023年
- 目的了解2015—2021年江苏省徐州市住院儿童严重急性呼吸道感染(SARI)病例中病毒谱的构成,进一步探究人鼻病毒(hRV)的分子流行病学特征。方法使用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(RT-PCR)对咽拭子标本中的常见呼吸道病毒进行检测。巢式PCR法扩增hRV阳性样本的VP4/VP2区基因序列,构建系统发育树,并进行同源性分析。结果1663份标本中呼吸道病毒检出阳性641份(38.54%)。hRV的检出率位居第1位,为13.95%(232/1663)。2018年hRV的检出率明显较高(28.08%);呈现夏秋高峰的季节性流行特征。2020年后,hRV在1—6月的检出率明显降低,但7月后检出率迅速回升,且在3~6岁年龄组中明显上升,≥6岁组中明显下降。hRV的VP4/VP2区序列比对分析发现涉及29种血清型,以hRV-A组为主。结论hRV是2015—2021年徐州市住院儿童SARI病例中主要流行的呼吸道病毒,以hRV-A组为主要流行,血清型具有多样性。hRV的流行在2020年受到了短暂的抑制之后迅速回升,提示需要对hRV感染进行持续监测。
- 曹润冬朱人和宋娟夏冬宋芹芹夏志强刘宓杜海军韩俊高晨
- 关键词：呼吸道病毒鼻病毒系统发育分析同源性分析
