宗伟英
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：湖州市自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 定量PCR-Taqman探针法检测NS0宿主细胞残留DNA的方法学验证被引量：1
- 2019年
- 目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1内,线性良好(r2> 0. 99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL^-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L^-1;精密度良好(RSD≤30%);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。
- 武刚付志浩杨志行崔永霏张荣建宗伟英王兰
- 不同产地白薇中C21甾体皂苷的含量测定被引量：3
- 2014年
- 目的建立白薇中蔓生白薇苷A及白薇C21甾体总皂苷的含量测定方法,并测定其在不同产地蔓生白薇中的含量。方法以蔓生白薇苷A为指标,采用高效液相色谱法和可见分光光度法分别对蔓生白薇苷A及白薇C21甾体总皂苷进行含量测定。结果蔓生白薇苷A和总皂苷含量分别在0.23-2.53μg（r=0.999 7）及11.5-115μg（r=0.999 1）内线性关系良好,平均回收率分别为99.3%（RSD=2.68%）和99.7%（RSD=2.84%）。蔓生白薇苷A的含量以河南最高,山东最低;白薇C21甾体总皂苷则以山东最高,辽宁最低。结论此方法简便、稳定可靠,便于对白薇药材进行质量评价。
- 肖功胜王永兵雷辉宗伟英沈雯王滔席晓荣
- 关键词：白薇
- 蔓生白薇有效部位化学成分研究被引量：7
- 2014年
- 目的:研究蔓生白薇有效部位的化学成分。方法:采用乙醇提取,大孔树脂、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等手段进行分离纯化,通过波谱分析,结合文献对照,鉴定化合物结构。结果:从蔓生白薇有效部位中分离得到6个化合物,分别鉴定为:白前苷元C(Ⅰ)、24-甲基-5α-胆甾-7,22-二烯-3β,5,6β-三醇(Ⅱ)、丁香酸(Ⅲ)、3,4-二羟基苯乙酮(Ⅳ)、4-羟基苯乙酮(Ⅴ)、4-羟基-3-甲氧基苯乙酮(Ⅵ)。结论:其中,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ为首次从该植物中分离得到。
- 雷辉王永兵肖功胜宗伟英王滔
- 关键词：化学成分
