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苹果果实L-半乳糖脱氢酶cDNA的克隆及其RNAi载体的构建被引量：3: 2010年; 【目的】从"皇家嘎拉"苹果幼果外果皮中克隆L-半乳糖脱氢酶(L-galactose dehydrogenase,GalDH)cDNA,进行生物信息学分析并构建其RNAi植物表达载体,为该基因功能鉴定奠定基础。【方法】应用同源序列克隆法克隆"皇家嘎拉"苹果GalDH基因,并进行生物信息学分析;利用噬菌体同源重组原理构建其RNAi植物表达载体pMDR-GalDH,并导入农杆菌EHA105。【结果】通过RT-PCR扩增得到1条约1.1 kb的条带,序列分析表明,该片段长为1 111 bp,包含一个975 bp的开放阅读框,可编码324个氨基酸残基,包含有醛酮还原酶的保守结构域和3个跨膜螺旋结构,其理论上的等电点pI为5.44,蛋白分子质量为34.99 ku;聚类分析显示,苹果GalDH核苷酸与已知其他植物GalDH核苷酸的相似性均在95%以上,判断其为苹果GalDH基因cDNA全长,命名为MdGal DH(GenBank登录号为:GQ131419)。另外,通过RT-PCR获得GalDH基因保守区段,成功构建了其RNAi植物表达载体pMDR-GalDH。【结论】从"皇家嘎拉"苹果中克隆了GalDHcDNA的编码区全长,并构建了该基因的RNAi植物表达载体。; 高静尚增振王小华马锋旺梁东; 关键词：苹果基因克隆

一种从番茄果实中提取总RNA用于cDNA-AFLP分析的方法被引量：5: 2009年; 番茄果实富含的次生物质严重干扰其总RNA的提取,本试验采用4种方法对番茄果实总RNA进行提取,筛选出一种适合于番茄后续的cDNA-扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析的高质量RNA提取方法,该方法排除了蛋白、多糖、以及多酚等次生物质的干扰,总RNA得率高、完整性好、纯度高。通过cDNA-AFLP分析方法的检测,得到了一组条带清晰和多态性丰富的图谱。; 王天奎尚增振邹志荣王孝宣杜永臣; 关键词：番茄果实总RNA提取

阔叶猕猴桃果实GalDH cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：5: 2009年; 以猕猴桃属植物中果实维生素C含量最高的阔叶猕猴桃(Actinidia latifolia Merr.)果实为试材,经RT-PCR扩增获得约1.0kb的L-半乳糖脱氢酶cDNA片段。生物信息学分析表明,该cDNA片段长为997bp,最大开放阅读框为960bp,可编码319个氨基酸残基,命名为AlGalDH,GenBank登录号为EU525846,核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物GalDH核苷酸、氨基酸序列间的同源性分别在76%和70%以上,且具有醛酮还原酶的保守结构域。构建了其原核表达载体pET-AlGalDH并转化大肠杆菌BL21,经0.1mmol.L-1IPTG诱导,获得具有较高活性的表达融合蛋白6×His-AlGalDH。经Ni-His亲和磁珠分离纯化,获得单一的融合目的蛋白条带,测定其酶活为120pmol.min-1.mg-1。; 尚增振王小华马锋旺梁东; 关键词：克隆原核表达

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尚增振