张一琳
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
- 供职机构：宁夏医科大学检验学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-21靶向调控MAP2K3的表达及其对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响
- 目的构建能够高效抑制成熟miR-21小分子表达的腺病毒载体，探讨其对肝癌细胞株HepG2生长的影响，以期阐述miR-21在肿瘤形成过程中的分子机制，为临床肝癌治疗提供参考数据和新的思路。
方法（1）根据人miR-...
- 张一琳
- 关键词：MICRORNA-21重组腺病毒HEPG2
- 文献传递
- pri-miR-21重组腺病毒载体构建及其对TLR4基因调控的研究被引量：8
- 2012年
- 目的:构建能高效表达成熟miR-21小分子的腺病毒载体,探讨其对TLR4基因的靶向调控关系。方法:以正常小鼠基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-21基因,克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中经PCR、酶切及基因测序分析正确无误后,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒进行同源重组,并利用293A细胞,包装成pri-miR-21重组腺病毒感染HeLa细胞,通过Western blot检测TLR4的蛋白表达水平,验证miR-21与TLR4靶向调控的关系。结果:经PCR、酶切、测序及GFP表达证实,成功构建携带pri-miR-21基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。Western blot证实,miR-21可抑制TLR4蛋白的表达。结论:所制备的小鼠pri-miR-21重组腺病毒,可以高效表达成熟miR-21小分子,能够抑制靶基因TLR4的表达。
- 赵婧徐广贤贾伟董辉张一琳赵志军魏军
- 关键词：重组腺病毒载体靶向调控
- 结核分枝杆菌优势蛋白PPE37重组载体的构建及原核表达
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达。方法以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒。经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE及WesternBlot对表达产物进行鉴定。结果 PCR法扩增出约1600bp的条带。重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致。重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确。SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应。结论成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础。
- 张瑞芹汤建中贾伟魏军张一琳张一琳
- 关键词：结核分枝杆菌基因克隆原核表达
- BCG对小鼠RAW264.7巨噬细胞miR-203、miR-142-3p、miR-21表达的影响被引量：7
- 2013年
- 目的:检测卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)刺激巨噬细胞后miR-203、miR-142-3p、miR-21表达量的变化,为研究microRNA(miRNA)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌免疫应答中的调控作用提供依据。方法:利用浓度为1.0×107ml-1的BCG刺激培养的小鼠RAW264.7细胞,分别在4、8、12、24小时提取细胞small RNA,并利用相应的茎环反转录引物,反转录成cDNA,同时构建成熟miR-203、miR-142-3p、miR-21的T载体,绘制标准曲线,利用Real-Time PCR检测miR-203、miR-142-3p、miR-21的表达量。结果:BCG作用RAW264.7细胞4、8、12、24小时后,miR-21表达显著性上调(10倍以上,P<0.05),miR-142-3p表达显著性下调(20倍以上,P<0.05),miR-203在4、8、12小时表达下调(3倍以上,P<0.05),24小时后表达上调(2倍以上,P<0.05)。结论:BCG刺激RAW264.7巨噬细胞后,miR-203、miR-142-3p、miR-21的表达发生显著性变化,说明这些miRNA可能通过调控免疫相关基因在巨噬细胞抗结核分枝杆菌的免疫应答中发挥着重要的作用。
- 张兆波魏军汤建中赵志军张一琳张瑞芹徐广贤
- 关键词：MIRNABCGPCR
- 抑制miR-21表达的腺病毒载体构建、病毒包装及其对HepG2细胞的作用被引量：1
- 2012年
- 目的:构建能高效抑制成熟miR-21小分子表达的腺病毒载体,探讨其对肝癌细胞株HepG2的影响与机制。方法:基于miRNA sponge技术,合成一段与miR-21序列完全互补的8个重复片段,克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,经酶切、测序鉴定正确无误后,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒进行同源重组,转染至293A细胞中,包装成重组腺病毒感染HepG2细胞,通过Hochest33258染色、Western blot法及MTT试验检测细胞的凋亡与增殖水平。结果:经酶切、测序及GFP表达证实,成功构建了携带与miR-21互补的DNA片段的重组腺病毒。经Hochest33258染色、Western blot法及MTT试验证实,该重组腺病毒可以抑制HepG2细胞中miR-21的表达并抑制HepG2细胞的增殖,促进细胞的凋亡。结论:重组包装的抑制miR-21表达的腺病毒可有效的降低miR-21在HepG2细胞中的表达,抑制HepG2细胞的增殖。
- 张一琳汤建中刘宏鹏张兆波徐文锦魏军徐广贤
- 关键词：MIRNASPONGEMIR-21重组腺病毒
- 结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应。方法利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.coli BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒对重组蛋白进行纯化并复性。利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析。分别用浓度为100ng/mL、500ng/mL、5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24h、48h、72h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达量的变化。结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50kDa。经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2%,并成功的进行了蛋白复性。浓度分别为100ng/mL,500ng/mL,5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF-αmRNA的表达没有影响(P>0.05),而IL-6mRNA的表达上调(P<0.05);48h、72h后NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达显著上调(P<0.05)。结论成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应。
- 张瑞芹汤建中赵志军贾伟魏军张一琳张兆波徐广贤
- 关键词：结核分枝杆菌
- miR-21在巨噬细胞对MRSA感染过程中免疫应答的调控被引量：1
- 2012年
- 目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外感染模型,研究miR-21的生物学功能及其在巨噬细胞中对MRSA感染过程中的免疫应答调控机制,以期为临床提供更多关于MRSA感染的相关免疫应答信息,为临床治疗提供参考数据和新的治疗思路。方法利用前期冻存的高效表达成熟miR-21的重组腺病毒颗粒pAd/pri-miR-21感染小鼠巨噬细胞RAW264.7。利用MRSA感染已经侵染腺病毒颗粒pAd/pri-miR-21的细胞,建立感染模型,Real-Time PCR检测TLR4、NF-κB和IL-6 mRNA水平的表达。结果 miR-21可下调TLR4基因的表达,降低TLR/4Myd88/NF-κB下游分子NF-κB、IL-6的活性。结论证实miR-21对TLR/4Myd88/NF-κB信号通路具有负向调控作用,在MRSA感染的巨噬细胞的免疫调控中发挥着重要的作用。
- 徐广贤赵婧贾伟董辉张一琳魏军
- 关键词：重组腺病毒靶向调控
