张良滔
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
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- 组织中全基因组DNA甲基化的液相色谱-串联质谱分析被引量：6
- 2010年
- 建立液相色谱-串联质谱测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法。采用苯酚氯仿提取组织DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,用甲醇溶解,以液相色谱-串联质谱检测胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中DNA甲基化的水平。结果表明,胞嘧啶的线性范围为1～100μg·L^-1相关系数为0.997 4,相对标准偏差为0.70%～4.09%;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1～50μg·L^-1相关系数为0.994 8,相对标准偏差为0.60%～4.81%。胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为1 pg,日内相对标准偏差为1.86%～4.67%,日间相对标准偏差为3.72%～4.68%,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加样回收率为86.52%～105.14%。本研究所建立的方法检测组织中DNA甲基化程度,具有专一性强、操作简便的优点,能较好的满足全基因组DNA甲基化检测的要求。
- 张俊杰张立坚刘春安张良滔蔡春
- 关键词：DNA甲基化胞嘧啶
- 液相色谱-串联质谱分析组织中基因组脱氧核糖核酸羟甲基胞嘧啶水平被引量：3
- 2012年
- 5-羟甲基胞嘧啶通过阻止脱氧核糖核酸(DNA)甲基化转移酶1(DMNT1)甲基化胞嘧啶来影响DNA甲基化的程度。本文建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定组织中全基因组5-羟甲基胞嘧啶水平的方法。采用苯酚-氯仿提取组织DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,加乙腈-水(9∶1,v/v)溶解,用LC-MS/MS检测5-羟甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中5-羟甲基胞嘧啶的水平。结果表明,5-羟甲基胞嘧啶的线性范围为0.1～30 ng/mL,相关系数为0.996 9,检出限(信噪比为3计)和定量限(信噪比为10计)分别为0.057 ng/mL和0.090 ng/mL;日内相对标准偏差和日间相对标准偏差分别为5.13%和6.24%;加标回收率为90.24%～97.53%。用该方法检测了大鼠大脑组织DNA羟甲基化水平,平均结果为0.66%。该方法简便,重现性好,灵敏度较高,能满足全基因组5-羟甲基胞嘧啶定量检测的要求。
- 陈丽宇张立坚张良滔蔡春
- 关键词：液相色谱-串联质谱
- 结直肠癌中VIMENTIN基因甲基化的分析及基因组羟甲基化水平探讨
- [目的]建立液相色谱串联质谱(LIQUIDCHROMATOGRAPHY-TANDEMMASSSPECTROMETRY,LC-MS/MS)分析组织基因甲基化和基因组羟甲基化水平方法，用于分析结直肠癌患者肿瘤组织和癌旁组织V...
- 张良滔
- 关键词：结直肠癌肿瘤组织羟甲基化诊断标志物
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- 液相色谱-质谱法检测渔业养殖水中硝基呋喃及氯霉素药物被引量：10
- 2011年
- 建立了同时测定渔业养殖水中呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮及氯霉素等5种抗生素药物的超高压液相色谱-电喷雾电离串联质谱（UPLC-ESI-MS/MS）分析方法。水样用HLB萃取柱净化、浓缩后,洗脱液经氮气吹干,残渣用V（乙腈）∶V（水）=1∶1混合溶液溶解,以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相,经ZORBAX SB-C18色谱柱分离后,用串级质谱多反应监测模式做定性定量分析。该方法在0.5μg/L或1~40μg/L浓度范围内具有良好的线性,相关系数均大于0.996,检出限（S/N=3）为0.5~1μg/L,平均回收率为90.3%~104.2%,相对标准偏差为5.4%~10.0%。
- 张立坚张俊杰张良滔蔡春
- 关键词：硝基呋喃氯霉素渔业用水
- 超高压液相色谱-串级质谱分析渔业水中7种激素药物被引量：2
- 2012年
- 建立了同时测定渔业养殖水中氢化可的松、泼尼松、醋酸可的松、睾酮、甲睾酮、黄体酮及苯丙酸诺龙等7种激素残留药物的超高压液相色谱-电喷雾电离串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)分析方法。水样用HLB固相萃取柱净化、浓缩后,洗脱液经氮气吹干,残渣用乙腈-水(V:V=1:1)溶解,以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相,经ZORBAX SB-C18色谱柱分离后进行LC-MS/MS多反应检测模式作定性定量分析。方法在0.5～40μg/L或1～40μg/L范围具有良好的线性,相关系数大于0.997,检出限(S/N=3)为0.03～0.3μg/L,平均回收率为74.8%～113.0%,相对标准偏差为4.0%～16%。方法适用于渔业养殖水中7种激素的检测分析。
- 张立坚王秀季张良滔张俊杰蔡春
- 关键词：激素固相萃取渔业用水
- 建立高效液相色谱-串联质谱检测细胞内腺苷酸浓度的方法及其应用被引量：1
- 2013年
- 细胞内腺苷酸浓度变化是细胞能量代谢改变的感应器,建立高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内腺苷酸浓度的方法有助于监测药物对细胞能量代谢的影响.用含有Na-EDTA的高氯酸溶液超声裂解细胞.采用超高效HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以8 mmol/L N,N-二甲基己胺(DMHA)水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用正离子模式质谱检测,在多反应监测(MRM)模式下进行定性定量分析.结果表明,AMP、ADP和ATP分别在(0.1814～14.5164)μmol/L、(0.2342～18.7354)μmol/L和(0.2003～16.0260)μmol/L线性范围内具有良好的线性关系,其相关系数分别为0.9984、0.9964和0.9990.AMP、ADP和ATP的检出限(LOD,S/N>3)分别为1.9291、1.8794和166.5 nmol/L,定量限(LOQ,S/N>10)为1.9632、1.9672和185.6 nmol/L,且加标回收率为81.8%～107.8%,相对标准偏差小于7.55%.AMP、ADP和ATP的日内偏差(RSD)分别为6.16%、5.13%和7.66%,日间偏差(RSD)分别为6.36%、2.74%和6.77%.该方法快速、简单、灵敏,能满足细胞内AMP、ADP和ATP含量的检测要求.通过检测分析在不同浓度高良姜挥发油作用下人肺癌A549细胞内AMP、ADP和ATP含量变化,结果显示细胞总的腺苷酸水平和能荷呈浓度依赖性下降,且当浓度达到500 mg/L时ATP/TAN明显下降,而A549细胞中AMP/ATP比例水平呈浓度依赖性增加.这提示高良姜挥发油可通过影响细胞能量代谢抑制细胞增殖.
- 李宁张海涛罗辉张良滔熊勇贾振斌
- 关键词：高效液相色谱-串联质谱腺苷酸能量代谢高良姜
- DNA甲基化的LC/MS/MS分析
- DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，它在不改变基因组中碱基排序的情况下影响基因转录和表达，它涉及到个体发育，细胞增殖、分化和基因表达调控等多方面的生物学功能，与肿瘤的发生和发展密切相关[1]。DNA甲基化的准确检测对...
- 张俊杰张立坚张良滔刘春安蔡春
- 关键词：DNA甲基化表观遗传学基因转录
- 文献传递
- 亲水作用色谱法测定组织中全基因组DNA甲基化水平被引量：2
- 2011年
- 建立了亲水作用色谱（HILIC）测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法。采用苯酚-氯仿提取组织中的DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,经N2吹干后,加乙腈-水（9∶1,v/v）溶解,用Waters BEH HILIC柱进行分离,在277nm波长下检测胞嘧啶（Cyt）及5-甲基胞嘧啶（5-mCyt）含量。结果表明,以乙腈-10mmol/L甲酸铵溶液（94∶6,v/v）为流动相,流速为0.5mL/min,Cyt与5-mCyt分离较好,保留时间分别为2.6与3.1min。胞嘧啶的线性范围为1~900μmol/L,相关系数为0.999 9;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1~64μmol/L,相关系数为0.999 8。胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为54nmol/L（柱中为0.54pmol）,定量限为250nmol/L（柱中为2.5pmol）;在5~900μmol/L的添加水平下,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的平均加标回收率为94.7%~100.5%,相对标准偏差小于1.48%。用该方法检测了结肠癌组织中DNA甲基化水平,结果显示该癌组织中全基因组的DNA甲基化均值为4.0%。该方法快速、简单,稳定性好,灵敏度较高,能满足全基因组DNA甲基化的检测要求。
- 张良滔张立坚张俊杰刘春安蔡春
- 关键词：亲水作用色谱结肠癌
