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表达短ie-1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抑制作用被引量：9: 2008年; 为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性,根据BmNPV复制必需基因ie-1设计其相应的dsRNA,构建带有ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体piggyantiIE-Neo,结果显示:表达短ie-1 dsRNA的稳定转化Bm细胞,对BmNPV的增殖表现出抑制作用,但在病毒感染后期,由于病毒恢复增殖导致RNAi的效果被掩盖。通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点,结果显示:在转化细胞中,外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组。; 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕细胞 PIGGYBAC转座子

双元表达短dsRNAs的转化细胞/家蚕对BmNPV的抗性研究: 利用RNAi 技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性，构建了带有BmNPV ie-1、lef-1 dsRNA双表达盒的转基因载体piggyantiIE-lef1-Neo。结果显示：表达双元dsRNA的稳定转化B...; 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：转基因家蚕核型多角体病毒家蚕细胞转基因家蚕 PIGGYBAC转座子

表达短lef-1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抗性被引量：5: 2009年; 为了探讨RNAi抑制家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的效果,用带有lef-1dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo转染家蚕BmN培养细胞,通过G418(750～800mg/L)筛选,获得了稳定转化细胞系.病毒感染试验显示,稳定转化细胞的病毒感染率比正常细胞低53%、转化细胞形成的多角体数量为普通细胞中的2/3、细胞培养上清中的游离病毒减少了90%以上,表明病毒在转化细胞中的增殖受到明显抑制;半定量RT-PCR结果显示,转化细胞中病毒lef-1的转录水平仅为正常细胞的2/5～3/5,表明转化细胞表达的lef-1dsRNA抑制了病毒lef-1基因的表达.通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点,结果表明,在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组.; 鲁银松薛仁宇曹广力张鹏杰刘波贡成良; 关键词：RNA干扰家蚕核型多角体病毒培养细胞 PIGGYBAC转座子

RNAi提高家蚕对BmNPV的抗性及家蚕精细胞发育相关基因Achi功能的研究: 本研究构建了基于piggyBac转座子、表达有BmNPV复制必需基因ie-1和lef-1短片段dsRNA和双筛选基因(gfp和neo基因)的转基因载体piggyantiIE-lef1-neo。转染有该载体的稳定转化细胞在...; 张鹏杰; 关键词：家蚕减数分裂

表达短Lef-1 dsRNA转基因家蚕抑制BmNPV增殖的研究: 为了提高家蚕对核型多角体病毒（BmNPV）的抵抗能力，将带有lef-1 dsRNA 表达盒和neo 基因表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo 通过精子介导法导入蚕卵，经G418 和GFP 的双重筛选结合分子生物...; 叶秋霞薛仁宇曹广力张鹏杰潘中华郑小坚贡成良; 关键词：家蚕核型多角体病毒转基因抗性经济性状

表达短ie-lef1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抗性: 为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒（BmNPV）抗性,根据BmNPV复制必需基因ie-1,lef-1设计其相应的ie-1、lef1dsRNA,构建同时带有ie-1、lef1dsRNA表达盒的转基因载体piggy...; 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕细胞 PIGGYBAC转座子; 文献传递

表达短lef-1 dsRNA转基因家蚕对BmNPV的抵抗能力与主要经济性状被引量：7: 2011年; 为了提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抵抗能力,将带有BmNPV晚期表达因子基因(lef-1)dsRNA表达盒和新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo通过精子介导法导入家蚕卵,经G418和GFP双重筛选并结合分子生物学鉴定,证实获得了转基因家蚕。对G6代转基因家蚕2龄幼虫接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比正常家蚕(对照组)下降了10～30个百分点,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕A、B系统的定量PCR检测结果显示,2个系统体内的lef-1 mRNA转录水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。转基因家蚕的饲养成绩显示其全茧量、茧层量和茧层率等主要经济性状与正常家蚕无明显差异。; 叶秋霞薛仁宇曹广力张鹏杰潘中华郑小坚贡成良; 关键词：家蚕核型多角体病毒双链RNA 转基因家蚕经济性状

家蚕卵巢肿瘤基因Bmotu及其可变剪接被引量：3: 2011年; 已知卵巢肿瘤基因(ovarian tumor gene,otu)在果蝇(Drosophila melanogaster)卵巢发育过程中发挥极其重要的作用,该基因突变会扰乱卵子形成的正常过程。为探究家蚕(Bombyx mori)是否具有类似果蝇生殖发育相关基因otu的同源基因,以及基因存在的可变剪接形式,在电子克隆的基础上,应用RT-PCR从家蚕精巢组织中获得了4条不同长度的Bmotu cDNA片段(GenBank登录号:HQ831341,HQ831342,HQ999998,HQ831343),其中3条由于无义突变导致翻译提前终止;而从卵巢组织中仅获得了1条Bmotu cDNA片段,该片段序列与精巢中扩增的登录号为HQ831343片段序列的5'端相同。结果表明Bmotu基因存在可变剪接,且雌、雄之间的剪接方式可能存在差异。生物信息学分析发现Bmotu基因编码蛋白与果蝇Otu的结构类似,含有半胱氨酸蛋白酶结构域(Otu结构域)、Tudor结构域、脯氨酸基序。研究结果有助于进一步探讨家蚕生殖发育机制。; 薛高旭曹广力张鹏杰张瑶瑶薛仁宇贡成良; 关键词：家蚕生殖发育可变剪接

利用RNAi及转基因技术抑制BmNPV增殖的研究: RNAi，又称RNA干预或者RNA干涉，是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象。为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性，根据BmNPV复制必需基因．ie-1、lef-1设计其相应的dsRNA(...; 张鹏杰; 关键词：转基因技术核型多角体病毒细胞增殖家蚕; 文献传递

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张鹏杰