徐忠伟
- 作品数：74 被引量：181H指数：8
- 供职机构：中国人民武装警察部队后勤学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- RIPK3过表达对mTOR及其相关基因转录的调控作用被引量：2
- 2016年
- 目的探索受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)的下游信号通路。方法向实验组SH-SY5Y细胞内转染pCMV6-RIPK3质粒上调细胞内RIPK3的表达水平,对照组细胞转染相应的空载质粒。通过Western blot检测细胞内RIPK3的表达水平。3-(4,5-二甲基噻唑)[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl),MTT]实验获得2组细胞增殖曲线确定外源性RIPK3在细胞内具有的生物学活性。通过RNAseq检测2组细胞基因转录差异,并在生物通路分析(ingenuity pathway analysis,IPA)数据库中进行数据分析,获得RIPK3的下游信号通路及其中的关键分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)。采用微滴式数字化PCR(droplet digital PCR,ddPCR)对mTOR转录水平的差异进行验证。结果质粒DNA整合到细胞基因组内,Western blot提示外源性RIPK3在实验组细胞内稳定表达,MTT结果证明其在细胞内能够抑制细胞增殖。RNAseq及IPA分析结果提示过表达RIPK3能够导致mTOR转录水平发生上调,并对其下游的基因,包括固醇反应结合蛋白(sterol-response binding proteins,SREBPs)、p70核糖体S6蛋白激酶(p70ribosomal S6protein kinases,S6K)、真核生物起始因子4E结合蛋白(eukaryotic initiation factor 4E-binding proteins,4E-BPs)和ULK(unc-51-like kinase)激酶复合体的转录具有明显的调节作用。ddPCR实验结果中mTOR表达改变趋势与RNAseq基本一致。结论 RIPK3能够调控mTOR及其下游信号通路中SREBPs、S6K、4E-BPs和ULK基因转录水平,进而在神经系统生长发育和疾病进展中发挥重要作用。
- 张国禄程世翔徐忠伟衣泰龙涂悦张赛
- 关键词：神经母细胞瘤基因表达调控
- 二氧化硅通过激活线粒体和死亡受体途径介导小鼠RAW264.7巨噬细胞凋亡和极化的机制研究被引量：2
- 2017年
- 【目的】研究二氧化硅(Silica,SiO)粉尘对小鼠RAW264.7巨噬细胞凋亡和极化的作用及其发生机制。【2方法】实验分为小鼠RAW264.7巨噬细胞对照组和不同浓度SiO_2粉尘悬液染尘组,MTT法检测细胞存活率,最终选取0、50、100、200μg/ml 4个浓度进行后续实验,以0μg/ml浓度组为对照组;Hoechst33342/PI双荧光染色法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;免疫荧光和流式细胞术检测巨噬细胞极化标志分子CD11b和CD86的表达;Western blotting检测细胞凋亡及细胞免疫应答相关分子诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α、Bax、Bcl-2、Caspase 8、p38、p-p38、ERK、p-ERK、NF-κB蛋白的变化。【结果】MTT结果显示,与对照组相比,SiO_2粉尘可显著抑制RAW264.7巨噬细胞增殖活力,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);荧光双染色结果显示SiO_2粉尘可诱导巨噬细胞凋亡;流式细胞术分析显示SiO_2可引起巨噬细胞周期S期阻滞(P<0.05);巨噬细胞极化标志分子CD11b^+CD86^+的比例由3.28%上升到20.3%(P<0.05);与对照组相比,染尘组细胞iNOS、Bax、TNF-α、Caspase 8、p-p38、p-ERK、NF-κB蛋白表达升高,而Bcl-2表达降低(P<0.05)。【结论】SiO_2粉尘可通过线粒体和死亡受体途径介导RAW264.7巨噬细胞凋亡,同时通过激活MAPK信号通路促进巨噬细胞由M0向M1极化。
- 符蓉徐忠伟徐忠伟高宏生姚三巧
- 关键词：二氧化硅巨噬细胞
- RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化被引量：1
- 2016年
- 目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P<0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。
- 张国禄程世翔徐忠伟衣泰龙廖吉连涂悦张赛
- 关键词：低氧诱导因子1Α血管内皮生长因子A
- 利用质谱多重反应监测技术检测5、7、55型腺病毒方法
- 本发明为一种利用质谱多重反应监测技术检测5、7、55型腺病毒方法，其具体步骤包括：将腺病毒5型、7型、55型六邻体蛋白特异性肽段基因进行合成；进行标记肽段混合试剂的制备；确定诊断标志物的离子峰值；步骤进行试剂盒的配制；进...
- 徐忠伟朱文清江涛杨震赵爱源张妍邹爽王天添
- 文献传递
- 小鼠肾小球毛细血管及肾间质小血管扩张充血与蕨麻的关系
- 目的:探讨不同浓度的蕨麻提取物对小鼠肾组织结构的影响。方法:昆明小鼠40只,随机分为五组,每组8只。正常对照组用生理盐水灌胃,实验组小鼠用不同浓度的蕨麻提取物每日灌胃,一周后断颈处死。取肝组织用于常规病理检查。结果:实验...
- 刘亚敏徐忠伟刘燕青刘春蓉李雪华刘静谷彦军魏焕萍
- 关键词：肾小球充血
- 文献传递
- 层粘连蛋白促脐带间充质干细胞向成骨细胞分化与黏着斑激酶表达被引量：1
- 2011年
- 背景:目前对脐带间充质干细胞的研究集中在分离纯化及药物作用下诱导分化。分化过程中细胞外基质成分的作用及信号通路的关系的研究报道很少。目的:研究层粘连蛋白在脐带间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的作用与黏着斑激酶表达之间的关系。方法:取对数生长脐带间充质干细胞分为4组:层粘连蛋白诱导组:层粘连蛋白质量浓度分别为50,25,5,1mg/L;成骨诱导组:用成骨诱导液处理;复合诱导组:用层粘连蛋白和成骨诱导液处理。对照组:未用层粘连蛋白和成骨诱导液处理。连续培养4周。观察细胞形态、茜素红染色分析钙盐沉积,检测碱性磷酸酶活性,组织化学组化与Westenblot检测ERK1/2、P-ERK、黏着斑激酶的表达。结果与结论:①倒置显微镜下对照组比诱导组细胞胞体呈矮柱状、有短突起彼此相连,核圆形。②茜素红染色细胞形成红色,表现为阳性。复合诱导组比其他组要高、不同时间点比21d钙盐沉积明显增多(P<0.05)。③层粘连蛋白组碱性磷酸酶活性比对照组高、其诱导第7天后作用显著(P<0.05)。层粘连蛋白不同质量浓度组之间碱性磷酸酶活性,差异无显著性意义(P>0.05)。④组织化学组化鉴定ERK、P-ERK、黏着斑激酶表达均与对照比层粘连蛋白组表达增强(P<0.05)。⑤WestenBlot检测成骨诱导组与复合诱导组有ERK、P-ERK、黏着斑激酶蛋白表达,层粘连蛋白组与对照组无表达。结果提示,脐带间充质干细胞向成骨细胞分化过程中层粘连蛋白有促分化作用,层粘连蛋白上调信号转导蛋白黏着斑激酶、ERK、P-ERK表达。
- 扎拉嘎胡徐忠伟兰晓霞陈晓陈小义
- 关键词：间充质干细胞成骨细胞细胞分化层粘连蛋白黏着斑激酶
- 基于iTRAQ联合2D LC-MS/MS分析PM2.5对人类胎盘滋养细胞的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:利用蛋白组学方法初步筛选PM2.5通过影响人类胎盘滋养细胞造成不良妊娠率增加可能涉及的蛋白分子和生物进程。方法:用0、30、60、120和200μg/mL的PM2.5分别染毒HTR-8/SVneo细胞24 h与48 h后观察细胞增殖情况,最终确定以120μg/mL PM2.5染毒细胞24 h和48 h进行后续实验。提取胞内蛋白,酶解消化后,同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)标记联合二维液相色谱串联质谱(2D LC-MS/MS)技术分析肽段,鉴定HTR-8/SVneo细胞内的差异表达蛋白,并进行生物信息学分析。结果:120μg/mL PM2.5染毒24 h和48 h后的存活率分别为86.09%和52.36%,与对照组(0μg/mL PM2.5染毒组)相比,细胞存活率显著下降(P<0.05)。120μg/mL PM2.5 24 h染毒组和48 h染毒组细胞中分别鉴定出182个和486个差异蛋白,涉及细胞生物进程22条和217条。结论:PM2.5对HTR-8/SVneo细胞的影响涉及大量细胞生物进程的改变;iTRAQ联合2D LC-MS/MS技术是一种对染毒后细胞内差异表达蛋白高敏感度、高通量筛选的有效途径,为今后对PM2.5增加不良妊娠结局风险的深入机制研究奠定基础。
- 秦喆符锋徐忠伟侯海燕陈亚琼
- 关键词：空气污染物串联质谱法
- 血红素氧合酶-1与心血管系统的相关研究被引量：2
- 2016年
- 血红素氧合酶-1(NO-1)是细胞受到外界刺激后诱导性表达的一种分解血红素的关键酶,其通过激活p55/肿瘤坏死因子受体-1(Tumor Necrosis Factor Receptor-1,TNFR-1)、p38丝裂原活化激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3Kinase/Protein Kinase B,PI3K/AKt)等信号通路,抑制多种凋亡相关分子活性,发挥抗氧化、抗炎、抗凋亡、抗血栓与降压等作用,从而保护心血管系统,HO-1基因变异可能引起心血管疾病。
- 靳霄涵徐忠伟李玉明
- 关键词：血红素氧合酶
- PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨大气中的PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用。方法:采用0,30,60,120和200μg/m L5个浓度的PM2.5对HTR8-SVneo细胞染毒24 h,以0μg/m L浓度为对照组,其余浓度为不同剂量PM2.5染毒组,通过CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒测定细胞存活率;激光全息细胞分析及成像系统观察细胞3D形态及动态监测24 h内各组细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞生长周期;彗星试验检测细胞DNA损伤水平;活性氧簇(ROS)检测试剂盒测定细胞内ROS水平。结果:60,120和200μg/m L浓度组细胞存活率及增殖能力低于对照组(P<0.05或P<0.01);PM2.5可使HTR8-SVneo细胞的生长周期阻滞在G_2/M期(P<0.05或P<0.01);不同浓度PM2.5染毒组彗尾DNA百分比均高于对照组(P<0.01),且呈剂量依赖性。各浓度染毒组细胞中ROS的产生均高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:PM2.5对HTR8-SVneo细胞有一定毒性作用,造成DNA的损伤,阻碍细胞生长周期,这种毒性作用可能与氧自由基的产生增多有关。
- 秦喆侯海燕徐忠伟张利文韩斌吴思雨陈亚琼
- 关键词：空气污染物滋养细胞细胞毒性
- 哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响被引量：5
- 2010年
- 目的研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3mRNA和蛋白表达。结果哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05)。哇巴因0.1μmol·L-1与ECV304细胞作用24h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集。哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36h,[Ca2+]i和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5μmol·L-1时[Ca2+]i和ROS浓度的时间-效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36h时[Ca2+]i和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05)。逆转录PCR和Western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h后,胱天蛋白酶3mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关。
- 陈小义徐忠伟王娜徐瑞成
- 关键词：哇巴因内皮细胞细胞凋亡活性氧
