戴云杰
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中南大学资源加工与生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金更多>>
- 相关领域：生物学冶金工程更多>>
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌APS还原酶的表达、纯化及其性质鉴定被引量：3
- 2009年
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)中APS还原酶是硫同化途径的一个关键酶,其对硫酸盐的还原及硫化物的氧化具有重要调节作用。本文以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板,通过PCR扩增得到编码APS还原酶的cysH基因,与原核表达载体pLM1构建重组体,转化入大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5α中,测序正确后,加IPTG诱导表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的APS还原酶。由蛋白颜色和紫外分析,确定其含有一个[Fe4S4]簇作为活性中心。表达产物进行SDS-PAGE分析,证实分子量为28kD。酶活测定表明其具有将APS还原为亚硫酸盐跟AMP的功能。
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- 关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌克隆纯化
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌中硫氰酸酶和丝氨酸乙酰转移酶的表达、纯化及性质研究
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）是最常见的浸矿细菌，能够利用矿物中的铁与硫作为能源物质，化能自养，好氧嗜酸，革兰氏阴性菌。
硫氰酸酶是A.ferrooxidan...
- 戴云杰
- 关键词：微生物冶金嗜酸氧化亚铁硫杆菌
- 文献传递
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌铁硫簇组装机理初探
- 通过基因组分析发现在Acidithiobacillus ferrooxidans中存在ISC操纵子系统,其对于铁硫簇的生物合成及转移是必须的成分。其中含[2Fe-2S]簇的铁氧还蛋白在许多铁硫蛋白的成熟中起着重要的作用,...
- 柳建设郑春丽黄霞赵文杰张燕飞戴云杰
- 关键词：铁硫簇纯化
- 文献传递
- 嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氰酸酶的表达、纯化及其性质鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)硫氰酸酶是硫代谢中极其重要的酶,其作用主要包括氰化物的解毒,铁-硫蛋白的合成,以及硫胺、硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成,硫氰酸酶的研究对揭示生物冶金机理具有重要的推动作用。方法:以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板设计引物,通过PCR扩增得到编码硫氰酸酶的基因,目的基因片段与原核表达载体PLM1构建重组体,然后转入大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5a感受态中,基因测序正确后,重组质粒再转入E.coliBL21感受态中,加IPTG诱导蛋白表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的硫氰酸酶。结果:SDS-PAGE分析证实蛋白分子量为21kD,紫外可见光分析,确定硫氰酸酶中含有铁硫簇,酶活测定发现重组硫氰酸酶在体外不具有酶活性,可能与酶反应条件及信号肽的切断有关。结论:体外成功克隆,表达,纯化出重组体硫氰酸酶,其基本性质也得到阐述。
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- 关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌铁硫簇纯化
