朱建平
- 作品数：14 被引量：27H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家生猪现代产业技术体系建设项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 不同致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪体内不同时相PBMCs细胞的动态变化与分析
- 引言/目的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后可以引起机体出现急性感染期,其后又可以导致病毒的持续性感染,而高致病性PRRSV可导致猪体在急性感染期内死亡,为了揭示PRRSV在急性感染期内免疫逃避的分子机理,本研究...
- 王亚欣周艳君徐彦召童武朱建平姜一峰童光志
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定被引量：5
- 2011年
- 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,本实验根据 PRRSV HuN4 株基因组序列设计并合成 PRRSV 特异性引物,应用 RT-PCR 技术分6段扩增了 PRRS VHuN4 株全基因组 cDNA。将扩增的各个cDNA部分重叠片段分别克隆于 pBlueScriptⅡSK(+)载体中构建了感染性重组质粒 pHuN4。并在病毒 cDNA5'末端引入 sp6 启动子序列便于后期的体外转录获得病毒的转录本,在3'末段 Poly(A)尾引入 NotⅠ酶切位点用于线性化 pHuN4;此外,将 HuN4 基因组第14680位的A沉默突变为G产生一个 MluⅠ酶切位点作为鉴定拯救病毒的分子标记。pHuN4 通过酶切线性化后经体外转录及转染BHK细胞,并在 Marc-145 细胞中救获病毒。结果显示:救获的病毒能够在 Marc145 细胞引起明显的细胞病变;间接免疫荧光检测以及分子标记验证结果表明病毒拯救成功,而且拯救的病毒与亲本强毒生长曲线没有显著差异。利用拯救的第5代克隆病毒株对本动物进行致病性试验,结果显示实验猪在感染后第3d开始出现体温升高、厌食、消瘦等临床表现,发病率达100%,在感染后20d内陆续死亡,表明拯救的病毒保持了与亲本病毒株相一致的致病特征,以上研究证实我们成功的构建并获得 PRRSV 强毒 HuN4 株感染性克隆,为从基因水平上研究 PRRSV 的致病机制提供了技术平台。
- 张善瑞周艳君朱建平童武姜一峰童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性分子克隆
- 猪流行性腹泻病毒N基因的表达及抗原性分析被引量：10
- 2013年
- 为深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行检测,结果显示总阳性率为81.7%。进一步从部分样品中对PEDV的N基因进行克隆和序列分析,结果显示采集的临床样品中各分离株之间的氨基酸同源性高达99%以上,与代表性病毒株CV777的氨基酸同源性为97.4%～98.1%,表明目前流行的PEDV其N基因仍然相对保守的。同时,构建了重组表达载体pGEX-N,经诱导表达显示该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为81 ku,western blot分析结果表明该重组蛋白能够被PEDV阳性猪血清特异性识别。将纯化后的重组N蛋白作为包被抗原,对20份已知背景的临床猪血清抗体进行ELISA检测,结果显示有9份血清为抗体阳性,11份血清呈抗体阴性,与应用RT-PCR方法鉴定抗原的结果符合率为85%。本研究表达的重组N蛋白具有良好的抗原性,可以将其作为PEDV血清学诊断的候选抗原。
- 吴玉璐朱建平杨莘王亚欣徐彦召虞凌雪于海刘光清童光志周艳君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒重组N蛋白抗原性分析
- 表达猪瘟病毒E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒的研究被引量：3
- 2012年
- 为构建表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV),本研究首先利用高致病性PRRSV弱毒疫苗HuN4-F112株的感染性分子克隆作为平台,构建了一个在nsp2区有缺失的感染性分子克隆,命名为pHuN4-F112-△480-620。以pHuN4-F112-△480-620作为载体,采用突变PCR的方法将CSFV的主要保护性抗原E2基因1 bp～9 99 bp,1 bp～600 bp,1 bp～330 bp及256 bp～330 bp基因片段分别插到nsp2中aa 480～aa 620位氨基酸缺失编码区域。结果显示,插入完整E2基因或较大E2基因片段的重组PRRSV cDNA质粒均未能拯救出病毒,只有插入较小的E2基因片段(256 bp～330 bp)的重组病毒cDNA质粒成功地拯救出了重组病毒rPRRSV-F112-E2(256-330),拯救的病毒能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,而且生长速度明显高于其亲本病毒,间接荧光检测表明该重组病毒能够表达外源基因。
- 童武周艳君徐彦召姜一峰王亚欣张善瑞朱建平虞凌雪孙晶陈焕春童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸道综合征病毒猪瘟病毒感染性分子克隆重组病毒
- 不同致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪体内不同时相PBMCs细胞的动态变化与分析
- 为了揭示PRRSV在急性感染期内免疫逃避的分子机理，本研究采用高致病性PRRSV强毒HuN4株及其弱毒疫苗HuN4-F112株分别感染实验动物，分离试验感染猪的外周血淋巴细胞(PBMCs)，采用流式细胞分析的方法，对感染...
- 王亚欣周艳君徐彦召童武朱建平姜一峰童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染免疫逃避致病机理
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定
- 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性克隆，本实验根据PRRSV HuN4株基因组序列设计并合成PRRSV特异性引物，应用RT-PCR技术分6段扩增了PRRSV HuN4株全基因组cDNA。将扩增的各个...
- 张善瑞周艳君朱建平童武姜一峰童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性分子克隆特异性引物
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus PRRSV)是目前存在于我国猪群中的一种重要病原,尤其是发生变异后致病性增强的高致病性PRR...
- 张善瑞周艳君姜一峰朱建平童武童光志
- 文献传递
- 表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定被引量：5
- 2012年
- 以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆（rHuN4-F112）作为载体，将O型口蹄疫病毒（FMDV）VPl基因的421～480nt（141～160aa）和598～639nt（200～213aa）两优势保护性抗原表位串联成的目的基因，通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508～532位缺失区域，经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36h，将上清接种至MARC-145细胞中培养，并在MARC-145细胞中连续传代，拯救重组病毒。经RT-PCR扩增，MluI酶切及测序验证，结果表明插入的外源基因及人为突变的Mlu1分子标记都正确，说明重组病毒拯救成功，且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代，将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O／VPlep。rPRRsv-F112-O／VPlep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变，间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析，该病毒的TCID50=-log10-6.75／0．1mL，且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-Fll2（△508-532）相似，但明显高于rHuN4-F112病毒。
- 童武徐彦召周艳君姜一峰张善瑞王亚欣朱建平虞凌雪孙晶陈焕春童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒O型口蹄疫病毒感染性分子克隆重组病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒强/弱毒株感染PAMs细胞差异表达蛋白的鉴定
- 引言 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)目前仍然是我国养猪业的严重威胁,在PRRSV强、弱毒株之间存在着明显的致病性差异,但其机理尚不清楚.本研究我们将PRRSV强毒HuN4株和弱毒疫苗株HuN4-F 1...
- 朱建平王亚欣程群虞凌雪姜一峰周艳君童光志
- 利用反向遗传技术构建PRRSV基因工程标记疫苗及其初步应用
- 引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白2 (Nonstructural protein 2,Nsp2)含...
- 徐彦召周艳君姜一峰童武朱建平童光志
- 文献传递
