李维中
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 粉尘螨重组变应原Der f8的表达、纯化和免疫学鉴定
- 2014年
- 目的获得大量粉尘螨重组变应原Der f8蛋白,检测其免疫原性。方法合成粉尘螨第8组变应原(Der f8)基因,将其连接至pET-32a载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组Der f8蛋白,圆二色谱初步检测该蛋白二级结构,以粉尘螨过敏患者血清作为一抗,经免疫印迹法(Western-blotting)方法分析Der f8的免疫学特性。结果重组工程菌经IPTG诱导后,高效表达出Der f8蛋白,为可溶性蛋白。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子质量约为45ku。Der f8重组蛋白二级结构中,α螺旋34.5%,β折叠12.6%,无规则卷曲53.9%。表达产物经亲和层析纯化后,Western Blot印迹有明显条带显示。结论纯化后的Der f8具有较高的纯度和较强的免疫学活性,为粉尘螨过敏反应性疾病的特异性诊断和治疗及进一步的实验研究奠定了基础。
- 蒋聪利邬玉兰李维中肖小军杨平常刘志刚
- 关键词：粉尘螨
- 蚕蛹粗提浸液致敏小鼠哮喘模型的建立被引量：2
- 2014年
- 目的建立蚕蛹粗提浸液致敏Balb/c小鼠哮喘模型,检测分析蚕蛹粗蛋白致敏性。方法以Balb/c小鼠为模型实验动物,分为阴性组、阳性组。阴性组腹腔皮下注射生理盐水;阳性组腹腔注射蚕蛹粗提浸液致敏,连续3次,每次间隔1周。然后滴鼻激发1周每天1次。末次激发后24 h内进行气道高检测,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并对细胞进行分类、计数。检测特异性抗体(IgE)、细胞因子(IL-4、IL-10、INF-γ)以及肺组织病理变化等指标对模型的构建进行评价。结果阳性组的小鼠肺部病理改变明显,呈明显炎症病理改变,灌洗液中细胞计数明显升高,嗜酸性粒细胞明显升高(P<0.01),灌洗液IL-4、IL-10升高,INF-γ降低;阴性组各项指标均无升高。结论蚕蛹粗提浸液能使Balb/c小鼠发生致敏性哮喘,且致敏性强,建模成功,为以后相关过敏疾病防治奠定科研实验基础。
- 李维中詹政科杨成彬刘志强肖小军龚苗刘志刚
- 关键词：蚕蛹肺泡灌洗哮喘
- 粉尘螨第十六类变应原的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原(Der f16)的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中。扩增后,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切将目的基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌(E.coli BL21)中经IPTG诱导表达。表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性。结果以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物。重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE反应,而不与健康者血清中的IgE反应。结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白。
- 李维中王月明吴莹莹邬玉兰刘志刚
- 关键词：粉尘螨克隆纯化
- 蚕蛹粗提浸液致敏小鼠过敏模型建立
- 目的: 家蚕过敏是一种具有中国特色的职业性过敏与食物过敏,家蚕蛋白有较强的过敏原活性也是主要的过敏原。建立蚕蛹粗提浸液致敏BALB/ C小鼠肠道和哮喘模型;检测特异性IgE和IgG水平,脾细胞因子变化,肠道和肺部HE染...
- 李维中
- 文献传递
