公共文化服务平台

杨吉成: 作品数：424 被引量：1,063H指数：16; 供职机构：苏州大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学核科学技术农业科学更多>>

合作作者

Ad-IL-24联合DDP对A549细胞体外生长的影响: 2014年; 目的探讨白细胞介素24基因腺病毒载体(Ad-IL-24)联合顺铂体外对人肺腺癌的抑制效应及诱导人肺腺癌的细胞凋亡机制。方法用Ad-IL-24、DDP、Ad-IL-24联合DDP分别体外作用于A549细胞12h、24h、48h,采用CCK8法及流式细胞术(FCM)分别检测细胞增殖抑制率和细胞凋亡率。结果 Ad-IL-24作用于A549细胞48h后细胞增殖抑制率为27.7%,Ad-IL-24联合DDP作用于A549细胞48h后细胞增殖抑制率为45.2%;Ad-IL-24作用于A549细胞48h细胞凋亡率为22.9%,联合用药后细胞凋亡率为35.9%。结论 Ad-IL-24对A549细胞具有生长抑制作用,能引起A549细胞凋亡,联合DDP用药后效果更佳,Ad-IL-24具有化疗增敏效应。; 郭锦锦王少慧孙万邦杨吉成盛伟华缪竞诚; 关键词：腺病毒白细胞介素24 肺腺癌基因治疗

兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养被引量：3: 2002年; 目的　建立眼角膜、结膜细胞体外培养的方法。方法　采用组织块培养法培养兔眼角膜基质及结膜成纤维细胞。结果　结膜成纤维细胞在培养 10天以后可以形成单层细胞。眼角膜成纤维细胞在培养瓶中培养 2周后可形成单层 ;2 4孔板培养 3d后细胞贴壁生长旺盛 ,10d形成单层。结论　眼角膜、结膜成纤维细胞组织块培养法是可行的 ,但在 2 4孔培养板上眼角膜成纤维细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。; 张晓峰盛伟华杨吉成; 关键词：角膜结膜成纤维细胞细胞培养动物实验

hING4基因联合低剂量率γ射线治疗胰腺癌的实验研究: 苏成海田玥法逸华翟红彦桑士标谈佳卿杨吉成盛伟华谢宇锋

人IL-17F重组逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的稳定表达被引量：2: 2007年; 目的构建hIL-17F重组逆转录病毒载体并研究它在293T细胞中的表达。方法以测序验证的pUCm-T/hIL-17F为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(包括20aa信号肽序列,而且hIL-17F基因内EcoR I酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变,即AA T→AA C,均为Asn),并正向插入逆转录病毒载体pSIV-1后经PCR、双酶切和测序鉴定。将构建正确的pSIV-1/hIL-17F与辅助病毒载体pHIT456和pHIT60混合后,采用脂质体法共转染293T包装细胞,获得具有感染能力的成熟重组逆转录病毒感染293T细胞,经G418筛选获得阳性细胞株,并应用PCR、RT-PCR和dot-ELISA法检测hIL-17F目的基因在293T细胞中的整合、转录和表达。结果成功构建了hIL-17F基因内EcoRI酶切位点GAA T TC→GAA C TC同义点突变的重组逆转录病毒载体pSIV-1/hIL-17F,并在293T细胞中稳定表达。结论以逆转录病毒为载体感染的稳定表达rhIL-17F的293T转基因细胞株的首次获得,为进一步研究hIL-17F的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。; 谢宇锋盛伟华缪竞诚杨吉成; 关键词：逆转录病毒 293T细胞

VEGF165基因重组腺病毒载体的构建及其促血管形成作用: 2010年; 目的构建携带人血管内皮细胞生长因子165（VEGF165）基因的腺病毒表达载体（Ad—VEGF165），并观察其感染QBI．293A靶细胞后目的基因的表达及促进血管形成的作用。方法以含有VEGF165基因片段的pSV-K3-VEGF165质粒为模板，PCR扩增获得的VEGF165目的片段（XhoI、EcoRV）亚克隆至GFP标记的pAdTrack—CMV载体中构建重组转移质粒pAdTrack．CMV．VEGF165，行PCR、双酶切和DNA测序鉴定。将测序正确的pAdTrack—CMV．VEGFl65质粒经PmeI线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy．1共转化BJ5183细菌，获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1．pAdTrack-CMV．VEGF165（pAd．VEGF165），再经PacI线性化后用脂质体转染QBI．293A包装细胞，通过多轮扩增和氯化铯密度梯度离心纯化获得Ad．VEGFl65重组腺病毒。RT．PCR和ELISA检测腺病毒介导的外源性VEGFl65基因在QB｜．293A细胞中的转录和表达。将孵育8d的生长状态良好的鸡胚随机分成Ad空载体腺病毒组、Ad—VEGFI65重组腺病毒组、NS组。采用鸡胚尿囊膜（CAM）法检测VEGF165重组腺病毒促进尿囊膜血管形成活性。结果PCR、双酶切和测序鉴定结果证实成功构建了pAdTrack．CMV—VEGF165重组转移质粒，并获得了高滴度的Ad．VEGF165重组腺病毒，其病毒效价可达2×10^10pfu／mL。Ad-VEGFl65感染后，QBI．293A细胞中的VEGF165含量较QBI．293A细胞对照组和Ad空病毒感染组均明显升高（P〈0．05）。Ad-VEGF165组与Ad．空载体组和NS组比较，CAM三级分支血管生长更旺盛，毛细血管更丰富（P〈0．05）。结论成功获得了携带人VEGF165基因的腺病毒表达载体，具有明显的促CAM血管形成活性，为进一步开展VEGF165基因修饰干细胞的应用研究奠定了实验基础。; 贾红亮谢宇锋杨吉成盛伟华孙凌吕海涛; 关键词：腺病毒载体

VEGF165基因修饰外周血血管内皮祖细胞促进血管新生: 目的拟构建携带血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因的腺病毒载体,转染兔血管内皮祖细胞(EPCs),并观察靶细胞转染后目的基因的表达水平。方法(1)通过PCR法以pSV-K3-VEGF165质粒为模板扩增VEG...; 吕海涛韩莲花杨向军孙凌张建敏曹磊严文华谢宇锋盛伟华杨吉成李红霞

再生丝素膜对Ad-VEGF_(165)转基因成纤维细胞基因表达的影响(英文)被引量：5: 2008年; 背景:前期实验已证实再生丝素膜可促进pcDNA3.0-VEGF165转染的L929细胞表达血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)。目的:进一步观察再生丝素膜对经腺病毒介导的人VEGF(Ad-VEGF165)转基因成纤维细胞基因转录表达的影响。设计、时间及地点:对比观察细胞基因工程实验,于2007-11/2008-04在苏州大学细胞与分子生物实验室完成。材料:再生丝素膜由苏州大学材料工程学院李明忠教授提供。方法:将Ad-VEGF165腺病毒感染培养在再生丝素膜、聚氯乙烯膜及聚乙烯膜上的QBI-293A人胚肾和WI-38人胚肺成纤维细胞,以空载体Ad-GFP腺病毒和未接种病毒的PBS组为对照。主要观察指标:通过实时定量RT-PCR法检测不同材料对成纤维细胞VEGF mRNA转录的影响;ELISA法检测其对VEGF、血管生成素1、碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子表达的影响。结果:再生丝素膜组成纤维细胞VEGF mRNA呈高水平表达,但聚氯乙烯膜组转录水平明显下降(P<0.05)。再生丝素膜组Ad-VEGF165转基因293A细胞及WI-38细胞不仅目的基因VEGF细胞因子的分泌呈高水平表达,并可促使血管生成素1基因表达水平明显提高(P<0.05),而且再生丝素膜还可使成纤维细胞自身分泌的碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子呈现正常表达水平。结论:再生丝素膜不仅利于VEGF目的基因在成纤维细胞中呈现高效表达,并促进血管生成素1基因的表达,而且能维持成纤维细胞自身分泌的与组织损伤修复相关基因碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍化生长因子的正常表达。; 刘铁连谢宇锋盛伟华缪竞成单云波胡志清井莹莹贾红亮杨吉成; 关键词：血管内皮生长因子腺病毒转基因生物材料

双黄连对α2a-干扰素抗柯萨奇病毒的协同作用被引量：4: 2000年; 目的 :探讨双黄连对rIFN α2a抗柯萨奇病毒的影响。方法 :采用微量细胞病变抑制法在Wish和Vero细胞上进行双黄连、rIFN α2a及两者联用抗柯萨奇病毒 (CVB3 )的实验研究。结果 :两药联用抗柯萨奇病毒呈明显协同作用 ;0 .12 5mg·ml-1的双黄连可使干扰素 (rIFN α2a)在Wish和Vero细胞上抗柯萨奇病毒的效价提高 2 .5 8倍左右。结论 :该结果为临床中西医结合治疗柯萨奇病毒感染提供新的配伍。; 吕海涛杨吉成袁志昌盛伟华严文华; 关键词：双黄连

裂解型腺病毒Ad-E1A的构建以及体外对肝癌细胞的作用: 2010年; 目的构建Ad-E1A裂解型腺病毒载体,研究其对肝癌细胞的裂解作用。方法以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,用特异性引物PCR法扩增E1A基因,酶切后连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,用PmeI酶对pAdTrack-CMV-E1A线性化后,与pAdEasy-1共转化在BJ5183大肠杆菌中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A;再用PacI酶切对重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-E1A腺病毒子。在QBI-293A细胞中多轮感染后获得高效价的病毒。将Ad-E1A腺病毒感染SMMC-7721,并用MTT和流式细胞仪检测Ad-E1A对人肝癌细胞生长和细胞周期的影响。结果获得高滴度的重组裂解型腺病毒Ad-E1A。Ad-E1A感染SMMC-7721后,出现明显的细胞病变。Ad-E1A对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显抑制,48 h后效果明显。Ad-E1A可直接诱导SMMC-7721细胞的凋亡。结论裂解型腺病毒Ad-E1A构建成功并可以显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并在肝癌细胞中复制造成细胞裂解,诱导肝癌细胞的凋亡。; 周忆新谢宇锋叶震敏盛伟华杨吉成; 关键词：细胞凋亡 E1A SMMC-7721 肝癌细胞

IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因表达效率的对比分析被引量：2: 2010年; 目的：构建IRES及polyA-promoter介导人血管生成素-1（Angiogenin-1,Ang-1）和人血管内皮生长因子165（vascular endothelial growth factor165,VEGF165）双基因共表达的腺病毒载体,比较IRES与polyA-promoter不同表达模式及其对位于二者前后基因的表达效率和诱导兔角膜新生血管的形成功能,为今后构建双基因或多基因高效共表达载体提供实验依据。方法：以pAdTrack-CMV-Ang-1-IRES-VEGF165质粒为模板,PCR扩增人VEGF165及Ang-1基因片段,分别将其亚克隆至改建的pAdTrack-CMV-PolyA-promoter及pAdTrack-CMV-IRES转移质粒中,构建pTrack-CMV-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165、pTrack-CMV-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1、pTrack-CMV-VEGF165-IRES-Ang-1基因重组转移质粒,再与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中同源重组,然后经PacI线性化后转染QBI-293A人胚肾成纤维细胞（简称293A细胞）,收获腺病毒重组病毒子Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165及Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165在QBI-293A细胞中的转录,ELISA法分别检测不同腺病毒载体目的基因的表达量,比较分析Ang-1与VEGF165基因在IRES和polyA-promoter介导的不同腺病毒表达载体中的表达能力,及在同一腺病毒表达载体中前后不同位置的表达效率。并进一步于兔角膜缘注射Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165,Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,Ad-Ang-1-IRES-VEGF165,检测角膜新生血管的面积,并比较其诱导血管形成能力的差异。结果：测序显示Ang-1和VEGF165序列正确,不同重组腺病毒载体均获得成功包装,病毒效价可达2~5×1010pfu/m l,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165均能有效转录,ELISA法检测结果表明Ang-1、VEGF165基因不仅均能在细胞中有效表达,而且IRES介导的Ang-1及VEGF165基因,无论在IRES上游或下游,其表达量均低于polyA-promoter相同位置的Ang-1及VEGF165基因表达量,大约降低60%~70%左右,同时Ang-1/VEGF165在同一载体上、下�; 陈瑶缪竞诚韩亚丽盛伟华包婉蓉田丽娜张凤娟吕海涛杨吉成; 关键词：血管生成素-1 血管内皮生长因子 IRES

杨吉成

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

杨吉成

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈