林燕明
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：广东医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA前体慢病毒干扰A549细胞株蛋白激酶2a表达的载体构建及鉴定
- 2013年
- 目的构建针对蛋白激酶2a(casein kinase 2a,CK2a)基因的siRNA前体(short harpin RNA,shRNA)表达载体,鉴定CK2a基因干扰效率。方法体外设计并合成针对CK2a基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将人肺腺癌细胞株A549分为3组,病毒干扰组(CK组)将慢病毒颗粒以最适滴度感染细胞株A549,病毒空载组(NC组)将慢病毒颗粒空载体感染细胞株A549,阴性对照组(CON组)为未经任何处理的细胞株A549;检测各组CK2a的干扰效率。结果构建的慢病毒载体序列通过PCR、测序等鉴定证实与设计序列相同;实时定量PCR检测显示CK组A549细胞CK2amRNA表达率较NC组及CON组下降约80%;Western blotting显示CK组A549细胞表达CK2a蛋白量较NC组及CON组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制A549细胞株CK2a基因的表达。
- 张庆林燕明唐志沈湘吴爱兵杨志雄
- 关键词：慢病毒RNA干扰
- miR-494慢病毒表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 目的:构建miR-494基因的慢病毒表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增hsa-miR-494基因,用XhoⅠ、BamHⅠ双酶切携带EGFP的慢病毒载体pGIPZ,酶切产物电泳后回收约11kb的载体片段。使用DNA连接试剂盒中的Solution I将其与miR-494连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,PCR筛选正向阳性克隆,随后将选定的含有阳性克隆的单菌落摇菌,提取质粒并行酶切鉴定及对插入的miR-494测序,所构建载体命名为pGIPZ-miR-494-eGFP,获pGIPZ-miR-494-eGFP后按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产。将慢病毒颗粒以最适滴度感染人体肺腺癌细胞株A549,通过Aldefluor流式分选出带有目的基因和空载病毒的细胞,用Real-Time PCR检测感染效率。结果:目的基因与慢病毒载体连接成功。共转染293T细胞包装病毒与浓缩后滴度达1.02×108TU/ml,并转染到肺腺癌细胞株A549上,Aldefluor流式分选出的细胞后通过Real-Time PCR检测结果显示miR-494慢病毒表达载体感染的A549细胞miR-494表达高于对照组达10倍以上。结论:成功构建携带人miR-494基因的慢病毒表达载体pGIPZ-miR-494-eGFP,为相关后续研究打下了良好基础。
- 林燕明张庆唐志沈湘吴爱兵吴斌
- 关键词：EGFP慢病毒载体A549
- miR-135a在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨miR-135a在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)多药耐药中的作用。方法:收集2008年1月至2013年12月本院肿瘤科及呼吸内科就诊的48例SCLC患者外周血液标本,将其分为化疗敏感组(28例)和耐药组(20例),采用QRT-PCR法检测患者血液标本、SCLC敏感细胞株H69及耐药细胞株H69AR中miR-135a的表达,分析其与临床预后的关系,并应用miR-135a模拟物和抑制剂分别上、下调细胞株中miR-135a的表达,采用CCK-8法检测细胞对各种化疗药物(ADM、DDP和VP-16)敏感性的影响。结果:与化疗敏感组相比,miR-135a在化疗耐药患者血液标本中的表达明显增高[(2.174±3.981)vs(-1.963±3.750),P<0.001];在临床患者血液标本中,miR-135a的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05),与疾病的分期、化疗敏感性及患者的生存时间相关(均P<0.01)。miR-135a在H69AR细胞中的表达明显高于H69细胞[(7.841±0.392)vs(1.047±0.081),P<0.01];通过miR-135a抑制剂下调H69AR中miR-135a的表达能够显著增加细胞对化疗药物的敏感性,H69AR细胞对DDP、ADM及VP-16的IC50值明显下降[(247.09±11.55)vs(76.64±10.00)、(150.83±8.03)vs(40.72±5.06)、(436.63±61.19)vs(163.35±20.00);H69细胞转染miR-135a mimics后对化疗药物DDP、ADM和VP-16的IC50值明显增加[(18.58±1.37)vs(159.27±3.29)、(24.37±2.63)vs(129.19±2.64),(48.55±2.59)vs(359.87±2.92)μg/ml,P<0.01]。结论:miR-135a参与调节SCLC的多药耐药,下调miR-135a基因的表达可能增加细胞对化疗药物的敏感性。
- 苏文媚林燕明罗亮梁亚海刘美莲赖振南杨志雄梁荣
- 关键词：小细胞肺癌多药耐药
- MIR-494通过转录因子E2F1调控肺癌细胞周期的研究
- 目的：构建MIR-494慢病毒表达载体及探讨MIR-494对肺癌细胞株的增殖、侵袭、迁移等功能研究以及与E2F1的调控关系。
方法：⑴根据GENBANK提供的MIR-494基因的序列，设计一对含有BAMH/XHOⅠ酶切位...
- 林燕明
- 关键词：肺腺肿瘤细胞迁移基因表达病理细胞学
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