毕亮
- 作品数：10 被引量：41H指数：4
- 供职机构：贵州大学更多>>
- 发文基金：贵州省教育厅自然科学研究项目国家重点基础研究发展计划国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程理学医药卫生更多>>
- 烟草HrBP的研究与应用被引量：1
- 2012年
- 旨在进一步发掘HrBP在新农药创制和抗病品种选育等方面的价值,采用BLAST和Clustal X2软件对HrBP进行序列同源性分析,发现其序列较保守;采用PSIPRED Protein Structure Prediction在线服务器进行烟草HrBP二级结构预测,采用UCLDepartment of Computer Science进行HrBP跨膜结构预测,发现两种可能存在的跨膜方式;采用SWISS-MODEL、Phyre和CPH进行HrBP空间结构预测,发现以膜蛋白为模板进行模建的蛋白具有相似的空间结构;建立基于Real-time PCR的HrBP mRNA定量分析方法,其相关系数为0.999 6;通过ProtScale方法分析HrBP抗原指数,并获得序列特异性较高的多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法制备多肽,并由此制备多克隆抗体,采用Indirect-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,表明多克隆抗体可特异识别烟草HrBP。采用DIBA和Western blotting试验研究多克隆抗体对常见植物的抗原识别特性,发现多克隆抗体对这些植物的HrBP均有一定识别能力。此外,采用Real-time PCR和Indirect-ELISA等方法进行烟草各组织部位HrBP的表达量的研究,发现HrBP在各组织部位存在差异表达。
- 陈卓于丹丹郭勤刘家驹王贞超李向阳毕亮胡德禹杨松宋宝安
- 关键词：生物信息学分析基因克隆表达多克隆抗体制备
- 毒氟磷防治南方水稻黑条矮缩病药效研究被引量：12
- 2011年
- 为明确自主创制新抗病毒药剂——30%毒氟磷WP对南方水稻黑条矮缩病的防控效果以及探讨防治该病的理想药剂组合,采用喷雾施药法对30%毒氟磷WP、25%吡蚜·噻虫嗪SC、10%醚菊脂MG、8%宁南霉素AS的单用或混用处理进行研究。结果表明,在大田分蘖初期,以25%吡蚜·噻虫嗪SC375mL/hm2和30%毒氟磷WP990g/hm2的药剂组合的防治效果最好,防效为66.67%,25%吡蚜·噻虫嗪SC、10%醚菊脂MG、30%毒氟磷WP和8%宁南霉素AS的防效分别为50.51%、33.33%、33.33%、17.12%;在收割期,以25%吡蚜·噻虫嗪SC375mL/hm2和30%毒氟磷WP990g/hm2的药剂组合的防治效果最好,防效为73.24%,25%吡蚜·噻虫嗪SC375mL/hm2、10%醚菊脂MG450g/hm2、30%毒氟磷WP990g/hm2和8%宁南霉素AS750mL/hm2处理组的防效依次是46.48%、45.07%、43.66%、42.25%。同时,测产试验结果表明:与CK相比,增产效果最明显的是25%吡蚜·噻虫嗪SC375mL/hm2和30%毒氟磷WP990g/hm2组合,增产值为292.35%,而25%吡蚜·噻虫嗪SC、10%醚菊脂MG、30%毒氟磷WP和8%宁南霉素AS的增产值为249.75%、230.7%、208.65%、104.7%。因此,为有效防治南方水稻黑条矮缩病,可采用本研究中的杀虫剂和抗病毒剂的联合处理,特别是在秧田期用药。
- 陈卓李国君范会涛刘家驹毕亮杨松宋宝安胡德禹
- 关键词：农药南方水稻黑条矮缩病
- EDS1多肽抗体的制备和应用被引量：1
- 2011年
- EDS1蛋白是植物寄主SA信号转导通路中具有重要调控功能的蛋白,为获得效价高和选择性强的EDS1抗体,根据NCBI GenBank中报道的EDS1蛋白一级结构信息,采用Blastn、Blastx和ExPASy等生物信息学软件进行序列同源性分析,获得三段序列特异性较高的多肽,并从中优选一段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽,采用HPLC和GC-MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达89.37%,目的多肽分子量为1978.33。采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原——Pep-KLH,并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体,采用间接-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经间接-ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带,其相对分子量为70kD,与预测分子量相符,表明利用该方法制备的EDS1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度。
- 陈卓刘开兴于丹丹刘家驹王贞超李向阳毕亮胡德禹杨松宋宝安
- 关键词：多肽合成多克隆抗体
- NPR1多肽抗体的制备和应用被引量：6
- 2012年
- 根据NCBI GenBank中报道的NPR1一级结构信息,采用Blastn、Blastx、ExPASy和Protean等软件进行序列同源性和抗原性指数分析,获得三段序列特异性较高的多肽,并从中优选一段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽,采用HPLC和LC-MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达88%、目的多肽分子量为1.92234 kD。采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原Pep-KLH,并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体,采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带,其相对分子量为65 kD,与预测分子量相符,表明利用该方法制备的NPR1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度。
- 陈卓刘家驹毕亮李向阳胡德禹于丹丹王贞超杨松宋宝安
- 关键词：多肽多克隆抗体
- 病程相关蛋白-1a多克隆抗体的制备与应用
- 2012年
- 为获得效价高和选择性强的PR-1a抗体。根据NCBI GenBank中普通烟PR-1a一级结构信息,采用Blastn、Blastx和Expasy等软件进行序列同源性分析,获得1段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得目的多肽,采用HPLC和LC-MS测定目的多肽的浓度和分子量。结果表明:目的多肽纯度达93.92%、分子量为2088.17;采用碳化二亚胺法制备获得Pep-KLH,并通过免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,采用间接-ELISA和Western blotting测定其抗体效价和特异性,结果表明:抗血清在1:32000条件下,抗血清的吸光值(OD)约为1.0;经Westernblotting试验表明:抗血清和多克隆抗体可特异性识别烟草叶片组织内的PR-1a;同时,试验采用系统性获得性的免疫激活剂-BTH作用普通烟K-326,对作用后的0、6、12、24、48、76、144、96h的烟草叶片总蛋白进行间接-ELISA,发现:BTH作用普通烟K-326144h后,PR-1a蛋白表达呈上调趋势;同时采用半定量RT-PCR试验也同样证实了BTH可诱导PR-1a基因表达上调,其表达上调趋势与间接-ELISA的研究结果相似。表明采用该方法制备的PR-1a多肽抗体具有较高的特异性和灵敏度,可用于免疫诱导剂等方面的研究。
- 陈卓刘开兴刘家驹王贞超毕亮李向阳杨松宋宝安
- 关键词：多肽合成多克隆抗体
- 25%吡蚜·噻虫嗪悬浮剂对环境生物的毒性与安全性评价被引量：4
- 2011年
- 采用《化学农药环境安全评价试验准则》规定的方法,对25%吡蚜·噻虫嗪悬浮剂进行环境生物—鱼、蜂、鸟、蚕的急性毒性测定。结果表明,25%吡蚜·噻虫嗪悬浮剂对鱼96h的LC50值为60.2mg/L,对蜂48h的LC50值为2.16mg/L,对鸟7d的LD50值>1000mg/(kgav.),对二龄期家蚕96h的LC50值为28.6mg/L。提示25%吡蚜·噻虫嗪悬浮剂对鱼类、鸟类的毒性为低毒,对家蚕的毒性为中毒,对蜜蜂的毒性为高毒。
- 范会涛毕亮陈卓李向阳刘家驹杨松胡德禹薛伟
- 关键词：环境生物急性毒性安全性评价
- 病氰硝与烟草花叶病毒交联的晶体学探讨
- 以病氰硝和TMV为材料,研究了病氰硝对烟草花叶病毒(TMV)的体外交联时的结晶作用.通过波谱法发现加入病氰硝的TMV外壳蛋白的发生荧光淬灭,并发生红移,表明病氰硝的作用靶标可能在外壳蛋白上.将病氰硝与TMV按一定的比例交...
- 李向阳金林红宋宝安杨松陈卓王贞超范会涛毕亮刘家驹胡德禹
- 关键词：烟草花叶病毒交联靶标
- 一种新型手性含苯并噻唑基团的β-氨基酸衍生物诱导烟草抗TMV作用的研究
- 2012年
- 通过半叶枯斑法筛选得到一个抗TMV具有较好活性的新型手性含苯并噻唑基团的β-氨基酸化合物A,western blot实验验证该化合物喷雾处理烟草叶片可诱导烟草获得对TMV的抗性。将该化合物手性拆分后,将相同浓度的不同构型化合物处理烟草K326,并测定体内防御酶系的变化。结果表明:所有构型的化合物处理烟草均能使宿主体内的PAL、POD、SOD活性不同程度提高,表明化合物可诱导烟草对TMV的抗性,提高烟草的免疫能力,同时不同构型对活性的影响不明显。
- 毕亮李为华陈卓
- 关键词：手性化合物苯并噻唑诱导抗性烟草花叶病毒
- 含1,2,4-三唑-5-硫酮席夫碱的新型1,2,4-三唑并[1,5-a]嘧啶衍生物的合成及生物活性研究被引量：11
- 2012年
- 以2-苄硫基-5-甲基-7-羟基-1,2,4-三唑并[1,5-a]嘧啶为原料,经醚化、肼解、成盐、关环和席夫碱反应合成了20个新型的含1,2,4-三唑-5-硫酮席夫碱的1,2,4-三唑并[1,5-a]嘧啶类化合物,通过IR,1H NMR,MS和元素分析对所合成的化合物进行了结构表征.初步生物活性测试结果表明,部分化合物表现出一定的抑菌或较好的抗烟草花叶病毒(TMV)活性.在500μg/mL浓度下,化合物6b,6f和6p对TMV的抑制率分别为41%,43%和40%.
- 熊启中林选福刘军虎毕亮鲍小平
- 关键词：生物活性
- 2-氰基-3-(4-甲基苯并[d]噻唑-2-氨基)-3-苯基丙烯酸酯类化合物的合成及抗病毒活性被引量：10
- 2011年
- 以氰乙酸乙酯(氰乙酸)为起始原料,经酯化、缩合、氯化,然后与2-氨基-4-甲基苯并[d]噻唑反应,合成了20个新化合物4.所有化合物结构经过IR,1H NMR,13C NMR和元素分析确证.初步生物活性测试表明:在500μg·mL-1浓度下,该类化合物4具有一定的抗黄瓜花叶病毒(CMV)及抗烟草花叶病毒(TMV)室内活体治疗活性,其中化合物4b,4o,4q对CMV具有较好的活体治疗活性(抑制率分别为45.81%,43.20%,43.09%),化合物4d,4f,4h,4l对TMV具有较好的活体治疗活性(抑制率分别为45.68%,45.19%,45.86%,44.32%),对照药宁南霉素的活体治疗活性分别为56.31%,54.63%.
- 李娜魏学范会涛毕亮李向阳杨松胡德禹宋宝安
- 关键词：抗病毒活性
