满在伟
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 过量表达钝齿棒杆菌柠檬酸合酶编码基因prpC2对L-精氨酸合成的影响被引量：3
- 2015年
- 钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5是诱变选育的一株高产精氨酸菌株。柠檬酸合酶作为TCA途径的关键酶,对细胞胞内氨基酸代谢流调节有重要作用。在钝齿棒杆菌SYPA5-5中过量表达同源的柠檬酸合酶(citrate synthase)基因prp C2,研究其对精氨酸及副产物合成的影响。重组菌C.crenatum SYPA5-5/p DXW-10-prp C2胞内柠檬酸合酶比酶活提高了5.37倍,使L-精氨酸产量在5L发酵罐中达到44.7g/L,与对照相比提高了23.1%。同时,有机酸测定分析TCA循环的精氨酸前体柠檬酸及异柠檬酸的量有所提高,且赖氨酸合成前体草酰乙酸量减少,氨基酸测定分析L-精氨酸发酵中最主要的副产物L-赖氨酸浓度由原来的5.96g/L降到1.21g/L,降低了80%。
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- 关键词：L-精氨酸钝齿棒杆菌柠檬酸合酶发酵
- 优化搅拌转速控制策略提高Bacillus subtilis RF1发酵生产核黄素的产量
- 通过恒定搅拌转速实验，发现在发酵初始阶段较低的搅拌转速有利于菌体生长和核黄素生成，而在发酵后期较高的搅拌转速有利于菌体生长和核黄素生成。在此分析基础上提出两阶段搅拌转速控制策略，即发酵前26h搅拌转速维持在600rpm，...
- 满在伟徐美娟饶志明
- 关键词：核黄素发酵生产搅拌转速优化设计
- 文献传递
- 理性设计定点突变提高Streptomyces kathirae SC-1酪氨酸酶热稳定性被引量：1
- 2017年
- 利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟。使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠自由能变化(ΔΔG)来辅助设计提高酪氨酸酶的稳定性,利用定点突变构建突变体,并且在大肠杆菌中对野生型酪氨酸酶及突变体进行表达,最终获得了两个热稳定性提高的突变体R95Y、G123W。在此基础上进行复合突变,获得了一个热稳定性显著提高的突变体R95Y/G123W。该突变体在60℃的半衰期提高了2.43倍,最适反应温度由45℃提高到50℃,本研究所用的基于蛋白质结构的理性设计提高稳定性的策略也可以应用于其他工业酶类,显示了良好的应用前景。
- 郭静饶志明杨套伟满在伟张显徐美娟李星
- 关键词：酪氨酸酶氢键定点突变热稳定性
- 一种新型抗性质粒的构建及其在核黄素生产菌中的运用被引量：2
- 2015年
- 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis RF1是课题组前期通过基因工程改造得到的一株核黄素高产菌,为了进一步提高核黄素的产量,需要对该菌株进行进一步的基因工程改造.本研究首先将编码的链丝菌素乙酰基转移酶基因sat克隆到pMA5质粒上,构建具有诺瓦丝菌素Norseothricin(NTC)抗性的重组质粒pMA5-sat,实验证实该重组质粒能够用于B.subtilis RF1的抗性筛选.随后将核黄素合成相关的关键酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶编码基因zwf克隆到重组质粒pMA5-sat上,获得重组质粒pMA5-sat-zwf,并成功构建重组菌B.subtilis RF1/p MA5-sat-zwf.结果显示,重组菌胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活力比原始菌提高了近50倍,说明葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在重组菌中成功过量表达;根据发酵特性分析,重组菌B.subtilis RF1/pMA5-sat-zwf最终核黄素产量达到12.01 g/L,比原始菌B.subtilis RF1提高了30.3%.综上,本研究构建的新型抗性质粒能够成功运用于核黄素生产菌枯草芽孢杆菌的基因工程改造.
- 程毅鹏饶志明杨套伟满在伟徐美娟张显
- 关键词：枯草芽孢杆菌核黄素葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
- 钝齿棒杆菌丙酮酸激酶的克隆表达及其对精氨酸合成的扰动影响被引量：3
- 2014年
- 钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA 5-5是诱变选育的一株高产精氨酸菌株。丙酮酸激酶(pyruvate kinase)是EMP途径的限速酶,对胞内能量产生和代谢流调节方面都有重要作用。为提高葡萄糖消耗速率以缩短发酵周期,以钝齿棒杆菌基因组为模板,克隆得到pyk基因并将其在C.crenatum SYPA 5-5中成功表达,葡萄糖平均消耗速率为1.71 g/L/h较C.crenatum SYPA 5-5提高33.5%,精氨酸产量和最大产率分别为43.32 g/L和0.55 g/L/h较C.crenatum SYPA 5-5分别提高20%和19.5%。结果表明,加强表达丙酮酸激酶能增强EMP途径,提高精氨酸产量。
- 卢妍饶志明徐美娟满在伟张显耿燕许正宏
- 关键词：丙酮酸激酶
