潘京
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蚊虫细胞与蚊虫组织中登革病毒受体分子筛选与鉴定
- 登革病毒是世界100多个国家尤其是热带和亚热带地区重要的虫媒传染病毒，近乎25-30亿人处在潜在感染登革病毒的危险中，每年估计有1亿的新增感染者，导致约24000人死亡。目前并无有效疫苗和抗病毒药物治疗。登革病毒属于黄热...
- 潘京
- 关键词：登革病毒
- 登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的作用被引量：3
- 2013年
- 目的构建含有登革Ⅱ型病毒(DENV-2)前膜蛋白(prM)基因反向重复序列(irRNA)的重组质粒,评价其抑制病毒复制的效果。方法 DENV-2接种乳鼠,提取总RNA,在正义和反义引物两端分别加上XhoⅠ和EcoRⅠ的识别位点,将经RT-PCR扩增的prM全长基因片段插入pcDNA3.1(+)中,形成含有prM反向序列的重组质粒pcDNA-asprM;于另一对正义和反义引物两端引入酶切位点NheⅠ和BglⅡ,经RT-PCR扩增prM全长基因片段插入pMD18-T-vector中,形成含有正向序列的重组质粒pMD18-T-prM。限制性内切酶NheⅠ和KpnⅠ分别酶切重组质粒pMD18-T-prM和重组质粒pcDNA-asprM,得到片段prM和线性化载体pcDNA-asprM,连接构建成含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。筛选的阳性重组质粒pcDNA-irRNA用脂质体法转染至BHK-21细胞中,半定量PCR和实时荧光定量PCR分析评估该质粒抑制登革病毒复制的效果。结果成功构建具有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。经转染pcDNA-irRNA的实验组与未转染质粒阳性对照组相比,半定量PCR结果显示DENV-2攻击96 h后NS3的mRNA表达水平下降28%;实时定量PCR分析显示,DENV-2攻击72 h后实验组病毒拷贝数比阳性对照组少1.44倍,攻击96 h后实验组的NS1表达量明显低于阳性对照组(P<0.05)。结论 DENV-2 prM反向重复序列具有干扰病毒复制的效果,为登革病毒基因疫苗的研究提供理论依据。
- 朱娉婷潘京郑学礼
- 关键词：RNA干扰BHK-21细胞
- 白纹伊蚊C6/36细胞登革Ⅱ型病毒结合分子的筛选被引量：4
- 2012年
- 目的筛选白纹伊蚊C6／36细胞表达连接登革Ⅱ型病毒分子。方法提取C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白，收集和纯化登革Ⅱ型病毒，用12％SDS．PAGE分析C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白，转于硝纤膜上，用病毒覆盖蛋白结合实验（VOPBA）筛选C6／36细胞表达连接登革Ⅱ型病毒分子。结果C6／36细胞的总蛋白和膜蛋白经12％SDS．PAGE分离后转膜，分别与纯化的病毒液和阴性对照液孵育，用抗登革病毒I～Ⅳ单克隆抗体检测，结果显示病毒孵育组在67000和30000的位置有特异性的条带出现，而阴性对照组无此条带。结论用VOPBA法初步从白纹伊蚊C6／36细胞中筛选67000和30000等登革Ⅱ型病毒结合分子，其功能的鉴定正在进行。
- 郑学礼雷子庆潘京
- 蚊虫细胞表达登革病毒受体蛋白的研究进展被引量：2
- 2013年
- 登革病毒(DENV)是登革热病原体,它经一个感染蚊于摄取血餐期间将病毒传播至人类。登革感染是世界范围内的一个严重公共卫生问题。一个病毒连接至一个宿主细胞是感染过程关键性第一阶段,其过程所涉及细胞蛋白鉴定与机制大部分仍然未知。本文就蚊细胞表达登革病毒的连接分子研究概况进行综述。
- 郑学礼潘京付宇姣
- 关键词：登革病毒伊蚊受体
- 白纹伊蚊中肠组织和C6/36细胞与登革病毒相互作用蛋白的筛选
- 2013年
- 目的筛选登革Ⅱ型病毒与白纹伊蚊中肠组织和C6/36细胞中的连接分子。方法富集纯化登革Ⅱ型病毒,用12%SDS-PAGE分析提取的C6/36细胞膜蛋白和白纹伊蚊中肠组织总蛋白,将分离胶上的蛋白转于硝酸纤维素膜(PVDF)上,应用病毒覆盖蛋白结合试验(VOPBA)方法筛选白纹伊蚊中肠组织和C6/36细胞中表达连接登革Ⅱ型病毒的分子。结果白纹伊蚊中肠组织总蛋白经12%SDS-PAGE分离后转膜,分别与纯化的病毒液和阴性对照液孵育,用抗登革病毒单克隆抗体检测,结果显示病毒孵育组在分子量30kDa的位置有特异性的条带出现,而阴性对照组无此条带;用同样的方法筛选C6/36细胞上表达蛋白,病毒孵育组在分子量30kDa和40kDa的位置出现特异条带,而阴性对照组无。结论 VOPBA结果显示分子量为30kDa的分子在中肠组织与C6/36细胞中都能表达,具有连接登革Ⅱ型病毒的作用,对其氨基酸序列的鉴定和功能分析工作正在进行中。
- 潘京朱娉婷郑学礼
- 关键词：登革病毒受体分子
- 从白纹伊蚊与致倦库蚊分离和鉴定可结合登革Ⅱ病毒的蛋白分子被引量：2
- 2013年
- 目的筛选登革Ⅱ病毒(DENV-2)识别白纹伊蚊、致倦库蚊的连接分子。方法提取不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊的总蛋白,用SDS-12%PAGE进行分析,用病毒覆盖蛋白结合试验(VOPBA)筛选不同发育时期白纹伊蚊、致倦库蚊表达连接DENV-2分子。结果 VOPBA检测不同发育时期白纹伊蚊显示:幼虫样品的泳道可见到25 000、35 000、50 000的DEN-2结合分子,蛹样品的泳道可见到35 000、50 000分子,雄蚊样品可见到50 000分子,雌蚊样品中可见到35 000、50 000分子。DEN-2结合蚊35 000分子在白纹伊蚊幼虫、蛹及成蚊的雌蚊的三个阶段均存在,而雄蚊的成蚊则缺少这一分子。VOPBA检测不同发育时期致倦库蚊:幼虫样品可见100 000分子,蛹样品可见40、100 000分子,另外在50 000位置上下亦可见48 000、60 000左右的多个条带,雄蚊与雌蚊样品均见40 000、100 000分子。结论 35 000大小的蛋白分子分布与白纹伊蚊感染组织向性相关。
- 付宇姣郑学礼潘京
- 关键词：白纹伊蚊致倦库蚊受体分子
