王佳珉
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：江苏正大天晴药业股份有限公司更多>>
- 发文基金：四川省青年科技基金四川省国际科技合作与交流研究计划项目国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- α-氨基酸酯水解酶突变体催化合成头孢丙烯被引量：2
- 2014年
- 目的通过α-氨基酸酯水解酶突变体合成头孢丙烯的工艺条件实验,获得相关实验数据,为推行头孢丙烯的绿色生产技术打下基础。方法通过定向进化对野生型α-氨基酸酯水解酶进行改造,用突变体酶催化合成头孢丙烯,考察了包括pH、温度、酶浓度、母核/侧链投料比及有机溶剂等多个因素对酶法合成头孢丙烯的影响。结果对野生型AEH酶进行分子改造,筛选出一株突变体。动力学数据分析表明,突变体酶比野生型更适合用于头孢丙烯的合成。在突变体酶催化合成头孢丙烯的过程中,体系最适合的pH为6.0;最适温度为30℃;底物浓度为50mmol/L;最适的母核侧链比为1:2;最适的反应体系为15%异丙醇-水溶液。结论相对于野生型的α-氨基酸酯水解酶,该突变体更适合用于头孢丙烯的合成,实验数据为头孢丙烯酶法合成的实际应用打下基础。
- 潘月李端华王佳珉王辂王欣荣
- 关键词：头孢丙烯突变体
- α-氨基酸酯水解酶合成头孢克洛被引量：7
- 2015年
- 用实验室自制的α-氨基酸酯水解酶(AEH)催化合成了头孢克洛。考察了pH值、温度、酶浓度、7-ACCA/D-PGM·HCl投料比、有机溶剂和D-PGM·HCl流加方式等多个因素对该反应的影响。所得最优工艺组合为:pH 6.1,温度15℃,7-ACCA浓度100 mmol/L,投料比1∶1.3,反应体系含25%乙醇,加料方式为侧链流加。优化工艺后头孢克洛的转化率达80%以上,为其酶法合成的进一步发展提供了参考。
- 潘月王佳珉李端华王辂易八贤
- 关键词：头孢克洛
- 全细胞高通量筛选α-氨基酸酯水解酶突变体的方法被引量：2
- 2012年
- 【目的】建立高效敏感的高通量筛选方法,用于筛选头孢克洛合成活性提高或热稳定性提高的α-氨基酸酯水解酶。【方法】根据头孢克洛在碱性条件下水解生成的衍生物在340 nm处有特征吸收峰的原理,制作出标准曲线。采用全细胞96孔板紫外分光光度法高通量测定α-氨基酸酯水解酶突变体的头孢克洛合成活性。【结果】头孢克洛含量与△A340?405在(0.1?0.6)×10?3 mol/L浓度范围内有良好的线性关系,服从朗伯-比尔定律,平均回收率为99.8%?101.3%。一轮定点饱和突变产生的2 300个克隆经该方法的筛选,获得3株kcat提高40%以上,4株半失活温度较野生型提高5°C以上的突变体酶。【结论】该方法准确可靠,每天筛选量可达到2 000个反应,达到高通量筛选的要求。
- 叶丽娟王佳珉王辂曹毅
- 关键词：头孢克洛紫外分光光度法定向进化
