王凤阳
- 作品数：109 被引量：262H指数：8
- 供职机构：海南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省教育厅高等学校科学研究项目海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 羊种布鲁氏菌Wzt基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2014年
- 为进一步研究Wzt蛋白在光滑型脂多糖合成路径中的作用,本试验利用PCR技术,以羊种布鲁氏菌16 M株基因组为模板,扩增出大小为759bp的Wzt基因片段,将其连入pMD20-T载体,测序正确后构建重组质粒pET-28a-Wzt,转化E.coli BL21（DE3）工程菌,IPTG诱导其表达,最后用Western blotting鉴定蛋白。结果显示,扩增出的Wzt基因片段大小为759bp,与GenBank中登录的羊种布鲁氏菌16M株Wzt基因序列（登录号：AF047478.1）同源性为99.87%,证明成功克隆了Wzt基因,同时成功构建了pET-28a-Wzt原核表达载体,并在E.coli BL21（DE3）工程菌中表达了Wzt蛋白,诱导得到的融合蛋白大小约为30ku,位于25～35ku之间,与目的蛋白大小一致,结果表明成功表达了目的基因。
- 庞峰贾晓晓赵天靖朱华培徐开莲郭莳雨史巧芸荣辉周海龙王凤阳
- 关键词：羊种布鲁氏菌克隆原核表达
- 《家畜育种学》课程教学方法的研究、实践与思考被引量：8
- 2016年
- 综述了不同高等农业院校的国家级和省级精品课程《家畜育种学》的教学方法,并以此为参考和借鉴,结合海南热带特色畜禽遗传资源,提出了适合本专业该课程学习的教学方法,形成了独具特色的教学体系和教学风格,并对今后《家畜育种学》课程的教学改革提出了建设性意见。
- 于向春王凤阳
- 关键词：教学方法教学改革
- 绵羊CCL19基因启动子活性分析及其转录调控元件筛选被引量：2
- 2022年
- 【目的】鉴定绵羊趋化因子C-C基序配体19(C-C motif chemokine ligand 19,CCL19)基因启动子的核心启动子区域和关键转录因子,探究该基因在转录调控方面的作用机制。【方法】选取绵羊CCL19基因5′-侧翼序列1000 bp,PCR扩增启动子的7个不同长度的截短片段,并连接至pGL3-Basic质粒;将重组质粒与pRL-TK质粒共转染到293T细胞中,结合双荧光素酶报告基因检测系统分析不同截短片段的相对荧光活性。利用在线预测软件分析和筛选CCL19基因核心启动子区域内的转录因子结合位点。采用定点突变技术构建转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体,与pRL-TK质粒共转染到293T细胞,分析转录因子结合位点缺失质粒的相对荧光活性。【结果】成功构建了7个不同长度(pGL3-P、pGL3-P1、pGL3-P2、pGL3-P3、pGL3-P4、pGL3-P5及pGL3-P6)的CCL19基因启动子片段的荧光素酶报告载体;采用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定出转录起始位点上游-256/-186 bp为CCL19基因启动子核心启动子区域,表明该区域对CCL19基因转录调控有重要作用。生物信息学分析预测到该区域存在POU5F1(-201/-189 bp)、ZBTB26(-228/-217 bp)、FOXI1(-239/-228 bp)、GLI2(-255/-243 bp)和SP2(-219/-211 bp)5个转录因子的结合位点,并成功构建了转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体。双荧光素酶报告基因检测系统分析显示,POU5F1转录因子的结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性极显著降低(P<0.01),FOXI1、ZBTB26、SP2转录因子结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性均极显著升高(P<0.01)。【结论】试验成功构建CCL19基因启动子荧光素酶报告载体,确定CCL19基因启动子的核心启动子区域为转录起始位点上游-256/-186 bp,并鉴定出转录因子POU5F1结合位点可能是CCL19基因转录的重要调控位点,为下一步研究绵羊CCL19基因在先天性免疫、适应性免疫和淋巴细胞迁移等方面的功能提供理�
- 翟哲陈思吴艳茹王雪梅李崇瑞刘志勇陈巧玲王凤阳杜丽李昌金宁一
- 关键词：绵羊启动子转录调控
- 海南黄牛IGF2R基因单核苷酸多态性及其生物信息学分析
- 2022年
- 【目的】明确海南黄牛胰岛素样生长因子2受体基因(IGF2R)遗传多态性及其在海南黄牛群体中的遗传分布情况,为进一步揭示IGF2R基因对海南黄牛生长性状的调控机理提供理论依据,也为分子标记辅助选择提供新的候选位点。【方法】构建海南黄牛DNA混池,通过PCR扩增和测序技术对海南黄牛IGF2R基因编码区(CDS)进行基因多态性分析,并以Chromas序列比对筛选出错义突变SNP位点;应用PCR-RFLP对202头海南黄牛个体进行基因型鉴定,同时对筛选到的SNP位点进行连锁不平衡及单倍型分析,评估海南黄牛群体中各单倍型的分布情况;通过生物信息学方法分析各单倍型和SNP位点对海南黄牛IGF2R基因CDS区mRNA二级结构、蛋白理化性质及蛋白二级结构的影响。【结果】在海南黄牛IGF2R基因CDS区共检测到4个错义突变SNPs位点,分别为SNP1(g.63977A>G)、SNP2(g.63999T>C)、SNP3(g.69772G>A)和SNP4(g.94987A>C),其中SNP1、SNP2和SNP3位点间呈强连锁不平衡状态。4个SNPs位点在海南黄牛群体中均表现为中度多态性,且处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。海南黄牛群体中存在4种单倍型(F>0.01),分别是H1(ATG)、H2(GCA)、H3(ACA)和H4(GCG);各单倍型及SNP4突变型对海南黄牛IGF2R基因CDS区mRNA二级结构及其最小自由能均有影响。海南黄牛IGF2R蛋白为亲水蛋白,存在跨膜结构和信号肽,其二级结构主要由无规则卷曲和延伸链构成,α-螺旋和β-转角的占比较小。【结论】在海南黄牛IGF2R基因CDS区共检测到4个错义突变SNPs位点,在海南黄牛群体中均表现为中度多态性,且处于Hardy-Weinberg平衡状态。海南黄牛IGF2R基因SNP位点突变对其mRNA二级结构及稳定性均会造成影响,致使IGF2R蛋白二级结构肽链构象发生改变,进而对海南黄牛生长性状的调控造成影响。
- 杨伟杰满初日嘎吴慧张振兴何美荣蒋俊明陈巧玲高宏岩王凤阳陈思
- 关键词：SNP位点生物信息学生长性状
- 贝类免疫机制研究进展被引量：19
- 2008年
- 贝类动物细胞免疫主要通过细胞的吞噬作用完成。溶酶体酶、凝集素、抗菌肽等体液免疫因子以杀菌、促进吞噬等方式参与贝类的免疫防御,阿片样活性肽、细胞因子、细胞激酶等是贝类免疫通信中的化学递质。化学递质通过介导免疫信号传导参与贝类的免疫防御,也是近年贝类的免疫研究的新热点。贝类生活环境中的各种因子能显著改变贝类的免疫机能,贝类对生态因子的敏感性使贝类的生态学研究成为人类等高等动物的生态免疫学研究模式。现代养殖业通过基因工程技术的手段来提高贝类的免疫力以适应养殖业的发展。
- 杜丽张巍陆逵王凤阳王爱民
- 关键词：贝类免疫机制细胞免疫体液免疫
- 羊布鲁菌外膜蛋白Bp-26基因的克隆及其原核表达被引量：4
- 2013年
- 应用PCR扩增羊布鲁菌M5-90株基因组DNA,得到大小为753bp的Bp-26基因,将其克隆入pMD20-T载体上,测序正确后,构建重组质粒pET-28a-Bp-26,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导其表达,用Western blot鉴定蛋白。结果表明,成功构建了pET-28a-Bp-26原核表达载体,并在E.coli BL21中表达Bp-26基因,为开展羊布鲁菌Bp-26目的蛋白的抗原性分析和功能研究奠定了基础。
- 史巧芸荣辉郭莳雨贾晓晓张珈宁朱华培杜丽成鹰焦寒伟王凤阳
- 关键词：克隆原核表达
- 羊源多杀性巴氏杆菌荧光定量PCR标准曲线的建立
- 本发明公开了一种羊源多杀性巴氏杆菌荧光定量PCR标准曲线的建立，参考GenBank中公布的Pasteurella multocida基因组中toxA毒素基因，利用信息分析软件获取保守序列cstoxA，通过PCR、构建阳性...
- 王凤阳黄海峰杜丽
- 文献传递
- 用于检测环境中布鲁氏菌的引物及方法
- 本发明公开了用于检测环境中布鲁氏菌的引物，包括两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP，以及两条环引物LF和LB；本发明还公开了用于检测环境中布鲁氏菌的方法，提取纯化布鲁氏菌核酸样本；建立LAMP检测的反应体系，混...
- 王凤阳朱坤陈媛媛陈思李旭博陈苏红
- HSF、HSPs与热应激被引量：4
- 2008年
- 王凤阳杜丽张莉娜成鹰
- 羊种布鲁氏菌Omp10基因的克隆及原核表达被引量：8
- 2014年
- 根据GenBank公布的羊布鲁氏菌(B.melitensis)M5-90株外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)基因序列,设计1对引物,以其全基因组为模板,采用PCR技术对其进行扩增,得到381bp的目的片段,连接入pMD20-T载体,转化E.coli DH5α感受态细胞;测序正确后,构建pET-28a-Omp10原核表达质粒,再将该质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白His-Omp10,用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。结果表明,成功构建了含Omp10基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了Omp10基因,诱导得到的融合蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致,证明Omp10得到成功表达。该试验为布鲁氏菌病的进一步研究奠定基础。
- 徐开莲朱华培赵天靖贾晓晓郭莳雨庞峰焦寒伟成鹰杜丽史巧芸荣辉张珈宁王凤阳
- 关键词：布鲁氏菌原核表达克隆
