王宗元
- 作品数：50 被引量：356H指数：12
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 人细胞核dUTPase的克隆表达及其酶学活性被引量：5
- 2003年
- 以阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)患者脑cDNA文库质粒为模板 ,用PCR方法扩增得到人细胞核dUTP焦磷酸酶 (dUTPase)的cDNA ,将其克隆到谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 4T 1中 ,并在大肠杆菌BL2 1中获得高效表达 .表达的融合蛋白GST dUTPase经过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,凝血酶酶切和SephacrylS 10 0纯化 ,得到高纯度dUTPase蛋白 .通过SDS PAGE ,氨基酸组成分析 ,N端氨基酸序列测定以及HPLC测Mr 结果与期望值一致 .通过检测该酶水解dUTP释放的焦磷酸 (PPi)来测定表达产物dUTPase蛋白及GST dUTPase融合蛋白的酶活性 ,发现两蛋白都具有正常的酶水解dUTP活性 ,但融合蛋白的活性比dUTPase蛋白低 7～ 8倍 .同时研究了Mg2
- 陈巧林任宏伟康巧华王宗元茹炳根
- 关键词：DUTPASE克隆酶学活性
- 鹌鹑口服氯化镉后,镉在主要器官中的分布及临床变化被引量：2
- 1993年
- 54只26日龄雄性鹌鹑等分为9组,分别喂给含相当于采食量的0……100mg/kg镉的氯化镉小面丸,上、下午各一次。连续28天。发现除高剂量组(75、100rag/kg)部分动物死亡外。各饲镉组动物均有采食量减少,体增重减慢、消瘦、贫血、睾丸缩小、骨质疏松等临床症状。镉主要蓄积在肝、肾中。各器官内镉积累量与饲料中供镉量间呈明显的正相关(r>0.93),在肝、肾细胞浆液中,90％以上的镉与金属硫蛋白(MT)结合,仅少量镉与大分子量蛋白质(HP)结合。
- 史德浩王捍东刘文龙任建新陆小龙卞建春吴维芬王宗元
- 关键词：镉鹌鹑口服氯化镉毒性试验
- 大鼠短暂性全脑缺血再灌注后海马神经元动态变化被引量：3
- 2004年
- 采用股动脉放血并双侧颈总动脉夹闭制作大鼠全脑缺血再灌注模型,分别于术后6h、1d、3d、5d处死动物,取脑,制作石蜡切片和冰冻切片,通过HE染色、TUNEL检测及Caspase-3活性测定,对大鼠海马各区锥体细胞形态进行动态观察。结果表明:在短暂性全脑缺血中,海马锥体细胞存在着凋亡和坏死两种死亡形式,细胞凋亡在海马各区中的分布是一动态过程,各区对缺血易损伤性的顺序是:CA1及门区>CA2>CA3>齿状回;脑缺血再灌注不同时间,海马锥体细胞中DNA断裂及Caspase-3的表达与细胞凋亡呈现相似的变化趋势,且DNA的断裂早于Caspase-3的表达;与青年组相比,老年组海马神经元出现凋亡时间早且损伤严重。试验证明:在脑缺血再灌注损伤中,海马各区存在着缺血耐受性差异;细胞凋亡是神经元死亡的一种重要形式。
- 刘学忠崔旭刘宗平王捍东王宗元
- 关键词：短暂性全脑缺血CASPASE-3海马神经元海马锥体细胞再灌注
- SMD残留检测的ELISA方法的建立和初步应用被引量：21
- 2003年
- 用戊二醛法将SMD与载体蛋白BSA偶联 ,制备合成抗原SMD BSA作免疫原 ,同法合成包被抗原SMD OVA ,免疫健康家兔获得抗血清。分别用双向琼脂扩散试验和ELISA试验对抗血清进行定性定量测定 ,结果表明所获抗血清特异性针对SMD。用所制备的抗血清建立间接竞争ELISA方法。优化了ELISA的工作条件 ,方阵测定确定了包被抗原最佳浓度 (50 μg/mL) ,抗血清最佳稀释度 (1∶1 0 0 ) ,酶标抗体的最适工作稀释度 (1∶50 0 ) ,并建立了ELISA标准工作曲线。工作曲线表明在 1 0～ 2 0 0 0 μg/L浓度范围内呈良好的线性关系。该法检测底限为 63μg/L,低于国际规定残留限量 (1 0 0 μg/kg)和国内规定残留限量 (30 0 μg/kg)的要求。
- 周新民陈连颐王捍东王宗元
- 关键词：SMD药物残留磺胺对甲氧嘧啶人工抗原血清抗体
- 原子荧光光谱法测定鹅组织样品中的砷、汞被引量：1
- 2004年
- 建立了双道原子氢化物发生原子荧光法,并检测鹅组织样品中的砷(As)和汞(Hg),研究了KBOH4浓度、KOH浓度、酸介质等条件对荧光信号强度的影响,在优化实验条件下,方法对As和Hg的检测限分别为:0.0048μg／L,0.0072μg／L,精密度(RSD)分别为:As=1.91％,Hg=1.63％。结果表明该法快速、灵敏、准确,可用于动物组织样品中的砷、汞等的检测。
- 何祥来王捍东袁燕王宗元
- 关键词：微波消解原子荧光砷汞
- 硫辛酸对海马CA_1区锥体细胞凋亡的抑制作用被引量：8
- 2004年
- 采用股动脉放血并双侧颈总动脉夹闭制作全脑缺血再灌注模型 ,于术后 1 d处死动物 ,取脑 ,制作石蜡切片 ,通过 HE染色、Tunel检测 ,以观察海马 CA1区锥体细胞的损伤形式 ,并探讨α-硫辛酸 (α-lipoic acid,L A)对实验性脑缺血再灌注的神经保护作用。结果表明 :在短暂性全脑缺血中 ,海马锥体细胞存在着凋亡和坏死两种死亡形式 ;与对照组相比 ,缺血再灌注后1 d,海马 CA1区损伤较重 ,出现了较多的凋亡细胞 ,而 L A可明显抑制锥体细胞的凋亡。实验证明 :在脑缺血再灌注损伤中 ,细胞凋亡是神经元死亡的一种重要形式 ;L
- 刘学忠崔旭卞建春任建新刘宗平王捍东王宗元
- 关键词：硫辛酸海马CA1区锥体细胞细胞凋亡
- 上市肉鸡组织样品中铅、镉、铜、铬含量的测定被引量：16
- 2005年
- 从江苏省某市采集上市肉鸡组织样品 ,采用微波消解 石墨炉 原子吸收分光光度法 ,测定主要组织 (心脏、肝脏、肌胃、胸肌、肾脏、腿肌、骨骼 )中铅、镉、铜、铬等重金属元素的含量。检验结果 :组织中Pb的含量以心脏最高 (1 3478± 0 531 2 )mg/kg ,肝脏次之 (1 1 2 6 3±0 534 0 )mg/kg ,骨骼最低 (0 1 0 1 8± 0 0 0 6 6)mg/kg ,样品含Pb超标率按上述组织顺序分别为 :1 0 0 %、 96 87%、 96 87%、 87 50 %、1 0 0 %、 81 2 5 %和 0 ;组织中Cd的含量以肾脏最高 (0 0 63 0± 0 0 2 0 2 )mg/kg,骨骼次之 (0 0 55 9± 0 0 2 0 5)mg/kg ,样品含Cd超标率分别为 :6 2 5 %、 0、 3 1 3 %、 0、 0、 0和 0 ;组织中Cu的含量以心脏最高 (8 492 7± 1 90 1 2 )mg/kg,肝脏次之 (8 462 8± 1 666 4)mg/kg ,腿肌最低 (0 8373± 0 741 4 )mg/kg ,样品含Cu超标率分别为 :1 2 50 %、 1 5 63 %、 9 38%、 3 1 3 %、 0、 0和 0 ;组织中Cr的含量以肾脏最高(1 642 5± 1 0 1 0 0 )mg/kg ,肝脏次之 (1 642 5± 0 61 97)mg/kg ,样品含Cr超标率分别为 :50 0 0 %、 62 70 %、 9 38%、 3 1 3 %、 0、 0和 0。检测数据表明 ,鸡主要组织样品中Pb含量严重超标 ;肝脏、肾脏中Cr超标较严重 ,Cd和Cu也有不同程度?
- 何祥来王捍东袁燕王宗元
- 关键词：重金属
- 小干扰RNA对类风湿关节炎相关的人白细胞抗原-DRB1＊0405蛋白表达的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨人类白细胞抗原(HLA)DRB1*0405小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对类风湿关节炎(RA)相关的HLA-DRB1*0405蛋白表达的影响。方法构建HLA-DRB1*0405蛋白表达质粒siCHECKTM-2/HLA-DRB1*0405,同时针对HLA-DRB1*0405基因序列设计并构建6个小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒和1个针对无关序列的shRNA表达质粒。脂质体瞬时共转染两种质粒至人胚胎肾细胞293,以仅转染HLA-DRB1*0405蛋白表达质粒作为阴性对照,采用实时荧光定量PCR检测293细胞中HLA-DRB1*0405mRNA的表达,通过测定荧光素酶强度分析293细胞中HLA-DRB1*0405蛋白水平。结果所设计的6个HLA-DRB1*0405siRNA可不同程度的抑制HLA-DRB1*0405在293细胞中的表达,对mRNA水平,其抑制率最高可达89·25%,而在蛋白水平,其抑制率达46·70%。结论质粒介导的HLA-DRB1*0405siRNA可明显抑制HLA-DRB1*0405在人胚胎肾细胞株293中的表达,为利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制RA中HLA-DRB1介导的异常免疫反应提供了试验依据。
- 张翠华陈巧林王宗元栗占国
- 关键词：RNA干扰关节炎转染荧光素酶
- SMD单克隆抗体的制备及测定方法的建立被引量：28
- 2003年
- 用戊二醛作为偶联剂 ,将磺胺对甲氧嘧啶 (SMD )与牛血清白蛋白 (BSA )或卵清蛋白 (OVA)偶联形成完全抗原 ,经紫外分光光度计扫描鉴定。以人工抗原免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (SP2 /0 -Ag1 4)融合 ,用间接ELISA联合竞争ELISA法筛选出产生针对SMD抗体的杂交瘤细胞。经克隆 ,得到 3株特异性好的阳性杂交瘤细胞 ,注入小鼠腹腔产生腹水。建立了测定SMD的ELISA法 ,其检测下限小于5ng/mL。
- 彭会建王捍东王宗元唐娜周晓昕
- 关键词：磺胺对甲氧嘧啶牛血清白蛋白杂交瘤细胞ELISA间接酶联免疫吸附试验磺胺类药物
- 金属硫蛋白-3对dUTPase调节dUTP细胞毒性作用的影响
- 2004年
- 金属硫蛋白 3(MT 3) ,又称神经生长抑制因子 ,是一种脑特异性金属硫蛋白。人细胞核dUTP焦磷酸酶(dUTPpyrophosphatase,dUTPase)是最近在脑中研究发现的能与人金属硫蛋白 3(humanmetallothionein 3,hMT 3)相互作用的一个蛋白 ,两者共同作用具有神经元生长抑制活性。为了探讨hMT 3对dUTPase调节dUTP引起的细胞毒性作用的影响 ,通过基因转染HEK2 93细胞观察细胞在dUTP中的生长情况 ,发现共转染hMT 3和dUTPase基因的细胞比单转染dUTPase或hMT 3基因的细胞具有更强的对dUTP细胞毒性的耐受能力 ;同时在大肠杆菌BL2 1中表达重组蛋白 ,测定hMT 3在dUTPase水解dUTP中的作用 ,结果显示重组蛋白hMT 3可以促进dUTPase对dUTP的水解。结果均初步证实了hMT 3对dUTPase抵抗dUTP引起的正常细胞死亡有一定的协同作用 ,为进一步研究dUTPase及其相互作用蛋白hMT 3在化疗中的应用提供理论依据。
- 陈巧林康巧华任宏伟王宗元茹炳根
- 关键词：DUTPASE基因转染细胞毒性
