王新民
- 作品数：54 被引量：170H指数：7
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒B基因组在转基因小鼠内的表达和复制被引量：3
- 1997年
- 采用受精卵显微注射方法,产生了41只整合有完整的乙型肝炎病毒(HBV)B基因组的转基因小鼠建立者。建立者基因组中所整合的HBV基因组都能以孟德尔方式向后代传递。在这些建立者中,有33只为HBsAg阳性,同时也为HBeAg阳性的有18只。对血清HBsAg和HBeAg同时阳性的8只小鼠进行免疫组化分析,发现在它们的肝和肾组织中也有HBsAg和HBeAg的存在,但不存在于脾、脑、肺、睾丸、皮呋、卵巢及肌肉组织中。
- 胡以平雷章恒余宏宇郑文超李建秀王新民胡卫江孙伟郝光荣潘星华王肖鹏傅继梁
- 关键词：肝炎病毒转基因分子遗传学小鼠分子生物乙型
- 乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠的研究被引量：47
- 1999年
- 目的：制备含有２．０拷贝乙型肝炎病毒（ＨＢＶ，ａｄｒ亚型）基因组的转基因小鼠，为ＨＢＶ相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法：应用受精卵原核显微注射的方法，产生ＨＢＶ转基因小鼠。用ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ杂交、放射免疫、免疫组织化学以及亚显微结构分析等方法，研究外源基因在转基因小鼠体内的整合、表达以及复制。应用常规病理切片及血清生物化学方法分析转基因小鼠的病理学改变。结果：得到了４只整合有ＨＢＶ基因组的建立者小鼠，并证明ＨＢＶ基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传，在肝、肾组织内可特异性表达、复制，并在肝细胞内发现了Ｄａｎｅ颗粒。转基因小鼠的肝、肾组织未见明显的病理学改变。结论：获得了ＨＢＶ的转基因小鼠，其病毒基因可以表达，并有病毒颗粒形成。该小鼠对于ＨＢＶ的各个基因产物是免疫耐受的，其基本生物学特性与人类的ＨＢＶ携带者特征相似。
- 胡卫江李建秀余宏宇戴德顺王新民孙伟郝光荣王肖鹏胡以平
- 关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠DANE颗粒ADR亚型
- TRAIL在细胞中的表达及其诱导凋亡的活性分析被引量：1
- 2001年
- 以ＰＣＲ方法克隆了Ｔｒａｉｌ ｃＤＮＡ全长，构建了其真核表达载体，通过脂质体转染ＨｅＬａ细胞，４８小时后利用流式细胞仪分析Ｔｒａｉｌ诱导细胞凋亡的比率，发现发生凋亡的细胞为总细胞数的１９％。证实Ｔｒａｉｌ真核表达系统的产物的生物学活性高，为从真核表达的途径获得Ｔｒａｉｌ基因工程产品奠定了基础。
- 姚玉成王新民胡以平
- 关键词：TRAIL活性分析细胞凋亡
- 口服避孕药诱发果绳非整倍体的研究被引量：1
- 1991年
- 对6种国产口服避孕药和一种美国制造的口服避孕药在黑腹果蝇野生型Oregon K品系中诱发非整倍体的效应进行了实验观察。结果表明,在高剂量(炔诺酮、甲地孕酮和炔雌醇的剂量分别为1500、2500、175ppm,它们分别相当于人每日口服剂量的1.5、2.5、5.0倍)染毒的试验组中,非整倍体的频率与溶剂对照组比较有高度显著的差异。从实验结果来看,口服避孕药主要是引起染色体不分离,并不是使染色体发生断裂而导致染色体丢失,所以很可能主要是损害了细胞分裂机构(纺锤丝、中心拉、着娃粒)而导致染色体在子细胞中的非均等分配。
- 李怀义王新民蒋左庶王肖鹏
- 关键词：口服避孕药非整倍体
- 骨髓细胞多向分化潜能的初步研究被引量：6
- 2002年
- 目的:探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法:将C57-TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠,重建受体鼠骨髓,然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-cre基因的分布及表达情况。结果:PCR和免疫组化分析结果均显示,供体细胞的两个标志sry及Mx-cre在受体鼠的肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等多个器官中都有表达。结论:骨髓细胞不仅可以重建受致死剂量照射受体鼠的造血系统,而且具有分化为肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等组织细胞类型的多向潜能性。
- 朱海英苏娟李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇
- 关键词：骨髓细胞造血干细胞细胞分化
- 乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.0)SMMU的生物学特征被引量：16
- 2002年
- 目的:评价乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU生物学特征的稳定性。方法:以F5代乙肝转基因小鼠C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、血清ELISA检测、Western印迹分析、免疫组织化学、血清DNA PCR、透射电镜和H-E染色的方法分析HBV基因在转基因小鼠中的整合、表达、复制和组织学变化。结果:F1代乙肝转基因小鼠基因组中稳定整合有HBV基因,肝组织中可检测到HBsAg、HBcAg和X蛋白3种病毒蛋白,血清中HB-sAg和HBeAg的表达率分别为19.54％和3.39％,且在血清和肝组织中存在病毒DNA和病毒样颗粒;长期的病毒DNA整合、表达和复制可以引起转基因小鼠肝、肺等组织的病理性损伤。结论:乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O:)SMMU具有基因组中稳定整合病毒DNA、血清和肝组织中有病毒蛋白表达和病毒复制的特征,并具有一定的组织学变化,作为生物医药研究的实验动物模型具有推广应用价值。
- 訾晓渊姚玉成熊俊金艳花叶煦亭李建秀刘红朱海英王新民倪文君胡以平余宏宇丛文铭
- 关键词：转基因小鼠
- 乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立及培育被引量：15
- 2002年
- 目的:建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因(adr亚型)转基因小鼠模型,以研究x基因的功能。方法:采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx基因(adr亚型)开放阅读框(ORF)的真核表达载体pcDNA3-HBx。该载体经Sal I限制性内切酶线性化后,琼脂糖电泳回收目的片段,用原核显微注射法将其注射入雄原核,制备转基因小鼠。复合PCR法在基因组水平筛选HBx基因转基因小鼠founder;免疫组织化学法在蛋白水平检测X蛋白在这些小鼠中的表达情况。结果:成功构建了HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后,出生并存活了11只新生鼠,经PCR检测后获得5只founder转基因小鼠,命名为C57-TgN(HBx)SMMU。免疫组织化学检测发现5只PCR阳性小鼠的肝细胞质中均有X蛋白的表达。将这5只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配,进行传代培育,复合PCR法筛选阳性转基因小鼠,目前已传至F4代。结论:本研究成功地产生了稳定遗传HBx基因并表达X蛋白的转基因小鼠C57-TgN(HBx)SMMU,它将有利于体内研究HBx基因在肝细胞癌发生中的作用。
- 熊俊訾晓渊姚玉成金艳花李建秀朱海英王新民胡以平余宏宇
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白转基因小鼠HBX基因
- 小鼠神经细胞p35^(nck5a)基因5′非编码区基因表达调控功能初步研究
- 2002年
- 目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小鼠实验体系来观察该片段在体内、外基因表达调控的差异。结果 :体外培养细胞中 p35 nck5a基因 5′侧翼序列不具有决定报告基因神经特异性表达的能力 ,但在基因组中整合有相同表达载体的转基因小鼠体内却能够指导报告基因的神经限制性表达。 结论 :这种差异提示进行体内。
- 朱海英周常文王秀凤傅继梁李建秀王新民胡以平
- 关键词：小鼠转基因基因表达神经细胞
- 酿洒酵母检测系统的建立和应用
- 1989年
- 酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)又称啤酒酵母、面包酵母、酒精酵母,是一种真核微生物,属子囊孢子型真菌,繁殖速度快,营养要求低。广泛应用于遗传学和细胞生物学的研究及工业酿造中。
- 蒋左庶王肖鹏王玲华李晓冬马林王新民梁加靖
- 关键词：酿酒酵母菌遗传毒物
- Mx-cre转基因小鼠品系的建立及其培育被引量：3
- 2001年
- 将携带ＭＸ启动子调控的Ｃｒｅ基因真核表达载体ｐＭｘ－ｃｒｅ线性化后，通过受精卵显微注射途径制备转基因小鼠。共注射９９个卵，产仔２０只，利用ＰＣＲ对小鼠进行筛选，以基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ确证，最后得到一个阳性的小鼠品系，进而将其保种和扩大繁殖。
- 姚玉成訾晓渊李建秀熊俊谢庆东王新民胡以平
- 关键词：CRE基因转基因小鼠
