王春晓
- 作品数：13 被引量：31H指数：4
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 鲑精蛋白基因工程菌高效表达条件的优化被引量：4
- 2007年
- 为了提高鲑精蛋白基因工程菌融合蛋白的表达量,本文对工程菌的发酵培养基组分、培养基初始pH值、发酵种子接种量、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时机、诱导时间等因子进行了筛选。试验结果表明,培养基组分、诱导温度、诱导时机和诱导时间是影响融合蛋白表达量的主要因素。经筛选,最佳发酵条件是以PYJ-2为发酵培养基,37℃下培养3～5h后,以5mmol/L的乳糖诱导工程菌6～8h表达融合蛋白,融合蛋白表达量从18.90%提高到40.10%。
- 鲁健章王春晓刘承初邓强
- 关键词：基因工程菌融合蛋白表达量
- 人甲状旁腺素活性片段前体物Pro-Pro-hPTH(1-34)的制备及活性研究
- 2006年
- 目的制备出具有生物活性的人甲状旁腺素活性片段类似物,并对其活性进行考察。方法采用基因工程方法:大肠杆菌BL 21为宿主菌,pET 28a为表达载体,天门冬酰胺酶Ⅱ切除信号肽的C末端片段为融合伙伴,在融合伙伴和目的肽结合处引入Asp Pro酸敏感位点及二肽酶Ⅳ识别的N端Pro Pro位点,之后经诱导表达,酸水解使融合伙伴和目的肽分离。结果成功构建了hPTH(1 34)的融合表达体系,它能高效表达含hPTH(1 34)的融合蛋白,经纯化,得到多肽纯品,经鉴定,该多肽的分子量、氨基酸组成均与设计的分子相符,工程菌中用于编码该多肽的DNA片段其测序结果也与原设计相符,是表达该多肽的正确模板。该多肽在Parsons雏鸡分析及卵巢摘除大鼠模型试验中均显示显著活性。结论用基因工程方法成功地制备出人甲状旁腺素活性片段类似物,该产物具有显著生物活性及潜在的药用价值。
- 王春晓金亮陆毅康永锋刘景晶
- 关键词：活性片段
- 乌拉坦和戊巴比妥钠对手术后长期饲养动物的影响被引量：16
- 2005年
- 目的:探讨麻醉药乌拉坦的副作用及手术造模后需长期饲养的动物麻醉用药的选择.方法:将大鼠用乌拉坦(n=90)及戊巴比妥钠(n=48)分别进行麻醉,观察较长期的生存及死亡状态,并对乌拉坦对动物脏器的影响做了肉眼观察,度量比较,扫描电子显微镜下观察肠内壁绒毛,腺体以及微绒毛的形态特征.结果:使用乌拉坦的动物死亡率非常高,达33.3-40.0%,死亡动物的内脏严重受损.使用戊巴比妥钠的大鼠死亡率在假手术组为8.3%,在手术组为6.25%.假手术组以及手术组与正常组比较,脾系数极度减小(0.78±0.38,0.77±0.21vs3.44±1.16,P<0.01),盲肠与回肠直径极度增加(3.20±0.79,2.23±0.34vs1.26±0.24,P<0.01;1.68±0.44,1.46±0.36vs0.46±0.07,P<0.01),细胞变性严重.透射电镜下观察到用乌拉坦19wk的大鼠,小肠黏膜上皮细胞明显水肿,表面有的微绒毛已脱落,整体数量减少.结论:乌拉坦不适用于对手术后需长期饲养的动物进行麻醉,而戊巴比妥钠可作为术后需长期饲养动物的手术麻醉用药.
- 王春晓曹荣月蔡曼玲杜鹏刘承初刘景晶
- 关键词：戊巴比妥钠
- 牛乳铁蛋白抗菌肽(Lactoferricin)基因的克隆与表达质粒构建被引量：4
- 2008年
- 按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导后,可表达出可观的融合蛋白,且表达量与诱导时间呈一定相关性。
- 邓强王春晓鲁建章朱政刘承初刘景晶
- 关键词：乳铁蛋白基因克隆
- 一种新型hPTH(1-34)基因相关肽的制备及其应用的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的:对hPTH(1-34)进行结构改造,提高蛋白水解酶的稳定性,增强酶活性,使之更适合制成滴鼻剂,并验证治疗骨质疏松症的效果。方法:确定将hPTH(1-34)改造成为Pro-Pro-[Arg11]hPTH(1-34)-Pro-Pro后,构建表达质粒pED-4PhPTH(1-34),转化E.coliBL21(DE3)LysE,乳糖诱导表达,经分离纯化获得目的多肽。将目的多肽与二甲基-β-环糊精、聚丙烯酸、EDTA制成滴鼻剂,治疗卵巢摘除大鼠(OVXed Rats)的骨质疏松症。结果:获得纯度较高的Pro-Pro-[Arg11]hPTH(1-34)-Pro-Pro,将制成的滴鼻剂用于卵巢摘除大鼠,与生理盐水滴鼻治疗组相比能显著增加大鼠椎骨骨密度(P<0.01)及股骨头骨小梁厚度(P<0.001),对鼻黏膜没有损伤。结论:Pro-Pro-[Arg11]hPTH(1-34)-Pro-Pro制成滴鼻剂治疗卵巢摘除大鼠的骨质疏松症效果明显,有进一步开发的前景。
- 施小明王春晓庄志华吴洁李泰明曹荣月刘景晶
- 关键词：滴鼻剂骨质疏松症骨密度骨小梁
- 一种能串联表达和同步酸水解释放的人甲状旁腺素1－34肽类似物及其制备方法和应用
- 本发明涉及基因工程领域，涉及一种能串联表达和同步酸水解释放的人甲状旁腺素1－34肽类似物及其制备方法和用于治疗骨质疏松症的应用。该hPTH(1－34)类似物的N端存在二肽酶IV/CD26识别位点，能使其在进入体内后被二肽...
- 刘景晶凤姣尤科军刘言华施小明王春晓范豪李泰明曹荣月吴洁
- 文献传递
- 生物活性肽和功能基因片段表达和加工新系统研究
- 刘景晶胡卓逸陈正兰明欣丁敏戴翔翎肖伟凌娅李明慧李泰明吴洁曹荣月唐松山王春晓肖益热杨立张彦凯
- 该课题采用基因工程技术和蛋白质工程技术，设计建立了具有重大应用前景的生物活性肽表达和加工新系统，该系统技术特征如下：构建成可酸水解释放生物活性肽的高效表达系统，事例蛋白表达量占菌体总蛋白40-50%，目标多肽占菌体总蛋白...
- 关键词：
- 关键词：生物活性肽
- 一种人的甲状旁腺素1－34肽相关肽－Pro－Pro－[Arg<Sup>11</Sup>]]hPTH(1－34)－Pro－Pro
- 本发明提供了人甲状旁腺素1－34肽相关肽－Pro－Pro－[Arg<Sup>11</Sup>]hPTH(1－34)－Pro－Pro，及其构建方法和生产工艺。本发明所述的人甲状旁腺素1－34肽相关肽－Pro－Pro－[Ar...
- 刘景晶王春晓肖益热丁敏吴洁
- 文献传递
- 一种新型的重组甲状旁腺素(1－34)相关肽的滴鼻剂
- 本发明公开一种人重组甲状旁腺素(1－34)相关肽Pro－Pro－[Arg<Sup>11</Sup>]hPTH(1－34)－Pro－Pro的滴鼻剂及其制法。滴鼻剂主要成分为Pro－Pro－[Arg<Sup>11</Sup>...
- 刘景晶施小明庄志华王春晓吴洁曹荣月李泰明金亮
- 文献传递
- 重组人甲状旁腺素相关肽Pro-Pro-[Arg^(11)]-hPTH(1-34)-Pro-Pro的制备工艺及活性研究被引量：4
- 2008年
- 该研究优化了工程菌pED-4P-[Arg11]hPTH(1-34)/BL21的表达条件,目的蛋白表达量可达50%以上;运用正交设计法,确定包涵体溶解及融合蛋白乙醇沉淀的最佳条件,融合蛋白经酸水解后进行阳离子交换柱层析,最后采用阶段洗脱,回收率约为11 mg/L发酵液。卵巢摘除大鼠模型验证了其药效学活性。该工艺稳定,简便,易于控制,为后期中试及大规模生产提供了思路。
- 庄志华施小明王春晓吴洁刘景晶李泰明
- 关键词：重组人甲状旁腺素包涵体正交实验设计骨密度
