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排序方式：

伪狂犬病病毒gG启动子控制的绿荧光蛋白表达盒的构建: 克隆了伪狂犬病病毒鄂A株晚期糖蛋白gG基因的启动子并进行了序列分析。根据测序结果,以pEGFP—N1为模板,设计一对引物,对含增强绿荧光蛋白(EGFP)cDNA、SV40 Poly(A)约1.0kb的片断进行PCR扩增,...; 方六荣陈焕春肖少波钱平何启盖王革非; 关键词：伪狂犬病病毒

伪狂犬病病毒鄂A株gI基因的克隆、表达及gI/gE重组杆状病毒的构建: 由于糖蛋白对PrV的复制、毒力、诱发保护性免疫等方面起重要作用,而成为PrV分子生物学研究的重点.目前已有11种糖蛋白被鉴定,gI是其中一种十分重要的非必需糖蛋白,在决定病毒的毒力及神经嗜性等方面起重要作用.此外,gI能...; 王革非; 关键词：伪狂犬病病毒 GI基因重组病毒; 文献传递

猪细小病毒VP_2蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性被引量：12: 2002年; 将猪细小病毒 (PorcineParvovirus,PPV)vp2 基因重组到杆状病毒Bac To Bac表达系统的pFastBacⅠ质粒中 ,构建了pFast vp2 质粒。在DH10 Bac大肠杆菌中 ,pFast vp2 与改造过的苜蓿夜蛾核型多角体病毒 (AcNPV)基因组 (Bacmid)发生同源重组 ,从而获得重组穿梭载体Bac mid vp2 ,转染Sf9细胞得到重组病毒AcNPV vp2 。SDS PAGE和Western blotting分析可见大小约为 6 4kD的特异性带 ,表明AcNPV vp2 在Sf9细胞中成功地表达了PPVVP2 蛋白。红细胞凝集试验和间接ELISA进一步证实 ,表达的VP2 蛋白具有与全病毒相同的血凝活性和相似的抗原性。电镜观察VP2 蛋白的粗提物 ,发现VP2 蛋白可自行装配成许多病毒样粒子 (VLPs); 吕建强陈焕春赵俊龙肖少波王革非; 关键词：猪细小病毒 VP2蛋白昆虫细胞

伪狂犬病病毒gG基因缺失通用转移载体的构建被引量：10: 2001年; 对克隆有伪狂犬病病毒Ea株基因组DNASphI 15kb片段的质粒pBSA用SphI和KpnI消化 ,将含gG全基因及其上游PK基因、下游gD基因部分编码区约 2 .6kb的片段亚克隆到消除了EcoRI位点的载体pUC19中 ,获得重组质粒pUSK(E)。以pEGFP N1为模板 ,通过PCR扩增约 0 .3kb的SV40Poly(A)片段 ,并将其克隆到杆状病毒转座载体pFastBac1的NotI和PstI位点 ,利用pFastBac1的BamHI和PstI将含有 9个酶切位点以及SV40Poly(A)的片段亚克隆到pUSK(E)的相应位点 ,在插入的同时导致gG基因 5’端编码区约 40 0bp的缺失 ,构建了由gG启动子驱动gG部分编码区缺失的通用转移载体pgG Uni。序列分析进一步证实 :有 7个单一酶切位点可供外源基因直接插入。; 方六荣陈焕春肖少波王革非马相如; 关键词：伪狂犬病病毒通用转移载体克隆真核表达系统疱疹病毒科分子生物学

用PCR检测猪胸膜肺炎放线杆菌被引量：29: 2001年; 为了快速诊断猪的传染性胸膜肺炎 ,试验设计合成了 1对引物 ,建立了检测猪胸膜肺炎放线杆菌的PCR方法。猪胸膜肺炎放线杆菌Ⅰ型菌血清 2、5、6、9、10型均能扩增出预期片段 ;大肠杆菌、猪痢疾蛇形螺旋体、多杀性巴氏杆菌、鸡葡萄球菌和支气管败血性波氏杆菌的扩增结果均为阴性。用该方法检测了自猪肺脏分离的30个菌株 ,有 11株为阳性 ,19株为阴性。结果证实。; 刘军发何启盖陈焕春吴斌逯忠新曹胜波徐引弟王革非刘正飞; 关键词：聚合酶链式反应 PCR

伪狂犬病病毒鄂A株gl基因的克隆、表达及gl/gE重组杆状病毒的构建: 伪狂犬病病毒(PrV)属疱疹病毒科，α-疱疹病毒亚科，可引起多种家畜及野生动物的伪狂犬病。猪是PrV的天然宿主，感染PrV的猪常表现为神经系统的功能絮乱及呼吸系统性疾病并引起严重的繁殖障碍。给全球的养猪业造成巨大的经济损...; 王革非; 关键词：伪狂犬病病毒 GI基因重组病毒; 文献传递

伪狂犬病病毒gE基因在昆虫细胞中的高效表达被引量：6: 2001年; In order to develop a simple and safe test for the detection of vaccinated as well as wild type Pseudorabies virus (PRV) infected pigs,the modified gE gene of PRV Ea strain,obtained by cutting the 5’ UTR using PCR and DNA recombinant technique,was inserted into baculovirus expression vector pFastBac 1,resulting the trans-position plamid pFE1.75.After homologous recombination,recombinant baculovirus rvBacE1.75 was gained and high level expression of glycoprotein E (gE) was observed after the infection of rvBacE1.75 to Tn-5B1-4 cells.The expression product was 80～88kD and was specific to antisera against PRV Ea strain by Western-blotting.Purified recombinant proteins were used as an antigen in Latex Agglutination Test(gE-LAT) and the test was specific,sensitive,safe and simple.; 方六荣陈焕春肖少波何启盖王革非; 关键词：伪狂犬病毒 GE基因昆虫细胞乳胶凝集试验动物病毒

伪狂犬病病毒gI/gE双缺失通用转移载体的构建与初步应用被引量：2: 2003年; 对含伪狂犬病病毒 (pseudorabies virus,PRV) Ea株 g I、g E、11K全基因 ,g D、2 8K基因部分编码区的质粒p SK4.5进行改造 ,消除其中的 Bam H 和 Not 位点 ,将晚期基因 g G的启动子、多克隆位点以及 SV 40 poly(A)同时插入改造后的质粒 p SKBN的 Stu 和 Bst E 位点 ,取代 g I和 g E的部分编码区 ,构建了由 g G启动子驱动的 g I/ g E双缺失通用转移栽体 pg GIE- Uni。序列分析进一步证实 :至少有 8个单一酶切位点可供外源基因直接插入 ,上下游侧翼分别为 0 .8kb和 2 .4kb。将猪繁殖 -呼吸障碍综合征 (兰耳病 )主要抗原基因 ORF5插入 pg GIE- Uni的 Bam H 和 Not 位点之间 ,构建了含 ORF5的转移质粒 pg GIE- ORF5。上述结果为进一步研制猪伪狂犬病 -兰耳病的 2价基因工程疫苗奠定了基础。; 方六荣陈焕春肖少波马相如王革非; 关键词：伪狂犬病病毒通用转移载体

伪狂犬病毒gI基因的克隆表达及其对病毒增殖的影响被引量：10: 2002年; 从伪狂犬病毒 (PRV)国内地方分离Ea株基因组DNA片段中克隆了完整的gI基因 ,序列分析结果表明 ,gI基因编码区全长 1 1 0 1bp ,可编码 3 6 6个氨基酸残基 ,二级结构预测具有典型I型膜蛋白特征。与GenBank中收录的国外Rice株的同源比较发现 ,Ea株gI在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处突变 ,尤其是潜在胞浆区中连续两个碱基的缺失导致移码突变 ,致使gI基因的读码框架后移 ,从而导致Ea株gI较rice株长 1 6个氨基酸残基。将gI基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1 +中的人巨细胞病毒早期启动子下游 ,构建的真核表达质粒转染PK 1 5细胞 ,间接免疫荧光检测证实gI获得正确表达。进一步测定天然缺失gI的PRV弱毒Bartha株在表达gI细胞系和空白载体转染的对照细胞系中的蚀斑形成单位 (pfu)和组织细胞培养半数感染量 (TCID50 ) ,结果显示 :Bartha株在表达gI细胞系中的pfu和TCID50 分别为对照细胞系的 1 6 4 %和 2 0 0 %。; 肖少波方六荣王革非陈焕春洪文洲; 关键词：伪狂犬病毒 GI基因病毒增殖体外表达动物病毒

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王革非