范芳
- 作品数：61 被引量：132H指数：6
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- shRNA沉默HBx下调HepG2.2.15细胞基质金属蛋白酶2的表达
- 2014年
- 目的探讨HBx小发夹RNA(shRNA)对HepG2.2.15细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响。方法采用psiHBV/X质粒转染HepG2.2.15细胞,反转录PCR评估沉默效率;MTT法检测转染后HepG2.2.15细胞增殖情况;实时定量PCR(qRT-PCR)检测MMP-2 mRNA表达;Western blot法检测MMP-2蛋白表达的变化。结果反转录PCR检测HBx基因的沉默效率为53.6%;MTT检测结果显示转染24、48、72 h后HepG2.2.15细胞的增殖受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);psiHBV/X质粒转染HepG2.2.15细胞后,qRT-PCR和Western blot检测结果显示,HepG2.2.15细胞中MMP-2基因的mRNA水平和蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰技术抑制HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达,可抑制细胞增殖,下调HepG2.2.15细胞中MMP-2的表达。
- 李长福孙越鹏耿磊范芳
- 关键词：HBX基因HEPG2
- PEI-CS/siRNA复合颗粒对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU中MRE11表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨聚乙烯亚胺-壳聚糖(PEI-CS)/si RNA复合颗粒对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU中MRE11表达的影响。方法:采用复凝聚法将PEI-CS(100μg/m L)与不同浓度的MRE11 si RNA-FAM形成PEI-CS/si RNA复合颗粒,并转染BEL7402/5-FU细胞,用荧光显微镜和Real-time PCR检测转染效率和沉默效率。结果:荧光显微镜观察结果显示:转染细胞48 h后,3.125、6.25、12.5、25、50μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒的转染率分别为62.31%、76.09%、79.99%、86.49%、96.59%。转染细胞48、72、96 h后,12.5μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒的转染率分别为78.22%、55.76%、42.85%,25μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒的转染率分别为83.67%、74.23%、67.45%。Real-time PCR检测结果显示:25μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒转染48小时后,对BEL7402/5-FU细胞中MRE11基因的沉默效率为35.4%。结论:聚乙烯亚胺-壳聚糖/si RAN复合颗粒能有效转染肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU,并对BEL7402/5-FU细胞中MRE11基因表达有一定抑制作用。
- 潘杰朱欣婷刘云谢星星侯玉群李长福范芳
- 反义c-myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞生长的抑制作用被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨反义c myc寡核苷酸 (ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞 (LEC)生长的影响。方法 人工合成与c myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞 ,应用细胞计数法和MTT法观察反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响。结果 2 5～ 10 0 μmol/L反义c myc寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖 ,10 0 μmol/L时作用较显著。 结论 反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的白内障晶体上皮细胞的生长增殖有抑制作用。
- 范芳葛正龙李长福李海祥曾小平
- 关键词：晶体上皮细胞反义C-MYC寡核苷酸半乳糖增殖ASODN
- 八氯腺苷对A549和H1299细胞周期的影响及机制探讨
- 2014年
- 目的八氯腺苷对肺癌细胞株A549和H1299细胞增殖及细胞周期的影响及其机制探讨。方法 A549和H1299经10.0μmol/L八氯腺苷处理后,MTT法检测细胞生长和增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测DNA-PKcs、γ-H2AX、Ku80、Ku70及TopoⅠ的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,用10.0μmol/L八氯腺苷分别处理A549、H1299细胞24、48、72h后,A549、H1299细胞生长被抑制;流式细胞分析则显示,A549、H1299细胞G2/M期细胞数增多;Western blot结果表明,γ-H2AX的表达均增加,DNA-PKcs蛋白的表达均下降,而Ku80、Ku70的表达未见明显变化;经八氯腺苷处理后TopoⅠ蛋白在A549细胞中的表达逐渐增加,而在H1299细胞中的表达却逐渐下降。结论八氯腺苷可抑制A549和H1299细胞生长,诱导细胞发生G2/M期阻滞,其机制可能与DNA-PKcs表达下调有关。在A549细胞中TopoⅠ可能通过p53依赖途径介导DNA损伤修复,从而引发对细胞的毒性作用;而在p53缺失的H1299细胞中可能是通过其它途径调控细胞周期。
- 范芳安国顺李淑艳倪菊华贾弘禔
- 关键词：细胞周期拓扑异构酶I
- HBx-siRNA下调HepG2.2.15细胞中血管内皮生长因子的表达
- 2014年
- 目的研究HBx干扰质粒pSIHBV/X对肝癌细胞HepG2.2.15中VEGF表达的影响。方法将针对HBx基因的干扰质粒载体pSIHBV/X转染HepG2.2.15细胞,用Real-time PCR检测转染前后细胞HBx、VEGF基因mRNA表达,Western blot法检测细胞VEGF蛋白表达。结果Real-time PCR检测结果显示,转染后24h、48h、72h实验组HepG2.2.15细胞中HBx基因mRNA相对表达水平分别为(121.13±8.72)、(83.17±7.930)、(56.33±6.17);24h、48h、72h实验组HepG2.2.15细胞中VEGF基因mRNA相对表达水平分别为(76.26±7.16)、(59.17±6.420)、(42.17±4.33);Western blot检测结果显示,24h、48h实验组HepG2.2.15细胞中VEGF蛋白相对表达水平分别为(0.357±0.025)、(0.218±0.051)。Western blot及RT-PCR结果显示,与对照组相比实验组中VEGF mRNA及蛋白的表达量明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向HBx的siRNA干扰质粒能抑制HepG2.2.15细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达。
- 李长福庄海陈佳瑜范芳
- 关键词：RNA干扰HBX基因血管内皮生长因子
- SiRNA沉默HBx对HepG2.2.15细胞人端粒酶逆转录酶基因表达的影响
- 2014年
- 目的探讨应用RNA干扰技术沉默HBx对HepG2.2.15细胞中hTERT基因表达的影响。方法 (1)将pSIHBV/X质粒转染HepG2.2.15细胞,RT-PCR法评估沉默效率。(2)MTT法检测转染24h、48h、72h后细胞增殖情况。(3)Real-time PCR和Western blot检测hTERT表达情况。结果测序结果显示pSIHBV/X质粒构建正确;RT-PCR检测HBV x基因的沉默效率为53.6%;MTT检测结果显示转染24h、48h、72h后HepG2.2.15细胞的增殖受抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果均显示,转染pSIHBV/X质粒后HepG2.2.15细胞中hTERT基因的mRNA水平和蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA沉默HBx基因可抑制HepG2.2.15细胞中癌症标志基因hTERT的表达。
- 范芳孙越鹏耿磊李长福
- 关键词：RNA干扰HBX基因HEPG2.2.15细胞人端粒酶逆转录酶
- 阻断Hedgehog信号通路对HepG2.2.15细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的探讨环耙明阻断Hedgehog信号通路对肝癌细胞HepG2.2.15增殖的影响。方法培养肝癌细胞HepG2.2.15,用5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L环耙明处理HepG2.2.15细胞24h、48h、72h,采用MTT检测环耙明对细胞活力的影响;EDU法检测细胞DNA合成情况;Real-timePCR法检测细胞Gli1的表达情况。结果用5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L浓度的环耙明处理HepG2.2.15细胞24h、48h、72h后,MTT检测结果显示细胞活力降低,较空白组差异明显(P<0.05);EDU法检测结果显示25μmol/L的环耙明作用于细胞不同时间后,HepG2.2.15细胞的DNA合成率下降,与空白组相比差异有统计学意义(P<0.01);Real-time PCR法实验结果显示5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L浓度的环耙明处理组与对照组相比,Gli1表达水平明显降低(P<0.05)。结论不同浓度环耙明能抑制HepG2.2.15细胞的增殖,减少HepG2.2.15细胞的DNA合成率;其作用机制可能与HepG2.2.15细胞中Gli1、mRNA的表达水平下降有关。
- 沈璇黄继锦张雪范芳李长福
- 关键词：HEDGEHOG信号通路肝癌增殖
- 野木瓜果实总皂苷对BEL-7402/5 FU细胞多药耐药性的逆转作用被引量：3
- 2017年
- 目的研究野木瓜果实总皂苷对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5FU多药耐药(MDR)的逆转作用,并初步探讨其耐药逆转机制。方法采用MTT法测定5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)和野木瓜果实总皂苷对BEL-7402细胞、BEL-7402/5FU细胞的毒性及野木瓜果实总皂苷逆转MDR的效果;利用蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达情况。结果BEL-7402/5FU细胞对5-FU、ADM、MMC的耐药指数分别为21.71,2.73,2.11;野木瓜果实总皂苷能有效抑制BEL-7402/5FU细胞增殖,无细胞毒性剂量为5,10μg/mL,逆转耐药倍数分别为1.36、1.93;野木瓜果实总皂苷联合5-FU作用BEL-7402/5FU细胞,可降低P-gp蛋白表达。结论野木瓜果实总皂苷能部分逆转BEL-7402/5FU细胞MDR,其机制可能是通过下调P-gp的表达而实现的。
- 祝小波李宇婷朱欣婷李大玉刘云范芳李长福
- 关键词：野木瓜总皂苷多药耐药耐药逆转
- 壳聚糖-磺酸甜菜碱对人肝癌HepG-2细胞的siRNA递送实验研究
- 2017年
- 目的设计合成新型高分子材料壳聚糖-磺酸甜菜碱(CS-DMAAPS)化合物,并考察该材料与siRNA复凝后对人肝癌HepG-2细胞的转染能力。方法采取Michael加成法将含C=C双键的磺酸甜菜碱化合物(DMAAPS)与壳聚糖(CS)偶联接枝;利用核磁共振氢谱进行结构表征;CCK-8检测材料的细胞相容性;荧光显微镜观察siRNA的转染效率;Real-time PCR检测转染siRNA后对Bcl-2 mRNA的沉默效率。结果核磁共振氢谱数据表明:DMAAPS已成功枝接到CS上。荧光显微镜观察结果显示:质量比(m0/mt:CS-DMAAPS/siRNA)为32、16、8、4、2的复合颗粒分别转染人肝癌HepG-2细胞24 h后,转染率分别为33.78%、45.82%、50.98%、69.89%、81.22%。Real-time PCR检测结果显示:质量比为4的CS-DMAAPS/siRNA复合颗粒转染人肝癌HepG-2细胞48 h后,对人肝癌HepG-2细胞的Bcl-2基因沉默效率为26.8%。结论壳聚糖-磺酸甜菜碱(CS-DMAAPS)化合物能实现siRNA对人肝癌HepG-2细胞的转染,且细胞相容性良好,能实现目标基因的部分沉默。
- 董伟李大玉惠景范芳李长福姜念刘云朱欣婷
- 关键词：壳聚糖人肝癌HEPG-2细胞SIRNA
- 沉默DNA-PKcs对肝癌耐药细胞Bel7402/5-Fu凋亡的影响被引量：2
- 2018年
- 目的研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对肝癌耐药细胞Bel7402/5-Fu细胞凋亡的影响。方法实验分为空白对照组、脂质体对照组、NC对照组、siDNA-PKcs实验组。采用噻唑蓝(MTT)法检测耐药细胞Bel7402/5-Fu的耐药性;采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs寡核苷酸片段转染Bel7402/5-Fu细胞;Real-time PCR和Western blot分别检测细胞DNA-PKcs mRNA及蛋白的表达情况;倒置荧光显微镜下观察细胞形态变化(Hoechst33342染色法);流式细胞术检测细胞凋亡情况(AnnexinV/PI双染法);Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-x基因长片段(Bcl-xl)蛋白的表达情况。结果 MTT检测Bel7402/5-Fu细胞的半抑制浓度(IC50)明显增高,耐药细胞Bel7402/5-Fu的耐药指数为13.13;DNA-PKcs的mRNA与蛋白表达水平明显减少,设计的siDNA-PKcs特异序列能有效沉默细胞DNA-PKcs的表达;Hoechst-33342染色检测结果显示siDNA-PKcs实验组细胞体积缩小、细胞核边集、呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示,siDNA-PKcs实验组细胞凋亡率比其余组增加(P<0.01);Western blot检测结果显示siDNA-PKcs实验组Bax蛋白表达水平比其余组高,Bcl-xl蛋白表达水平比其余组低(P<0.01)。结论siDNA-PKcs能诱导肝癌耐药细胞Bel7402/5-Fu细胞凋亡,并能上调促凋亡蛋白Bax的蛋白表达水平,抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的蛋白表达水平。
- 李大玉余春波朱欣婷刘喜平范芳李长福
- 关键词：药物耐受性
