蔡富强
- 作品数：18 被引量：11H指数：3
- 供职机构：三峡大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对淋巴瘤细胞Jurkat生长的影响被引量：1
- 2010年
- 探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)反义RNA是否对人淋巴瘤细胞Jurkat的生长具有抑制作用。含反义RNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Rodc用脂质体转染Jurkat细胞,G418筛选ODC表达抑制的细胞株,MTS法分析细胞增殖,Western blotting检测细胞中ODC蛋白表达水平,半定量RT-PCR检测细胞中ODC mRNA含量,流式细胞术检测细胞周期的变化,DNA片段化分析细胞凋亡。结果显示,成功获得ODC表达抑制的淋巴瘤细胞株J/o,ODC反义RNA转染细胞后,引起Jurkat细胞生长缓慢和S/G2细胞周期停滞,细胞对抗癌药物DFMO敏感性显著增加。由此证明,ODC反义RNA能抑制人T淋巴瘤Jurkat细胞的生长,具有治疗人白血病的潜在应用价值。
- 任玉珊韩钰蔡富强王艳林
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶JURKAT细胞反义RNA
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶I与多胺代谢被引量：3
- 2011年
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶I(ornithine decarboxylase antizyme 1,OAZ1)是调节细胞内多胺含量的重要因子,参与细胞生长与分化、胚胎发育、基因表达调控等重要生理过程,也是抗肿瘤治疗的潜在分子靶点。简要综述鸟氨酸脱羧酶抗酶I在结构与功能,及其调控多胺代谢机制方面的研究进展。
- 蔡富强王艳林
- 关键词：多胺代谢调控肿瘤
- siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1的表达抑制黑素瘤细胞增殖被引量：1
- 2011年
- 目的:研究siRNA干扰鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)的表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:构建OAZI-1特异性siRNA表达质粒psilencer2.1-U6/OAZI-1及对照psilenc-er2.1-U6/scrambled质粒,脂质体转染法将质粒转染入B16-F1细胞,Western blotting和定量PCR检测B16-F1细胞中OAZI-1的表达。MTT法和流式细胞术检测psilencer2.1-U6/OAZI-1对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响;MTT法检测干扰OAZI-1表达后B16-F1细胞对抗肿瘤药物紫杉醇(docetaxel)的敏感性。结果:成功获得稳定转染psilencer2.1-U6/OAZI-1质粒的B16-F1细胞(B16/OAZI-1细胞),B16/OAZI-1细胞中OAZI-1 mRNA和蛋白表达分别为阴性对照B16/scrambled细胞的25.0%和18.9%。干扰OAZI-1的表达抑制B16-F1细胞的增殖,G0/G1期细胞比例增加[(57.0±0.8)%vs(63.5±0.7)%,P<0.01],而S期和G2/M期细胞比例减少[(31.5±0.7)%vs(27.5±0.3)%,P<0.05;(11.5±0.3)%vs(9.1±0.6)%,P<0.01]。干扰OAZI-1的表达能降低B16-F1细胞对紫杉醇的敏感性。结论:siRNA干扰OAZI-1的表达能抑制黑素瘤B16-F1细胞的增殖,并降低其对紫杉醇的敏感性。
- 何玲韩钰刘梦瑶蔡富强王艳林
- 关键词：RNA干扰技术黑素瘤细胞
- 小鼠OAZ2基因的原核表达及抗体制备
- 2011年
- 目的:克隆小鼠鸟氨酸脱羧酶抗酶2(OAZ2)功能基因,原核表达、纯化OAZ2蛋白并制备抗OAZ2多克隆抗体。方法:RT-PCR法从鼠黑色素瘤细胞总RNA中克隆OAZ2 cDNA后,通过重叠延伸PCR技术构建无需移码即可全长翻译的功能基因。将OAZ2功能基因克隆入原核表达载体pET15b并原核表达。表达的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,用SDS-PAGE和West-ern Blot分析鉴定。用纯化的OAZ2蛋白作为抗原免疫Bab/C小鼠以制备多克隆抗体,制备抗体用ELISA和Western Blot检测抗体滴度和特异性。结果:成功获得小鼠OAZ2 cDNA并构建出无需移码翻译的OAZ2功能基因。OAZ2功能基因在大肠杆菌BL21(DE3)中可诱导性高表达并能用Ni-NTA树脂高效纯化。用纯化蛋白免疫Bab/C小鼠制备的抗血清经ELISA检测有较高的多克隆抗体效价(>1:64 000),经Western blot鉴定可与纯化的OAZ2蛋白质特异性结合。结论:建立了鼠OAZ2蛋白原核表达和纯化技术,制备出高效价和特异性抗OAZ2多克隆抗体,为进一步研究OAZ2基因的功能奠定了基础。
- 刘梦瑶韩钰何玲蔡富强王艳林
- 关键词：重叠延伸PCR原核表达抗体
- 鼠OAZ1基因的真核表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达
- 2010年
- 构建鼠OAZ1基因真核表达质粒,观察OAZ1-GFP融合蛋白在绿猴肾细胞COS7中的表达。利用RT-PCR的方法获得鼠OAZ1基因,再利用重叠延伸PCR缺失掉OAZ1序列中的205位碱基T,由此获得无需阅读框移码即可编码全长OAZ1的突变基因。将此突变基因克隆入真核表达载体pEGFP-N1获得重组质粒pEGFP-N1-OAZ1-T。将此质粒瞬时转染COS7后,采用RT-PCR,Western blotting,免疫荧光技术观察检测目的基因的表达情况。结果显示,酶切和测序证明质粒pEG-FP-N1-OAZ1-T构建正确,转染COS7细胞后,OAZ1-GFP融合蛋白能在细胞中高效表达。成功构建了pEGFP-N1-OAZ1-T真核表达质粒,在COS7细胞内,该质粒能成功指导OAZ1-GFP融合蛋白合成。
- 刘梦瑶韩钰蔡富强何玲王艳林
- 关键词：多胺代谢融合蛋白真核表达
- 鸟氨酸脱羧酶抗酶融合蛋白高表达对小鼠黑素瘤细胞B16-F1细胞周期的影响被引量：4
- 2011年
- 目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)与绿色荧光蛋白融合蛋白GFP-OAZ1和GFP-OAZ2高表达对小鼠黑色素瘤B16-F1细胞周期的影响。方法构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达质粒并经脂质体法瞬时转染B16-F1细胞,然后用Western blot分析法和荧光显微镜下观察融合蛋白在B16-F1细胞中的表达。流式细胞分析用于检测GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞周期的影响。Western blot分析法鉴定GFP-OAZ融合蛋白高表达对B16-F1细胞中鸟氨酸脱羧酶(ODC)酶蛋白水平的影响。结果成功构建的GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因B16-F1细胞中正确高效表达。经流式细胞检测发现,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达导致细胞G0/G1期阻滞。当用OAZ1和OAZ2分别与ODC共转染B16-F1细胞时,OAZ1融合蛋白高表达显著性减低细胞内ODC蛋白水平,但OAZ2融合蛋白高表达无此种影响。结论成功构建GFP-OAZ1和GFP-OAZ2融合基因的真核表达载体,OAZ1和OAZ2融合蛋白高表达均能将B16-F1细胞阻滞于G0/G1期,但仅OAZ1融合蛋白能显著性促进ODC降解,OAZ2融合蛋白无此种功能。
- 刘梦瑶韩钰蔡富强何玲王艳林
- 关键词：融合蛋白真核表达细胞周期
- 人鸟氨酸脱羧酶抗酶1的抗体制备
- 目的:OAZ1(Ornithine Decarboxylase Antizyme1,鸟氨酸脱羧酶抗酶1)是多胺诱导的一种能负反馈调控多胺合成和多胺运输的蛋白,通过多种途径在多胺代谢内外发挥着抗肿瘤效应,可望成为抗肿瘤治疗...
- 蔡富强
- 关键词：制药化学工业抗肿瘤药物
- 文献传递
- 高表达精脒/精胺N^1-乙酰基转移酶对人肺癌A549细胞株生长的影响
- 2011年
- 旨在研究人精脒/精胺N1-乙酰基转移酶(spermidine/spermine N1-acetyltransferase,SSAT)高表达对人肺癌A549细胞生长的影响。以pCR2.1-SSAT质粒为模板,PCR法扩增人SSAT基因并克隆至pcDNA3.1表达载体。重组质粒转染A549细胞后,RT-PCR法和Western blotting法筛选SSAT高表达的细胞株。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。成功构建pcDNA3.1-SSAT重组质粒,用该质粒转染A549细胞后,筛选获得稳定高表达SSAT的细胞株。SSAT高表达导致细胞生长抑制,S期细胞减少和自发性凋亡细胞增多。结果显示,稳定高表达SSAT可在A549肺癌细胞中部分模拟多胺类似物类抗癌药物的药理活性,导致瘤细胞生长抑制和细胞凋亡。
- 柳蔚韩钰蔡富强王艳林
- 关键词：SSAT肺癌细胞
- 人精胺/精眯N^1-乙酰基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
- 2011年
- 目的制备鼠抗人精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21(DE3)中原核表达带6×His标签的SSAT重组蛋白,并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SSAT重组蛋白免疫Balb/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗SSAT单克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用ELISA、Western blot及免疫组织化学技术检测。结果成功建立了稳定分泌鼠抗人SSAT的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该单克隆抗体可用于ELISA、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光等分析技术。结论成功制备SSAT单克隆抗体,为SSAT相关的分子和病理研究奠定了基础。
- 李春红杨建林韩钰蔡富强王艳林
- 关键词：重组蛋白单克隆抗体
- 高效液相色谱法测定细胞裂解液中多胺的含量
- 2010年
- 目的:建立肿瘤细胞样品中多胺的HPLC测定法。方法:取处理好的肿瘤细胞裂解液样品,以1,7-庚二胺(DAH)为内标,经苯甲酰氯柱前衍生,乙醚提取衍生物。HPLC分析条件:LunaC18柱(150mm×4.6mm,5μm)为固定相,乙腈-水(62∶38)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm。结果:多胺中的腐胺、精脒和精胺能较好分离。腐胺的检测限为35.36μg.L-1,精脒为88.90μg.L-1,精胺为77.74μg.L-1。多胺各对照品中,腐胺在1.04～3.12mg.L-1之间,精脒在2.54～7.62mg·mL-1之间,精胺在2.99～8.97mg·mL-1之间,其线性关系均良好,相关系数(r)均大于0.999。腐胺、精脒和精胺平均加样回收率分别为96.84%,92.70%,90.05%。结论:建立了测定细胞多胺含量的HPLC方法,该方法简便、灵敏,能够满足肿瘤细胞样品中多胺含量测定的需要。
- 刘小琴何毓敏任玉珊蔡富强王艳林
- 关键词：高效液相色谱法多胺
