赵金红 作品数:6 被引量:8 H指数:2 供职机构: 解放军第208医院 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
志贺毒素A/B(ShT-A/B)亚单位基因的克隆与序列分析 被引量:3 2003年 应用PCR技术从Ⅰ型痢疾志贺茵(Shigella dysenteriae type Ⅰ)中,分别扩增出约895bp和225bp的成熟ShT-A,B基因片段,直接克隆至pGEM-T载体中,经蓝白斑筛选、PCR和双酶切鉴定正确后,命名为pGEM-ShTA_2和pGEM-ShTB_3。测序结果表明,插入的片段是ShT-A,ShT-B,且与GenBank中ShT-A,B核酸序列完全一致,从而为重组ShT-A,B的表达研究奠定了基础。 喻华英 王景林 高丰 康琳 吴东林 赵金红关键词:基因克隆 A型肉毒毒素轻链基因的克隆及其结构分析 被引量:2 2003年 以文献报道的A型肉毒毒素基因全序列为标准,设计并合成一对引物,自肉毒梭菌基因组中扩增出肉毒毒素轻链基因片段,并将扩增产物与pGEM-T载体在体外连接,构建测序重组质粒,进行测序和基因结构分析。PCR扩增获得了产物为1364bp的DNA片段,测序结果与DNA数据库对照检索分析证明,此基因片段与GenBank中的A型肉毒毒素LC基因的一致性达99.9%以上,可以认为克隆的基因为A型肉毒毒素LC基因。 贾宏丽 赵金红 王景林 康琳关键词:A型肉毒毒素 轻链 基因克隆 基因结构 毒性 肉毒梭菌 志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式分析 2004年 用KpnⅠ和HindⅢ双酶切pGEMTB3克隆质粒,得到大小约为225bp的ShTB基因片段,分别将其插入到经双酶切的pQE40和pQE30表达载体中,构建了2个ShTB的重组表达质粒pQE40B3和pQE30B2,分别转化到E.coliM15,经IPTG诱导后,重组质粒目的蛋白均得到表达。其中,pQE40B3表达蛋白约占菌体总蛋白的37%,主要为包涵体形式。pQE30B2表达蛋白约占菌体总蛋白的16%,主要为可溶性形式,约9.2%。为重组抗原的制备提供了必要的物质基础。 喻华英 王景林 高丰 康琳 吴东林 赵金红志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析 2004年 用KpnⅠ和HindⅢ双酶切pGEM -TB3 克隆质粒 ,得到为大小约为 2 2 5bp的ShT -B基因片段 ,分别将其插入到经双酶切的 pQE4 0和 pQE30表达载体中 ,构建了两个ShT -B的重组表达质粒pQE4 0 -B3 和 pQE30 -B2 ,分别转化到E .coliM15。经IPTG诱导后 ,重组质粒目的蛋白均得到表达。其中 ,pQE4 0 -B3 和pQE30 -B2 ,分别化到E .coliM 15 ,经IPTG诱导后 ,重组质粒目的蛋白均得到表达。其中 ,pQE4 0 -B3 表达蛋白约占菌体总蛋白的 37% ,主要为包涵体形式。pQE30 -B2 表达蛋白约占菌体总蛋白的 16 % ,主要为可溶性形式 ,约 9 2 %。为重组抗原的制备提供了必要的物质基础。 喻华英 王景林 高丰 康琳 吴东林 赵金红志贺毒素B(ShT-B)在E.coli中的融合表达及特异性抗体制备 被引量:3 2004年 用KpnⅠ、Hind Ⅲ酶切克隆载体pGEM-ShTB3,然后亚克隆入带有二氢叶酸还原酶(DHFR)的融合表达栽体pQE40,构建重组质粒pQE40-ShTB,转化到E。coli M15中,经IPTG诱导,实现了ShTB-DHFR融合蛋白的高表达,表达量约占菌体总蛋白的21.9%,为包涵体形式,在变性条件下,包涵体蛋白经螯合镍离子的次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和柱一步纯化,得到了纯度为90.5%的重组ShT-B.以纯化的shTB-DHFR融合蛋白免疫昆明鼠,并结合腹腔注射S180细胞,成功制备了抗ShTB腹水多克隆抗体,效价达1:1×10^6间接ELISA和Westem印迹结果表明,抗ShT-B多抗与重组蛋白和天然ShT均有特异性结合,本试验结果为毒素检测方法的研究奠定了基础。 喻华英 王景林 高丰 康琳 赵金红 吴东林关键词:志贺菌 抗体制备 二氢叶酸还原酶 克隆载体 志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析 用Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切pGEM-TB3克隆质粒,得到为大小约为225bp的ShT-B基因片段,分别将其插入到经双酶切的pQE40和pQE30表达载体中,构建了两个ShT-B的重组表达质粒pQE40-B3和pQE3... 喻华英 王景林 高丰 康琳 吴东林 赵金红文献传递