钱丽
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
- 供职机构：上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 可生物素化HLA-A2-生物素化序列融合基因的构建与表达被引量：3
- 2002年
- 本文采用RT PCR技术从人外周血PBMC中克隆HLA A2基因的胞外区 ,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列后 ,装入pET 42b (+)高效表达载体进行诱导表达。并对表达产物进行纯化与复性。结果成功地扩增出HLA A2基因并测序证实 ;构建了融合表达载体pET HLA A2 ,并获表达与纯化。为研究在原核系统中表达、纯化与复性及进一步体外构建MHC I类分子四聚体 ,探讨免疫识别机制奠定了基础。
- 钱丽钱书兵钱关祥
- 关键词：克隆HLA-A2纯化融合基因
- sOVA-linker-β2m融合蛋白构建表位特异的靶结构被引量：2
- 2003年
- 目的 构建融合基因sOVA linker β2m ,探讨通过内源性途径递呈的肽在细胞表面形成MHCⅠ类分子复合物的情况。方法 构建了真核表达载体pcDNA3/sOVA linker β2m及不含有 β2m基因的对照载体 ,以研究 β2m是否能在此过程中起到辅助的作用。结果 RT PCR与原位杂交结果显示在各转导细胞中均有融合基因的正确表达 ,且二者的表达水平差异无显著性 (P >0 .0 5 )。进一步对细胞内、细胞表面H 2Kb OVA复合物的分布进行分析 ,表明各转导细胞中均有正确的蛋白质分子翻译合成 ,并能表达在细胞表面 ,但融合有 β2m基因的EL4 /eb2m细胞的表达量远远高于没有融合 β2m基因的转导细胞EL4 /OVA。结论 β2m基因与特异性抗原肽的融合 ,易于形成稳定的MHCⅠ类分子复合物 ,提高抗原呈递效率。
- 钱丽张兴黔钱关祥
- 关键词：基因表达
- H-2K^b-BSP融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：5
- 2002年
- 目的 构建可生物素化Ｈ－２Ｋ～ｂ－ ＢＳＰ融合基因的表达载体。方法 采用 ＰＣＲ技术，从 ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（＋） Ｋ～ｂ中扩增出Ｈ－２Ｋ～ｂ基因的胞外区，拼接上依赖 ＢｉｒＡ酶的可生物素化序列后，克隆人ｐＥＴ－４２ｂ（＋）高效表达载体进行诱导表达。并对表达产物进行纯化与复性。结果 成功地构建了融合表达载体ｐＥＴ－Ｈ－２Ｋ～ｂ－ＢＳＰ，对表达产物进行纯化与复性，并应用仅识别完整构象的抗Ｋ～ｂ分子的单克隆抗体对复性后产物进行了检测。证明表达产物已部分恢复了构象。结论 获得Ｈ－２Ｋ～ｂ－ ＢＳＰ融合蛋白的高效表达，为研究在原核系统中表达、纯化与复性，以及进一步利用亲和素在体外构建ＭＨＣ－Ｉ类分子四聚体，探讨免疫识别机制奠定了基础。
- 钱丽钱书兵钱关祥
- 关键词：纯化复性
- 人β2m基因的克隆及表达被引量：6
- 2001年
- 钱丽钱书兵钱关祥
- 关键词：RT-PCR基因表达基因克隆
- 可溶性MHC四聚体分子的构建及应用被引量：1
- 2001年
- 钱丽钱关祥
- 关键词：MHC特异性T细胞
- OVA_(257-264)肽-β2m融合基因的构建及体内特异性CTL的诱导被引量：5
- 2002年
- 目的 构建融合基因OVA2 57 2 64 β2m的表达载体 ,并以其表达产物作为免疫原 ,在体内诱导特异性CTL。方法 采用PCR技术 ,从人肝癌细胞株SMMC 772 1中克隆人β2m基因 ,拼接上OVA(2 5 7～ 2 6 4)序列及linker后 ,克隆入pET 42b(+)高效表达载体进行诱导表达。对表达产物进行纯化与复性后 ,用其作为免疫原诱导特异性CTL ,并构建H 2Kb OVA四聚体检测特异性CTL。结果 成功地获得融合蛋白OVA2 57 2 64 β 2m及H 2Kb OVA四聚体 ,应用H 2Kb OVA四聚体对特异性CTL检测结果与经典的细胞毒试验一致。结论 OVA2 57 2 64 β 2m的表达产物 ,可有效的在体内诱导特异性CTL应答。在体外构建的MHCI类分子四聚体 。
- 钱丽钱关祥
- 关键词：四聚体特异性CTLPCR技术多肽疫苗
- H-2K^b-OVA复合物的构建及体内特异性CTL的诱导
- 2003年
- 在扩增了H 2Kb 基因后 ,将可生物素化的序列连接到其胞外区末端 ,构建成可溶性重组分子 ,进行原核表达。通过定点突变获得了高表达的融合蛋白 ,再利用 6×Histidinetag进行蛋白纯化 ,在对H 2Kb分子高亲和力的OVA2 57 2 64肽及 β2 m蛋白存在下 ,三者体外折叠成具有完整构象的H 2Kb OVA类分子复合物。用其作为免疫原诱导特异性CTL ,并构建H 2Kb OVA四聚体检测特异性CTL。应用H 2Kb OVA四聚体对特异性CTL检测结果与经典的细胞毒试验一致 ,同时对胞外IFN γ进行了检测。说明H 2Kb OVA复合物可有效诱导体内特异性CTL反应 ,在体外构建MHC I类分子四聚体 。
- 钱丽李锋钱关祥
- 关键词：四聚体纯化特异性CTL
- 可生物素化HLA-A2-BSP融合基因的表达与纯化
- 目的 构建可生物素化HLA-A2融合基因表达载体.方法采用RT-PCR技术从人外周血PBMC中克隆HLA-A2基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列后,装入pET-42b(+)高效表达载体进行诱导表达.并对表...
- 钱丽钱关祥
- 文献传递
