钱年超
- 作品数：32 被引量：50H指数：4
- 供职机构：延边大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- 牛瑟氏泰勒虫MPsP双表位基因的克隆及原核表达
- 钱年超贾立军薛书江张影张守发
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及原核共表达被引量：2
- 2013年
- 根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1)设计2对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pET28α-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)将犬新孢子虫MAG1基因与IFN-γ基因拼接,构建pMD18-T-MAG1-IFN-γ克隆质粒和pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒,将鉴定正确的pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物。结果表明,SOE-PCR扩增获得双基因融合片段大小为1 491bp,与GenBank中发表的MAG1(EF580924.1)和IFN-γ(M29867.1)核苷酸序列的同源性为99%;MAG1-IFN-γ融合基因表达蛋白大小为82 000,具有较好的反应原性。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫IFN-Γ
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
- 2012年
- 为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的克隆及生物信息学分析被引量：7
- 2014年
- 为了研究猪附红细胞体α-烯醇化酶的功能,根据GenBank中猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的DNA序列设计引物,以猪附红细胞体吉林株DNA为模板,进行PCR扩增,将该基因克隆到pMD-18T载体后,进行序列测定及分析。结果表明:此序列编码393个氨基酸,与GenBank上登录的α-烯醇化酶序列核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为100%。蛋白质的分子理论值为42.4 ku,理论等电点为6.62。α-烯醇化酶二级结构以α螺旋为主,主要有6个抗原表位区域。系统进化分析显示,该基因与牛支原体的亲缘关系最近,与犬支原体亲缘关系最远。
- 薛书江张守发李海峰张影钱年超刘明明李积旭
- 关键词：猪附红细胞体克隆生物信息学分析
- 牛瑟氏泰勒虫与牛卵形巴贝斯虫多重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫内转录间隔子基因(ITS基因)和牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列,设计合成了2对特异性引物。通过对反应条件进行优化,建立了同时检测牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的多重PCR方法。结果显示,用该多重PCR方法可同时扩增出2条与试验设计相符的1 020bp(牛瑟氏泰勒虫)和537bp(牛卵形巴贝斯虫)的特异性条带,对牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的最低检出限分别为10pg/μL和1pg/μL。用该方法对采自吉林省珲春市的23份临床样本进行检测,结果牛瑟氏泰勒虫的阳性率为69%,牛卵形巴贝斯虫的阳性率为52%,混合感染率为52%。表明,建立的多重PCR方法可用于临床诊断。
- 王轶男钱年超黄国明胡诗悦薛书江贾立军张守发
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫多重PCR
- 延边地区牛瑟氏泰勒虫病的分子流行病学调查被引量：11
- 2012年
- 为了解吉林省延边地区牛瑟氏泰勒虫病的流行情况,分别采用血涂片染色镜检法和PCR方法对采自延边地区的206份牛血液样本进行了牛瑟氏泰勒虫病的分子流行病学调查。结果显示,PCR检测的阳性率为62.6%,显著高于血涂片染色镜检法检测的阳性率(17.5%)。采用统计学分析方法对PCR检测的206份血液样本进行了不同地区、不同年龄、不同品种及饲养方式的比较;结果,不同地区之间和不同品种之间瑟氏泰勒虫感染率差异不显著(P>0.05);而不同年龄阶段之间和不同饲养方式之间牛瑟氏泰勒虫感染率差异显著(P<0.05)。结果表明,吉林省延边地区是牛瑟氏泰勒虫病的流行地区。
- 胡诗悦钱年超王轶男贾立军张守发
- 关键词：瑟氏泰勒虫PCR分子流行病学调查
- 猪附红细胞体膜蛋白OxaA的克隆及生物信息学分析
- 为研究猪附红细胞体膜蛋白OxaA的结构及其在免疫保护中的功能。本试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体(猪支原体NC 015153.1)全基因组序列中膜蛋白OxaA基因,对猪附红细胞体膜蛋白OxaA基因进行PCR扩增...
- 张影贾立军薛书江钱年超张守发
- 文献传递
- 吉林省延边地区羊泰勒虫病的分子流行病学调查
- 为了解羊泰勒虫病在吉林省延边地区的流行情况,本试验采用PCR方法和血液涂片染色镜检法对吉林省延边地区延吉市、龙井市、和龙市、珲春市等4个地区采集的93份羊血液样本进行检测,并对不同地区、不同饲养方式、不同地理条件以及不同...
- 王轶男胡诗悦钱年超薛书江贾立军张守发
- 关键词：羊泰勒虫病PCR分子流行病学调查
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及真核共表达
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 吉林省延边地区羊泰勒虫病的分子流行病学调查被引量：4
- 2013年
- 为了解羊泰勒虫病在吉林省延边地区的流行情况,本研究采用PCR方法和血液涂片染色镜检法对吉林省延边地区延吉市、龙井市、和龙市、珲春市4个地区采集的93份羊血液样品进行检测,并对不同地区、饲养方式、地理条件以及不同年龄间羊泰勒虫病的感染情况进行比较分析。结果显示,PCR方法检测样品的阳性率为31.18%,显著高于血涂片染色镜检法19.35%的阳性率。经统计学分析,不同地区和不同品种,羊泰勒虫感染率差异不显著(p>0.05);而不同年龄阶段和不同饲养方式,羊泰勒虫的感染率差异显著(p<0.05)。调查结果表明,吉林省延边地区是羊泰勒虫病的流行地区。
- 王轶男胡诗悦钱年超薛书江贾立军张守发
- 关键词：羊泰勒虫病PCR分子流行病学调查
