顾金海
- 作品数：22 被引量：18H指数：3
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- 重组人白细胞介素-6对胶质瘤细胞U87增生侵袭的影响被引量：2
- 2015年
- 目的探讨重组人白细胞介素(IL)-6对胶质瘤细胞U87增生、侵袭能力的影响及其机制。方法应用CCK-8法检测IL-6对U87细胞增生的影响并计算增殖率;应用Transwell小室检测IL-6对U87侵袭的影响;应用Western印迹检测IL-6对胶质瘤细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态的影响。结果 IL-6能促进U87增生和侵袭能力(P<0.05),并伴随STAT3及p-STAT3蛋白表达上调(P<0.05)。结论 IL-6通过促进胶质瘤细胞STAT3磷酸化,从而促进了胶质瘤细胞的增生侵袭能力,为脑胶质瘤的临床治疗提供了理论支持。
- 刘雅琦顾金海孟锐安芳玲
- 关键词：白细胞介素-6增生
- 一种穗花杉双黄酮在制备治疗胶质瘤药物中的应用
- 本发明公开了一种穗花杉双黄酮在制备治疗胶质瘤药物中的应用，用穗花杉双黄酮对胶质母细胞瘤JAK2‑STAT3通路活化及肿瘤细胞凋亡和增殖的的影响。用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM穗花杉双黄酮处理胶质母...
- 顾金海牛建国文玉军孙涛王峰和祯泉强媛媛王鹏杨勇
- 文献传递
- 阻断STAT3磷酸化对人脑胶质瘤体外增殖抑制的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究磷酸化STAT3抑制剂Cucurbitacin I阻断STAT3信号转导通路对人脑胶质瘤细胞系A172增殖和凋亡的影响并探讨机制。方法使用Cucurbitacin I处理人脑胶质瘤细胞系A172，CCK-8方法检测细胞增殖状态，流式细胞仪检测细胞凋亡，Western blot检测STAT3磷酸化水平，RT-PCR检测STAT3下游基因C-myc、Survivin和Mcl-1的mRNA水平的改变。结果Cucurbitacin I作用于A172后，细胞增殖速度明显下降（P〈0．05）；细胞凋亡比率显著升高；Westernblot结果显示A172细胞中磷酸化STAT3（p705-STAT3）蛋白水平明显降低；C-myc、Survivin和Mcl-1在mRNA水平明显下降（P〈0．05）。结论阻断STAT3信号转导通路可抑制脑胶质瘤细胞增殖，促进其凋亡；靶向STAT3信号转导通路的治疗策略可以作为胶质瘤治疗的一种新方法。
- 苏雨行李刚张建顾金海张须龙张彩
- 关键词：神经胶质瘤信号转导及转录活化因子3细胞增殖细胞凋亡
- STAT3基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定
- 2014年
- 目的构建并鉴定靶向人STAT3基因的shRNA慢病毒载体。方法针对人STAT3基因设计有效靶序列,合成相应的shRNA DNA寡核苷酸链;退火形成双链DNA后,与经过Age I和EcoR I内切酶双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接,产生shRNA慢病毒载体。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。以293T细胞包装生成完整病毒颗粒并测定其滴度。结果 PCR鉴定与DNA测序证实合成的含STAT3 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确,浓缩病毒悬液的滴度为3×108TU·mL-1。结论成功构建了靶向人STAT3基因的shRNA慢病毒载体。
- 任平张贺林牛建国刘雅琦顾金海
- 关键词：STAT3SHRNA慢病毒
- 一种VEGF-CXCL8-Akt的Crosstalk机制的研究方法及其应用
- 本发明公开了一种VEGF‑CXCL8‑Akt的Crosstalk机制的研究方法及其应用，首先用ELISA检测U87MG、U251及其分泌因子VEGF对HBMEC分泌CXCL8的影响；其次在共培养体系中分别加入CXCL8‑...
- 顾金海杨景煜孙涛牛建国王峰文玉军王鹏强媛媛和祯泉杨勇
- 文献传递
- 一种靶向沉默STAT3对人脑胶质瘤U251细胞缺氧诱导影响的研究方法及其应用
- 本发明公开了一种靶向沉默STAT3对人脑胶质瘤U251细胞缺氧诱导影响的研究方法及其应用，构建靶向STAT3基因的shRNA转染U251细胞，显微镜观察感染效率，实时荧光定量PCR及Western blotting检测S...
- 顾金海顾珈榕孙涛牛建国王峰文玉军王鹏强媛媛和祯泉杨勇
- 文献传递
- 一种组织培养体系及其在动物脑组织培养中的应用
- 本发明公开了一种组织培养体系，本发明中的组织培养体系主要用于动物脑组织的培养，包括以下体积百分比的组分：BME基础培养基23～26％，MEM基础培养基0.8～1.2％，Neurobasal基础培养基44～46％，马血清2...
- 王鹏马康陈章平黄卓群万定牛建国任双来顾金海张燕任晓璠王峰孙涛
- 文献传递
- 鞘内注射布比卡因对大鼠脊髓中γ-氨基丁酸A受体alpha1亚基的影响
- 2015年
- 目的观察鞘内注射布比卡因对大鼠脊髓腰膨大γ-氨基丁酸A受体alpha1(GABAARα1)亚基表达的影响,探讨椎管内麻醉产生镇静作用的机制。方法雄性SD大鼠32只,随机分为4组:空白对照组(C组),盐水对照组(NC组),0.5%布比卡因10min组(B10组),0.5%布比卡因30min组(B30组),每组8只。建立大鼠蛛网膜下腔置管模型,NC组鞘内注射生理盐水20μL,B10组与B30组鞘内注射0.5%布比卡因20μL,NC组及B10组于鞘内注射后10min,B30组于鞘内注射后30min断头取脊髓腰膨大,进行免疫荧光染色,观察GABAARα1亚基在脊髓Ⅱ板层平均光密度的变化。用Western-blot分别检测脊髓腰膨大组织总蛋白及细胞浆蛋白中GABAARα1亚基表达的变化。结果免疫荧光结果显示与对照组相比,B10组、B30组对脊髓Ⅱ板层GABAARα1平均光密度无显著影响(P>0.05);Western-blot检测结果显示,与对照组相比,B10组、B30组总蛋白中GABAARα1亚基的相对表达量无显著差异(P>0.05);但在细胞浆蛋白中GABAARα1亚基的相对表达量,B10组为(0.035±0.006),B30组为(0.417±0.028),与空白对照组(1.050±0.458)及盐水对照组(1.046±0.446)相比均显著下降(P<0.01),且B10组较B30组下降更为明显(P<0.01)。结论大鼠鞘内注射临床相关浓度布比卡因30min内可使细胞浆中GABAARα1亚基表达下降,提示GABAARα1亚基蛋白由细胞浆向细胞膜快速转运,增加膜表达数量,从而在椎管麻醉过程中产生镇静作用。
- 陈桂英马玲梁欢顾金海牛建国马汉祥
- 关键词：脊髓Γ-氨基丁酸A受体布比卡因
- 神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间STAT3信号的交互作用被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨神经胶质瘤细胞(A172/U251)与人血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)之间STAT3信号通路的交互作用。方法:建立A172、U251细胞与HBMEC的Transwell共培养体系,ELISA检测A172、U251细胞及其分泌因子VEGF对HBMEC分泌IL-6的影响,Western blotting检测HBMEC与A172/U251细胞共培养30 min时HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态p-STAT3的影响,CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞增殖和侵袭的影响。结果:VEGF(50 ng/ml)组和共培养组(HBMEC分别和A172,U251细胞共培养)HBMEC的IL-6的表达量明显高于对照组(P<0.01)。共培养30 min时,A172/U251细胞的IL-6(50ng/ml)组、共培养组及(共培养+AZD1480)组的STAT3/p-STAT3蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01),(共培养+AZD1480)组的胶质瘤细胞STAT3/p-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P<0.01)。IL-6(50 ng/ml)组,共培养组及(共培养+AZD1480)组的A172/U251细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P<0.01),(共培养+AZD1480)组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P<0.01)。结论:神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间存在信号交互作用,且与JAK2/STAT3信号通路密切相关。
- 刘雅琦顾金海孟锐安芳玲
- 关键词：神经胶质瘤细胞人脑微血管内皮细胞增殖
- 胶质瘤细胞与血管内皮细胞的信号Crosstalk对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响被引量：1
- 2021年
- 目的探讨胶质瘤细胞与血管内皮细胞之间的信号Crosstalk及其对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法将人脑微血管内皮细胞(HBMEC)分4组培养:对照组为HBMEC常规培养,血管内皮生长因子(VEGF)组为HBMEC在含VEGF_(165)(50 ng/mL)的内皮细胞培养基(ECM)中培养,U87MG共培养组为HBMEC与胶质瘤细胞U87MG共培养,U251共培养组为HBMEC与胶质瘤细胞U251共培养,然后采用ELISA检测胶质瘤细胞及组织因子VEGF对血管内皮细胞分泌CXCL8的影响。将人脑胶质瘤细胞U87MG或U251分4组培养:对照组为U87MG或U251常规培养,U87MG/U251+HBMEC组为U87MG或U251与HBMEC共培养,U87MG/U251+HBMEC+rhCXCL8组为U87MG或U251与HBMEC在含Akt通路的激动剂rhCXCL8(50 ng/mL)的DMEM中共培养,U87MG/U251+HBMEC+LY294002组为U87MG或U251与HBMEC在含Akt通路的抑制剂LY294002(1μmol/L)的DMEM中共培养,分别采用Western blotting、CCK-8、Transwell侵袭实验检测血管内皮细胞及其分泌CXCL8对胶质瘤细胞的增殖、侵袭以及Akt蛋白表达的影响。结果与对照组比较,VEGF组、U87MG共培养组、U251共培养组中HBMEC培养体系的CXCL8分泌量升高(P<0.05),胶质瘤细胞及其分泌VEGF可促进血管内皮细胞分泌CXCL8。与对照组比较,U87MG/U251+HBMEC组细胞P-Akt蛋白表达增高(P<0.05),增殖及侵袭能力增高(P<0.05);给予CXCL8激活使P-Akt蛋白表达、增殖及侵袭进一步升高(P<0.01);给予LY294002抑制则P-Akt的表达降低(P<0.01),血管内皮细胞可通过分泌CXCL8激活胶质瘤细胞Akt信号通路,并促进其增殖和侵袭。结论胶质瘤细胞与血管内皮细胞之间存在VEGF-CXCL8-Akt信号Crosstalk机制,在胶质瘤增殖和侵袭中发挥重要作用。
- 顾金海路宁顾珈榕文玉军强媛媛和祯泉杨勇王峰孙涛牛建国
- 关键词：胶质瘤血管内皮细胞CROSSTALKCXCL8AKT
