高硕
- 作品数：13 被引量：17H指数：3
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- LacZ转基因小鼠间充质干细胞的分离培养和生物学特性研究被引量：2
- 2011年
- 目的分离培养LacZ转基因小鼠骨髓间充质干细胞(LacZ-MSC),研究其生物学特性。方法用全骨髓贴壁法分离LacZ-MSC,体外扩增,并观察细胞生长特性,流式细胞仪检测细胞周期,成骨成脂诱导试验分析LacZ-MSC转分化特性,X-gal染色法检测其LacZ基因的表达。结果 LacZ-MSC培养4 d后有散在呈针尖状的贴壁细胞,5～8 d后形成集落或融合呈纤维状;体外扩增每只小鼠原代可获得(1～3)×105个细胞,10代可获得(1～3)×1010个细胞总数,10代后的细胞增殖能力下降;细胞周期分析显示,G0/G1期:占78.44%,G2/M期:占5.20%,S期:占16.36%;成骨成脂诱导试验表明,LacZ-MSC细胞具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的潜能;X-gal染色结果表明,LacZ-MSC细胞携带LacZ基因。结论从LacZ转基因小鼠骨髓中成功地分离了携带有LacZ基因的MSC,在体外具有较好的增殖更新能力,3～10代的LacZ-MSC作为组织工程细胞具有广阔的应用前景。
- 毛飞高硕钱晖朱伟严永敏孙靖许文荣
- 关键词：间充质干细胞骨髓LACZ基因
- 人脐带间质干细胞来源exosomes分离鉴定及其对细胞生长的影响
- 沈俐纪润璧周颖吴晓丹高硕史云燕钱晖来伟许文荣
- 人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建重组人Nanog基因腺病毒载体(Ad-Nanog),转染人脐带间充质干细胞(hucMSCs),用于后续研究。方法设计含有KpnⅠ及XhoⅠ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog基因,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒。经PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs。结果重组腺病毒质粒经PCR和双酶切鉴定正确,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下观察在感染的hucMSCs中绿色荧光蛋白高效表达。结论成功构建了Nanog腺病毒表达载体,能高效转染hucMSCs,可用于后续转基因的研究。
- 孙靖徐哲钱茜严家来陈圆张徐高硕钱晖许文荣
- 关键词：NANOG脐带间充质干细胞腺病毒载体
- 外源性sall4基因在胃癌HGC27细胞株中的表达及鉴定
- 2013年
- 目的:建立sall4稳定转染的HGC27细胞株,为sall4基因在胃癌发生发展中的作用研究奠定基础。方法:采用脂质体介导法将pCMV6-entry-sall4及pCMV6-entry质粒转染至HGC27细胞,48 h后加入终质量浓度600mg/L的G418抗生素进行药物加压筛选,获得阳性单克隆细胞株,通过RT-PCR和蛋白质印迹检测细胞中sall4的表达情况。结果:成功构建了稳定过表达sall4的HGC27细胞株,稳定转染细胞株中sall4的mRNA和蛋白水平明显高于未转染组及转染空载体组。结论:本实验成功筛选出sall4基因过表达的稳定转染胃癌细胞系。
- 张玲高硕张斌王梅许潇钱晖许文荣
- 关键词：胃癌SALL4过表达
- 胃癌细胞来源的exosomes对人脐带来源间质干细胞的作用研究
- 顾建美高硕周颖钱晖朱伟严永敏毛飞许文荣
- 骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达被引量：6
- 2011年
- 背景:间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚。目的:观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。方法:DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。结果与结论:与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P<0.01或P<0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P>0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性。
- 毛飞钱晖朱伟严永敏高硕许文荣
- 关键词：类风湿性关节炎骨髓间充质干细胞小鼠
- 类风湿性关节炎模型鼠TLR9表达水平的变化与意义
- 本研究旨在以鸡Ⅱ型胶原诱导的小鼠CIA模型为研究对象,观察TLR9在CIA模型鼠脾脏单个核细胞的表达水平,及其与其它相关因子的关系,探讨TLR9在CIA发生发展中的作用。研究采用12只DBA/1J小鼠,随机分成关节炎模型...
- 毛飞许文荣钱晖朱伟严永敏高硕许化溪
- 文献传递
- 人脐带间质干细胞来源的外切体对大鼠肾小管上皮细胞缺氧损伤的干预作用被引量：1
- 2012年
- 目的:观察体外缺氧损伤的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡情况以及分离纯化人脐带间质干细胞来源的外切体(hucMSCs-exosomes)对其干预作用。方法:将体外培养的NRK-52E细胞随机分为对照组、缺氧损伤模型组和hucMSCs-exosomes(0.5,1.0 mg/ml)预处理组。随后进行细胞计数,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2,bax)的表达变化,流式细胞仪检测细胞周期以及凋亡率的变化。结果:与对照组相比,模型组细胞凋亡相关指标均明显升高,细胞计数下降(P<0.01),Bcl-2/bax表达下调(P<0.01),细胞周期S期阻滞以及凋亡细胞比例明显增多。而hucMSCs-exosomes预处理组可明显改善缺氧损伤时的细胞活力,上调Bcl-2/bax的表达,改善细胞周期和凋亡细胞的比例(P均<0.05)。结论:NRK-52E在缺氧损伤时有明显的细胞凋亡,而hucMSCs-exosomes预处理可能通过抗凋亡途径减轻缺氧时细胞的损伤。本实验可为进一步研究hucMSCs-exosomes在组织损伤修复中的生物学功能和相关机制提供实验基础。
- 沈俐高硕钱晖史云燕朱伟顾建美许文荣
- 关键词：人脐带间质干细胞缺氧细胞凋亡大鼠肾小管上皮细胞
- 人脐带间质干细胞来源的外切体对大鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤的作用被引量：4
- 2012年
- 目的:研究人脐带间质干细胞来源的外切体(hucMSC-exosome)对大鼠缺血/再灌注(I/R)损伤心肌细胞的修复作用。方法:在体内,建立大鼠I/R模型:经冠状动脉左前降支(LAD)结扎缺血30 min后取消结扎恢复灌注,与此同时,尾静脉注射hucMSC-exosome。在体外,建立大鼠H9C2(2-1)心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型:细胞于无血清低糖培养基中缺氧(5%CO2/93%N2)24 h后,用含hucMSC-exosome的高糖10%FBS培养液复氧24 h。采用MTT法、TUNEL法、心肌酶谱以及线粒体膜电位等方法检测大鼠心肌细胞的增殖和凋亡状况。结果:在体内,心肌细胞经I/R损伤后,hucMSC-exosome与hucMSC处理组较PBS处理组血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)值均下降;TUNEL结果显示,前两组较PBS处理组心肌细胞凋亡明显减少;在体外,心肌细胞经H/R损伤后,MTT实验表明细胞增殖显著减弱,hucMSC-exosome作用后,TUNEL及线粒体膜电位(ΔΨm)结果分别显示受损心肌细胞凋亡以及膜电位下降明显减少。结论:hucMSC-exosome能有效抵抗心肌细胞因缺血/再灌注损伤而引起的细胞凋亡。
- 史云燕沈俐高硕周颖纪润璧李伟钱晖朱伟许文荣
- 关键词：人脐带间质干细胞
- 炎症环境下巨噬细胞对小鼠骨髓间质干细胞迁移能力的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨脂多糖(LPS)存在的炎症环境下巨噬细胞株RAW264.7对小鼠骨髓间质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的基因表达及迁移能力的影响。方法:采用全骨髓贴壁法分离小鼠骨髓MSCs,与RAW26 4.7细胞进行Transwell迁移及共培养实验,分为培养液对照组,RAW264.7作用组,LPS作用组及RAW264.7与LPS共作用组。Transwell迁移实验比较各组MSCs的迁移数量,同时qRT-PCR检测各组MSCs表达转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA水平。结果:LPS刺激巨噬细胞活化,使其高表达IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)及MCP-1。RAW264.7作用组MSCs迁移数量多于对照组(P<0.01)。与LPS作用组相比,LPS活化的RAW264.7显著增加MSCs的迁移数量(P<0.01)。qRT-PCR结果显示活化的RAW264.7增加了MSCs的TGF-β1、IL-6和MCP-1 mRNA表达(P<0.05)。结论:炎性条件下巨噬细胞能增强MSCs的迁移能力并改变其细胞因子的表达水平。
- 高硕蔡梦洁毛飞杨婷婷张洁张玲赵露露坎吉克孜.阿不来提钱晖许文荣
- 关键词：骨髓间质干细胞巨噬细胞细胞迁移
