黄云雁
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：天津市科技支撑计划天津市应用基础与前沿技术研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 赖氨酸-尸胺反向转运蛋白cadB基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化被引量：1
- 2012年
- 旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,因而不能够直接合成尸胺。从E.coliK12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因,与绿色荧光蛋白基因gfp融合构建成融合表达载体pXBG,并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达,结果表明表达的CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。将基因cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的pXMJ19-ldc上,构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白的重组质粒pXLB,并转化到谷氨酸棒杆菌中。
- 黄云雁黎明刘萌孙昕周丽颖路福平
- 关键词：谷氨酸棒杆菌共表达
- 双顺反子翻译偶联表达载体的构建及蚓激酶基因F238在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：3
- 2011年
- 为了实现外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,利用硫氧还蛋白作为分子伴侣构建双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将大肠杆菌硫氧还蛋白基因插入到pET22b载体NdeI和EcoR I位点之间,同时在硫氧还蛋白编码基因的终止密码子前加入核糖体结合位点,构建成双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将蚓激酶基因F238克隆到该载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE结果表明,所表达的蚓激酶F238是可溶性蛋白。利用血纤维蛋白法对表达产物进行活性测定,重组蚓激酶F238不仅具有纤溶酶活性,而且具有激活纤溶酶原的激酶活性。该双顺反子翻译偶联表达载体的构建,为在大肠杆菌中可溶性表达外源蛋白提供了新方法。
- 黎明宋馨宇王晓娟刘建军张建中刘萌黄云雁
- 关键词：蚓激酶分子伴侣双顺反子可溶性表达
- cadB在谷氨酸棒杆菌中的表达
- 以E.coli K12基因组为模板,通过PCR扩增,得到大小约为1.3kb的赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因cadB.以大肠杆菌/谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pXMJ19为载体,构建成重组质粒pXMJ19-cadB.然后将绿色荧光蛋...
- 黄云雁黎明刘萌孙昕周丽颖路福平
- 关键词：谷氨酸棒杆菌绿色荧光蛋白基因表达
- 文献传递
- 根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系的建立及优化被引量：13
- 2012年
- 基于根癌农杆菌介导的遗传转化方法的独特优点,研究黑曲霉转化过程中各主要影响因素,建立高效的黑曲霉遗传转化方法。构建双元载体pBI-hph,通过电转导入农杆菌LBA4404中,以黑曲霉TCCC41056为受体菌株,利用潮霉素B基因作为筛选标记,对影响转化效率的孢子悬液的新鲜程度及浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间、共培养温度这五个条件进行分析,建立根癌农杆菌介导的黑曲霉遗传转化体系。实验结果表明,上述条件对黑曲霉的转化效率有较大的影响,通过优化,黑曲霉转化效率可达83个转化子/107分生孢子;整合到黑曲霉基因组的外源基因可以稳定遗传,在转接10代后遗传性能仍保持稳定,并在众多转化子中筛选得到了糖化酶活力提高18%的黑曲霉突变株。根癌农杆菌介导的黑曲霉转化体系的建立,为进一步研究黑曲霉的功能基因以及开发黑曲霉表达系统提供了有力的手段。
- 黎明刘萌黄云雁周丽颖孙昕路福平
- 关键词：根癌农杆菌黑曲霉糖化酶
- 一种产尸胺工程菌
- 本发明涉及一种产尸胺工程菌及其构建方法及利用该菌生产尸胺的方法，利用基因工程技术，将赖氨酸脱羧酶基因(L-lysine decarboxylase gene，cadA/LDC)和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因(cadave...
- 黎明路福平王春霞黄云雁刘萌
- 文献传递
