黄燕
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 供职机构：中国医科大学航空总医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究被引量：6
- 2006年
- 目的构建肌酸激酶MM同工酶原核表达系统,纯化重组酶蛋白并对其稳定性进行研究,为其作为参考品或校准品应用于临床奠定基础。方法提取胎儿心肌组织总RNA,反转录扩增人肌酸激酶M亚基基因,构建pET-15b-CK、E.coliBL21(DE3)pLysS原核表达系统,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。利用重组蛋白的组氨酸标签(H is-tag)进行金属螯合亲和层析纯化,观察重组酶在不同保存条件下的稳定性。结果重组质粒经酶切及测序鉴定与预期相符,诱导表达后细菌裂解液上清酶活性可达280 000 U/L,纯化后SDS-PAGE在分子量45 000处显示单一蛋白条带,在-20℃加入70g/L BSA、1 mmol/L DTT、2 mmol/L EDTA的PBS(pH 7.4)保存体系中,重组酶活性在30 d观察期内基本不变。结论成功表达并纯化了人肌酸激酶MM同工酶,重组酶稳定性良好,初步具备了作为基因工程人源酶校准品的基本特点。
- 黄燕杨文双徐国宾夏铁安
- 关键词：校准品金属螯合亲和层析稳定性
- 重组人肌酸激酶MM同工酶在不同保存基质中的稳定性和互通性观察
- 2007年
- 目的观察重组人肌酸激酶MM同工酶(CK-MM)在不同基质中的稳定性和互通性,筛选出适合的基质制备校准品用于CK测定的标准化。方法将重组酶分别置于自制类人血清基质、抗冻基质、仿有证参考物配方基质及人血清基质中,用常规测定方法观察重组酶的稳定性;分别采用参考方法、常规方法(罗氏试剂和中生试剂)测定不同基质中的重组酶活性和不同浓度的人血浆总CK活性,观察重组酶在不同方法间的互通性。结果重组酶在自制类人血清基质和仿有证参考物配方基质中-20℃冻存可稳定25d和23d,在抗冻基质中至少可稳定240d。自制类人血清基质和仿有证参考物配方基质中重组酶在参考方法与常规方法间有互通性,人血清基质和抗冻基质中的低值重组酶样品在两方法间具有互通性。结论自制基质和有证参考物配方基质中的重组酶具有较好的稳定性和互通性,初步具备了校准品的基本特点。本研究为进一步研制CK测定的参考品,包括校准品和定值控制品提供了思路。
- 黄燕徐国宾
- 关键词：稳定性互通性校准品
- CK及其同工酶CK-MB测定的方法学进展和临床应用被引量：11
- 2008年
- 肌酸激酶（creatine kinase，CK）是人体能量代谢中的重要酶类，可以调节组织细胞的功能，保证细胞生理活动的需要。从首次在进行性肌营养不良症患者的血清中发现CK的存在开始，CK及其同工酶的结构、在疾病的诊治和预后评估中的应用、测定标准化等方面的研究从未间断。CK是骨骼肌损伤的敏感项目，CK及其同工酶CK—MB已广泛应用于急性心肌梗死（AMI）的诊断。笔者对CK及其同工酶CK—MB检测的方法学进展、临床意义和标准化等方面的内容做概括性介绍。
- 徐国宾黄燕王蕴峰
- 关键词：CK-MB测定同工酶进行性肌营养不良症急性心肌梗死
- 重组人肌酸激酶MM同工酶的酶动力学研究被引量：1
- 2007年
- 目的:对纯化后重组肌酸激酶MM同工酶(CK-MM)的米氏常数(Km)进行研究,为其作为参考品或校准品应用于临床奠定基础。方法:将重组酶置于自制类人血清基质中,按IFCC参考方法配制试剂,采用HITACHI全自动生化分析仪测定重组酶与天然酶[底物分别是磷酸肌酸(PCr)和腺苷二磷酸(ADP)]的Km常数。结果:重组酶KmPCr值高于天然酶1.4倍,Km ADP重组酶与天然酶近似。结论:重组CK-MM的酶动力学常数基本符合参考方法的测定要求,初步具备作为基因工程人源酶校准品的基本特点。
- 黄燕徐国宾
- 关键词：校准品
