刘茹
- 作品数：5 被引量：48H指数：3
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
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- VEGF真核表达载体构建及其转染骨髓间充质干细胞的表达
- 2011年
- 目的构建大鼠血管内皮细胞生长因子164(vascular endothelial growth factor,VEGF164)真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF164,观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)转染pcDNA3.1(-)/VEGF164基因后,外源性基因VEGF在蛋白水平的表达,为其在治疗肺组织损伤中的应用奠定基础。方法应用DNA重组技术构建VEGF164真核表达载体。采用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1(-)/VEGF164转染大鼠MSCs,并设立空质粒对照组(转染pcDNA3.1空载体)、脂质体对照组,用细胞免疫组化和Western blot检测大鼠MSCs中VEGF164蛋白的表达情况。结果重组质粒pcDNA3.1(-)/VEGF164测序结果与基因库(GENEBANK)中序列一致。细胞免疫组化检测显示pcDNA3.1(-)/VEGF164转染组MSCs中可见散在黄色颗粒,而空质粒对照组和脂质体对照组均未见明显黄色颗粒。Western blot检测pcDNA3.1(-)/VEGF164转染MSCs 72 h后,细胞裂解产物中VEGF含量明显高于空质粒对照组和脂质体对照组。结论成功构建了大鼠VEGF164真核表达载体,实现VEGF164基因在大鼠MSCs的成功转染,并有外源性基因及蛋白的表达,具有促进肺组织损伤修复的应用前景。
- 刘茹陈春芳杜江李秋平王斌
- 关键词：血管内皮细胞生长因子真核表达载体转染
- 肺表面活性物质相关蛋白C原核表达载体的构建、表达及纯化被引量：8
- 2012年
- 背景:研究表明肺表面活性物质蛋白基因缺陷导致肺表面活性物质蛋白的结构发生变化。早期检测肺表面活性物质的含量对于预测肺部疾病的发生意义重大。目的:克隆人肺表面活性物质相关蛋白C(surfactant associated protein C,SP-C)基因,构建原核表达载体PET-28a/SP-C,并纯化SP-C蛋白。方法:提取正常人肺组织总RNA,RT-PCR技术获得SP-C cDNA序列,纯化后的SP-C基因插入至中间载体PMD-18T,得到重组质粒PMD-18T-SP-C,重组质粒经过Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到具有黏性末端的SP-C cDNA,将质粒PET-28a同样经过双酶切后纯化回收得到与SP-C cDNA具有相同黏性末端的质粒片段,将具有黏性末端的SP-C cDNA与PET-28a定向连接后得到重组质粒PET-28a/SP-C。然后将鉴定正确的PET-28a/SP-C重组质粒转入BL21中诱导表达。结果与结论:酶切鉴定及核苷酸序列测序证实扩增的SP-C cDNA及其重组质粒经过Bam HⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后,在5000～7500bp和250～1000bp处可检测到2条条带。核苷酸序列测序结果证实,质粒中插入基因长597bp,为一开放阅读框架,与GeneBank中公布的人SP-C cDNA序列相符。Western-blot检测结果显示,纯化后的SP-C蛋白在相对分子质量约27000处出现1条新生条带,与预期的大小一致。结果证实,实验成功克隆人SP-C基因并插入至质粒PET-28a中,构建了PET-28a/SP-C重组质粒,将其体外转化至BL21后可以表达SP-C蛋白。
- 王静杜江周细中刘茹沈蔚王斌
- 关键词：原核表达载体克隆
- 急性淋巴细胞白血病患儿亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与大剂量甲氨蝶呤不良反应的相关性被引量：28
- 2012年
- 目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因677位点多态性与大剂量甲氨蝶呤(HDMTX)体内排泄及不良反应的相关性。方法 2008年3月-2010年2月在本院儿科中心和血液内科住院的完全缓解并接受HDMTX治疗的40例ALL患儿,在接受HDMTX治疗前应用PCR-限制性酶切片段长度多态性(RFLP)技术检测MTHFR基因C677T多态性,在HDMTX静脉输注开始后24 h、48 h应用荧光偏振免疫法(FPIA)测定其血浆MTX水平,密切观察ALL患儿HDMTX化疗后的不良反应,对化疗不良反应进行分级。对MTHFR677的基因多态性与MTX不良反应及HDMTX 48 h的MTX水平(MTX-48 h)的相关性进行分析。结果在有HDMTX相关不良反应的ALL患儿中,肝损害和骨髓抑制发生率最高。MTHFR C677T有肝脏损害的基因型分布频率由低到高为CC型40.0%,TT型60.0%,CT型80.0%,CT基因型者肝脏损害发生的风险是CC基因型者的6倍(OR=6.00,95%CI:1.05～34.32,P=0.044);677CT+TT基因型者肝脏损害发生的风险是CC基因型者的4.13倍(OR=4.13,95%CI:1.02～16.67,P=0.047)。MTHFR C677T基因型与骨髓抑制无明显相关性。携有MTHFR突变基因型(CT+TT)患者的48 hMTX血药质量浓度明显高于携带MTHFR野生型基因CC者(P=0.006)。结论 MTHFR 677位基因型可作为ALL患儿HDMTX化疗不良反应和药物体内排泄的有效预测指标。
- 杨丽华刘茹曾其毅
- 关键词：急性淋巴细胞白血病亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性
- 血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞对支气管肺发育不良大鼠肺发育的影响被引量：12
- 2013年
- 目的研究血管内皮生长因子（VEGF）基因转染骨髓问充质干细胞（MSCs）移植对支气管肺发育不良大鼠肺泡结构和肺部微血管的作用。方法采用密度梯度离心法分离sD大鼠骨髓MSCs，贴壁培养传代并鉴定，应用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3．1（-）／VEGF164，然后转染至MSCs。将新生SD大鼠置于950mI／L氧箱中14d后，随机分为转染组（MSCs/VEGF组）、对照组（MSCs组）、空白组（无血清培养基组），每组10只，分别于气管内注入1×10^5个转染VEGF的MSCs、单纯MSCs和等量无血清培养基。分别于移植后1、4周取大鼠肺组织行HE染色观察肺组织结构和放射状肺泡计数（RAC），免疫组织化学染色法评价VEGF蛋白表达和新生血管密度情况，Western blot方法检测肺组织中VEGF164蛋白表达情况。结果免疫组织化学结果显示移植后1、4周转染组大鼠肺组织RAC、VEGF蛋白表达、再生血管密度较对照组和空白组均明显增加（P均〈0．05）。Westernblot检测结果显示移植后1、4周转染组VEGFl64蛋白表达较对照组和空白组均明显增加（P均〈0．05）。结论VEGF基因转染MSCs移植能显著促进肺泡发育以及微血管再生，VEGF与新生大鼠肺发育有密切关系。
- 王斌刘茹陈春芳钟春霞杜江李秋平
- 关键词：血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞基因治疗支气管肺发育不良
- 血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞对支气管肺发育不良大鼠肺发育的影响
- 目的研究VEGF基因转染骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对支气管肺发育不良(BPD)大鼠的肺泡结构和肺部微血管的作用方法采用密度梯度离心法分离SD大鼠的MSCs,贴壁培养传代并鉴定,应用DNA重组技术构建真核表达载体pc...
- 刘茹陈春芳钟春霞李秋平杜江王斌
