刘顺谊
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶蛋白在改良M9培养基中的诱导表达被引量：2
- 2007年
- 以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶(L-谷氨酸:氨连接酶,Glutamine Synthetase,GS EC6.3.1.2)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3)(pET3C/谷氨酰胺合成酶)作为研究对象,借助SDS PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物蛋白的各种基本参数进行了初步的研究.研究了最佳本底培养基、最佳碳源及其最佳添加比例、碳源与诱导物的最适组合,并探索了适用于改良型培养基的诱导参数.实验结果表明,对于重组目的产物蛋白,改良型M9培养基完全可以替代LB培养基;以甘油为碳源,可以避免葡萄糖对T7lac启动子的屏蔽作用.以乳糖为诱导物,目的蛋白的表达量、可溶性及酶活与以IPTG为诱导物基本接近.研究结果为酶法合成谷氨酰胺的工业化生产提供了一定的参考.
- 刘顺谊殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶原核表达
- 乳糖诱导大肠杆菌中重组谷氨酰胺合成酶的表达被引量：6
- 2006年
- 以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶(L-谷氨酸:氨连接酶,G lutam ine Synthetase,GS EC 6.3.1.2)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3)(pET3C/谷氨酰胺合成酶)作为研究对象,借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7 lac启动子控制的重组目的产物蛋白的表达规律进行了优化研究,分别比较了最佳诱导起始生长量、所需乳糖的浓度、诱导持续时间、补加乳糖和氨苄青霉素及不同培养基等参数对重组产物表达的影响.实验结果表明,对于T7 lac启动子控制的重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到很好的诱导表达效果,诱导产物的表达量、可溶性及酶活与IPTG诱导产物基本接近.本研究结果为乳糖作为诱导剂应用于重组大肠杆菌谷氨酰胺合成酶工业化生产提供了一定的参考依据.
- 刘俊红刘顺谊殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶原核表达乳糖IPTG
- 重组人TRAIL胞外片段的原核表达系统选择及蛋白复性研究
- 2006年
- 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段,将之克隆至原核表达载体pET-30a、pQE-30和pJLA503中,上述重组载体经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE鉴定显示pET-30a系统表达效率最高,目的蛋白占菌体总蛋白含量的40%左右;采用透析法或梯度稀释法对TRAIL胞外区片段包涵体进行复性,非还原SDS-PAGE的结果显示梯度稀释法明显好于透析法;纯化后的TRAIL胞外区片段蛋白具有明显的生物学活性,效果与标准品相似;通过添加不同的折叠促进剂对复性效率影响的研究,确立了TRAIL胞外区片段适宜的复性方法,复性效率达75%～80%.
- 吴冬梅金丽娜刘顺谊司马健邰一琳吴一凡乔波殷志敏
- 关键词：TRAIL蛋白表达复性细胞凋亡
- （一）hsTRAIL蛋白的表达与复性研究;（二）重组枯草芽胞杆菌谷氨酰胺合成酶的诱导表达与培养基优化
- 为了获得有活性的hsTRAIL蛋白，本实验对hsTRAIL包含体进行了复性的研究。通过对hsTRAIL包涵体洗涤条件的研究，使蛋白纯度提高到90％以上，并确定了其简单适宜的复性方法，纯度达98％。采用稀释法可使得近65％...
- 刘顺谊
- 关键词：TRAIL蛋白蛋白复性谷氨酰胺合成酶
- 文献传递
