史震
- 作品数：21 被引量：28H指数：3
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- APOBEC3G真核表达载体构建及抗HBV复制的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的构建人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)真核表达载体,并探讨其抗乙型肝炎病毒(HBV)复制的作用。方法采用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因编码区片段,构建pcDNA3.1-A3G真核表达载体,利用脂质体转染法将pcDNA3.1-A3G转染HepG2.2.15细胞,分别于转染后第24、48、72 h收集细胞培养上清液和细胞总蛋白,Western blot检测HBx蛋白表达情况,ELISA法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg表达情况。结果测序结果显示pcDNA3.1-A3G真核表达载体中APOBEC3G编码区序列存在1处碱基同义突变;HepG2.2.15细胞经APOBEC3G蛋白干扰后,HBx、HBsAg和HBeAg表达量逐渐降低,于72h表达量显著降低。结论成功构建了APOBEC3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G;APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,为深入研究APOBEC3G作为抗HBV药物提供了实验基础。
- 汤仁仙甘宜敏孔凡运尤红娟史震胡丽娜郑葵阳
- 关键词：真核表达载体HEPG2.2.15细胞
- 溶瘤腺病毒介导的IL-18在黑素瘤A375细胞中的表达
- 2008年
- 目的构建携带人IL-18基因的溶瘤腺病毒,观察在A375细胞中IL-18基因的表达情况。方法将pZD55-IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞获得重组腺病毒。PCR鉴定条件增殖腺病毒ZD55- IL-18。以ZD55-IL-18感染人黑素瘤A375细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-18基因mRNA的表达;Western blot法检测腺病毒E1A的表达情况;结晶紫染色法检测细胞杀伤作用;MTY法检测细胞存活情况。结果PCR鉴定表明ZD55-IL-18构建成功;RT-PCR和Western blot结果表明,ZD55-IL-18能高效介导IL-18基因在A375细胞中的表达,并在肿瘤细胞内表达E1A;结晶紫染色和MTT结果表明,ZD55-IL-18对A375细胞有明显的杀伤作用。结论构建成功的溶瘤腺病毒ZD55-IL-18,可在A375细胞中高效表达IL-18基因,并能抑制黑素瘤细胞生长。
- 杨春华刘彦群魏志平毛立军裴东生史震郑骏年
- 关键词：溶瘤腺病毒IL-18黑素瘤
- 增殖腺病毒介导IL-24及Ki-67基因RNAi抗人膀胱肿瘤研究
- 目的研究条件增殖腺病毒介导的IL-24及Ki-67基因RNAi对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将不同MOI的ZD55-IL-24+ZD55-Ki67、ZD55-IL-24、ZD55-Ki67、ZD55-EGFP感染人...
- 郑骏年胡薛莉刘晓昀毛立军史震刘俊杰
- 文献传递
- miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达被引量：2
- 2011年
- 目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平，通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA，RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现，SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加，miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3，上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。
- 史震张庆张海清李小翠郑葵阳周峰
- 关键词：系统性红斑狼疮SOCS3外周血单个核细胞FOXP3MRNA
- 应用RNA干扰抑制乙肝病毒X基因促HepG2细胞凋亡的作用被引量：2
- 2009年
- 目的:构建靶向乙肝病毒X基因(HBX)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并应用其体外抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。方法:设计并构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,脂质体转染法将HBX表达载体pcDNA3.1-HBX与pSilencer3.1-shHBX共转染人肝癌HepG2细胞,培养72小时后,分别以RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测HBX的表达量。Annexin V-FITC/PI双染经流式细胞仪检测细胞的凋亡变化。结果:重组质粒pSilencer3.1-shHBX酶切鉴定和测序结果均与设计的一致。该质粒使HBX基因mRNA表达量降低了47.1%,进而使HBx蛋白表达量降低了58.9%,HBx蛋白荧光强度减弱,并使HBX诱导的HepG2细胞凋亡率降低了52.11%。而阴性对照质粒无此作用。结论:成功构建靶向HBXshRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并可应用其抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用。
- 范宝峰刘晓梅甘宜敏史震汤仁仙郑葵阳
- 关键词：HBXRNA干扰凋亡HEPG2
- 人T淋巴细胞活化后羟甲基化的变化
- 2014年
- 目的初步探讨人T淋巴细胞活化后细胞内5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hmC)和5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-mC)的含量变化。方法成年健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)分别经刀豆蛋白(ConA)或CD3抗体和CD28抗体处理72 h后,采用免疫荧光法观察5-hmC和5-mC的变化,Real-time PCR检测TETs的mRNA转录水平。结果免疫荧光结果显示无论是经ConA非特异性刺激还是经CD3抗体和CD28抗体处理的人T淋巴细胞细胞核内,5-hmC水平明显高于5-mC,且后者从核内转位到胞浆;CD3抗体和CD28抗体处理后的TET2 mRNA转录水平显著高于非处理组。结论活化的T淋巴细胞中5-mC转变是由TET2调控的。
- 张庆史震李小翠刘晓梅汤仁仙郑葵阳周峰
- 关键词：T淋巴细胞
- 健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的克隆人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalyticpolypeptide 3G,APOBEC3G)基因cDNA,构建APOBEC3G基因的真核表达载体,并在体外进行表达和鉴定。方法采用RT-PCR技术从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因,将该基因插入pcDNA3.1真核表达载体,构建pcDNA3.1-A3G真核表达质粒,并利用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-A3G转染HepG2和HL7702细胞,经免疫细胞化学、Western blot等方法检测APOBEC3G真核表达情况。结果双酶切鉴定和测序结果表明,APOBEC3G真核表达载体构建成功。免疫细胞化学和Western blot结果均显示,转染pcDNA3.1-A3G的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白均高表达,转染空质粒pcDNA3.1和未转染的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白低表达或不表达。结论成功构建了人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G,为进一步研究APOBEC3G抗HBV作用奠定实验基础。
- 甘宜敏孔凡运史震汤仁仙郑葵阳
- 关键词：APOBEC3G克隆真核表达载体
- β-catenin在IL-24抑制肝癌细胞的血管生成和肿瘤生长中的作用被引量：1
- 2011年
- 目的研究IL-24对肝癌细胞在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的血管生成和肿瘤生长的影响及其机制的初探。方法实验采用病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5的重组慢病毒IL-24和慢病毒空载体Mock分别感染肝癌细胞HepG2,24 h后接种于CAM,4 d后观察CAM上形成的肿瘤背面血管数目,并剥离肿瘤组织称其重量,继而进行Western blot检测肿瘤组织中β-catenin的表达。结果 CAM实验显示,与Mock感染的HepG2细胞相比,慢病毒IL-24感染的HepG2细胞形成的肿瘤背面血管分支数目和肿瘤重量明显下降。Western blot结果发现慢病毒IL-24感染的HepG2细胞形成的肿瘤组织中β-catenin显著低于Mock组。结论 IL-24能够抑制肝癌细胞的肿瘤血管生成和肿瘤生长,这种作用可能是通过下调β-catenin的表达来实现的。
- 周峰王杰张海清史震裴冬生郑骏年
- 关键词：IL-24肝癌细胞血管生成肿瘤生长Β-CATENIN
- 表达白细胞介素-18的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用被引量：1
- 2008年
- 目的观察表达IL-18的溶瘤腺病毒（ZD55-IL18）对裸鼠肾癌移植瘤生长及血管形成的抑制作用。方法荷肾癌裸鼠随机分4组，每组8只。瘤体内注射ZD55-IL18、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达IL-18的增殖缺陷腺病毒Ad-IL18及PBS，每次注射病毒7×10^8PFU／只，连续注射3d。注射后第7天，每组处死3只取肿瘤组织，免疫组织化学检测肿瘤E1A、IL-18、CD34、VEGF表达及凋亡。第50天时处死动物测量肿瘤体积。结果ZD55-IL18、zD55．EGFP、Ad．IL18及生理盐水处理组肿瘤体积（mm^3）分别为：299．7±52．9、536．8±90．3、570．3-4-99．0、766．1±145．8，ZD55-IL18与各组之间差异有统计学意义（P〈0．01）。Ad-IL18处理组肿瘤无E1A蛋白表达，ZD55-IL18处理组有大量E1A蛋白表达，表明病毒复制。ZD55-IL18处理组肿瘤IL-18表达及凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-IL18处理组。ZD55-IL18处理组肿瘤CD34、VEGF表达均显著低于Ad-IL18处理组。结论表达IL-18的溶瘤腺病毒ZD55-IL18比增殖缺陷腺病毒Ad-IL18具有更强的抑制肾癌生长及血管形成作用。
- 陈仁富郑骏年史震李望孙方浩温儒民
- 关键词：溶瘤腺病毒白细胞介素18肾癌
- 抗空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1多克隆抗体的制备与鉴定
- 2011年
- 目的表达空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1,并制备针对该蛋白的多克隆抗体。方法诱导培养工程菌E.coli BL21(DE3)表达空肠弯曲菌PEB1重组蛋白。经镍-琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化,透析并定量后,常规免疫新西兰兔。收集血清,盐析法粗提IgG,应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测抗体效价,并通过Western blot和玻片凝集试验检测抗体的特异性。结果得到高纯度的空肠弯曲菌PEB1重组蛋白。用该蛋白免疫新西兰兔后,获得抗PEB1多克隆抗体。间接ELISA法检测抗体效价为1∶2×104,双向琼脂扩散试验检测抗体效价为1∶8。结论运用纯化的空肠弯曲菌PEB1重组蛋白免疫新西兰兔,获得高效价的多克隆抗体。
- 史震任思坡周爱华周峰汤仁仙孙万邦
- 关键词：空肠弯曲菌多克隆抗体
