吴刘成
- 作品数：27 被引量：38H指数：4
- 供职机构：南通大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- B6-Co与B6小鼠眼睑胚胎发育的形态观察被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)胚胎期眼睑发育形态学差异。方法:将B6-Co小鼠与B6小鼠对照,取胚胎期16.5天(E16.5)的胚胎,切取整个头部固定、脱水,冷冻切片。采用HE染色观察胚胎期眼睑闭合状况;FITC-鬼笔环肽染色眼睑部位的细胞骨架;Hoechst染色眼睑部位细胞核。结果:B6小鼠在E16.5天眼睑完成闭合,而B6-Co小鼠眼睑不能闭合,眼睑细胞骨架异常,无微丝束形成,不利于细胞迁移。结论:B6-Co小鼠由于眼睑边缘部位细胞迁移障碍引起的眼睑发育缺陷,造成出生时眼睑开放。
- 王旭吴刘成刘春郑良凤邵义祥
- 关键词：角膜混浊细胞骨架免疫荧光染色法
- 角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析被引量：4
- 2011年
- 对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。
- 吴刘成刘春蒋荧梅王生存邵义祥
- 关键词：PCR扩增
- 蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞凋亡过程中的作用被引量：1
- 2016年
- 为探究蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基在胚胎成纤维细胞(MEFs)凋亡过程中的作用,用Cβ+/-的杂合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取胚胎期12.5d(E12.5)的胚胎制备MEFs,用PCR、RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时对P3代MEFs利用流式分选技术检测其细胞凋亡和细胞周期的变化,并采用Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果采用胰酶消化方法成功获得了MEFs,DNA、RNA和蛋白水平鉴定显示获得了3对3的野生型和Cβ基因敲除MEFs。流式分选发现Cβ基因敲除MEFs和野生型之间细胞分裂期前期(M1期)细胞分别为53.95%±2.81和46.94%±4.17,细胞分裂期后期(M2期)细胞分别为21.14%±2.53和29.83%±3.25。但Bcl-2的蛋白表达量和mRNA表达量没有显著差异。结果表明,虽然蛋白磷酸酶2A的Cβ亚基的缺失并不会导致小鼠胚胎死亡,但Cβ亚基的缺失会轻微影响胚胎成纤维细胞(MEFs)的细胞周期。
- 王庆华王生存李斌刘春吴刘成王旭彭晓清邵义祥
- 关键词：胚胎成纤维细胞细胞凋亡细胞周期
- 一种SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞的建立方法及应用
- 本发明属于生物医疗技术领域，本发明公开了一种SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞的建立方法，包括以下步骤：通过对SMA模型小鼠进行基因型鉴定，选取基因型为SMA小鼠BMMSC提取分离，用培养基培养，次日进行换液；倒置显微镜观察...
- 吴刘成华益民朱顺星刘春王旭邵义祥
- 文献传递
- 一种肝癌动物模型的制备方法
- 本发明提供一种肝癌动物模型的制备方法，包括以下具体步骤：（1）选取4周龄的ICR小鼠，观察饲养2周；将HepG2细胞在加有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养传代扩增后用注射器注射入ICR小鼠腹腔；（2）待小鼠出现明显腹...
- 王庆华戚龙菊董传明吴勤峰邵义祥朱顺星刘春王旭吴刘成王生存
- 文献传递
- 华东地区清洁级大、小鼠中ECTV、MHV和SV的检测被引量：2
- 2016年
- 为了研究华东地区清洁级实验鼠中鼠痘病毒(ECTV)、小鼠肝炎病毒(MHV)和仙台病毒(SV)感染症的流行情况,从华东地区4个主要实验动物供应基地分别购入ICR和(或)C57BL/6小鼠各30只,SD或Wistar大鼠各15只。采用摘眼球法采集血样和分离血清后,用进口商品化ELISA试剂盒分别检测小鼠的ECTV、MHV和SV的血清抗体。大鼠因为一般不易感染MHV和SV,因此只检测ECTV血清抗体。调查结果显示,在华东地区4个主要实验动物供应基地中,有3个基地的清洁级实验大、小鼠的检测结果均为阴性,但在另1个基地的清洁级ICR小鼠中,MHV和SV的血清抗体阳性率分别为56.7%和100%,C57BL/6小鼠的MHV血清抗体阳性率为100%。研究结果表明,华东地区实验动物供应基地大部分商品化的实验大、小鼠中,上述3种疫病的检测质量合格,但在个别基地中MHV和SV依然存在,且感染情况比较严重,应该积极采取措施加强管理,净化鼠群,同时认真开展鼠病的监测工作,保证实验用鼠的质量,以免对实验用鼠的繁育和使用带来不利影响。
- 宋鸿雁董蓉莲仇保丰景瑾顾炳泉邵义祥刘春朱顺星吴刘成
- 关键词：小鼠流行病学调查
- 斯氏艾美耳球虫热休克蛋白70基因的克隆及表达分析被引量：4
- 2017年
- 为了获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的热休克蛋白70(HSP70)的全基因序列,并诱导表达重组HSP70蛋白,试验根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种HSP70蛋白序列设计引物,通过c DNA末端快速扩增法(RACE)获得E.stiedai HSP70的全基因序列,将其连入原核表达载体p ET-28a(+),转化Competent Rosetta2(DE3)p Lys S,通过IPTG诱导表达重组HSP70蛋白,并进行Western-blot分析。结果表明:HSP70序列全长为2 727 bp,最大ORF为2 010 bp。HSP70在诱导后37℃培养4 h条件下有表达,但全部为不溶性表达;在诱导后20℃过夜培养条件下无表达。说明试验成功获得E.stiedai HSP70的全基因序列以及重组HSP70蛋白。
- 景瑾张帅仇保丰董蓉莲蒋荧梅朱顺星田颖超刘春吴刘成宋鸿雁邵义祥
- 关键词：斯氏艾美耳球虫克隆原核表达重组蛋白
- NOVA1促SMN2外显子7列入的验证方法及其应用
- 本发明提供一种NOVA1促SMN2外显子7列入的验证方法及其应用，验证方法包括如下步骤：（1）RT‑PCR及酶切电泳分析SMN2全长基因在不同组织中的表达；（2）寻找SMN2全长基因在中枢系统中高表达的机制；（3）验证N...
- 吴刘成孙俊杰华益民邵义祥朱顺星
- 文献传递
- 普通级与SPF级新西兰兔肝脏、十二指肠病理、超微结构及肝功能的比较研究
- 2014年
- 为了研究普通级与SPF级新西兰兔肝脏及肠道病理、超微结构和肝功能的变化差异,从而为正确选择、应用实验兔开展相关科学试验提供参考依据,试验分别选择6只普通级与SPF级新西兰白兔,采集粪便经饱和盐水漂浮法检查是否感染兔球虫;采血测定肝功能生化指标;解剖兔取部分肝脏和十二指肠,制作切片后进行H.E.染色,观察病理变化和超微结构。结果表明:在病理及超微结构比较上,普通级兔肝脏、十二指肠均出现明显的变化,主要表现在普通级兔肝脏、十二指肠表面与实质出现大小、数量不一的球虫结节,结节病灶有大量兔球虫卵囊,侵入周围组织、细胞,进而影响肝脏、十二指肠正常的病理结构与超微结构。与SPF级兔相比,普通级兔肝功能相关的5项指标中有3项出现显著差异,2项出现极显著差异。说明普通级兔肝脏正常的机理功能受到影响,提示有条件时应选用微生物控制等级更高的SPF级兔开展相关科学实验。
- 王胜洁吴刘成宋鸿雁刘春邵义祥
- 关键词：新西兰兔肝脏十二指肠超微结构肝功能
- SNP标记对角膜混浊小鼠突变相关基因的精细定位被引量：15
- 2010年
- 为深入研究前期工作中以ENU诱变技术建立的遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)的遗传机制,利用SNP标记对其突变基因进行精细定位,将该品系中具有角膜混浊表型的小鼠(B6-CoP)与DBA/2小鼠(简称D2)配种得到F1代,再回交D2亲本品系得到F2代,提取F2代角膜混浊小鼠鼠尾DNA。在MGI数据库中选取小鼠13号染色体已定位区间附近5个在C57BL/6(简称B6)和D2两个品系之间有差异的SNP,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术及连锁分析方法对B6-Co小鼠突变基因进行精细定位。结果表明:B6-Co小鼠突变基因定位于13号染色体上112 546 283～113 397 654bp之间,因该区间内有5个已知基因,其中Map3k1基因与小鼠眼睛形态生成和眼睑闭合密切相关,提示Map3k1是B6-Co小鼠突变的强力候选基因。
- 蒋荧梅刘春吴刘成邵义祥
- 关键词：SNP突变基因基因定位
