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吴华伟: 作品数：28 被引量：72H指数：6; 供职机构：长江大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金博士科研启动基金江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程文化科学更多>>

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易错PCR定向进化大幅度提高极耐热β-葡聚糖酶的活性被引量：6: 2010年; 采用易错PCR方法对来自于极耐热海栖热袍菌的内切葡聚糖酶Cel1B进行定向进化。携带有Cel12B基因的重组质粒pET-20b-Cel12B在固定Mn2+浓度下,通过使用不同浓度的Mg2+优化易错PCR条件,产物构建成pET-20b-Mu-Cel12B重组子,并建立突变体文库,重组子经改进的刚果红平板法筛选,通过透明圈的大小获得了酶活性大幅度提高的突变体3个,突变基因经诱导后的酶活力分别是在同样条件下诱导获得的亲本酶的2.1倍、3.2倍和3.7倍。; 吴华伟张展李相前李迅; 关键词：酶活

β-环糊精葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及酶学性质被引量：3: 2016年; 获取来自坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacillus campinasensis)的编码β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,β-CGTase)的基因cgt,并将带有His-Tag去除信号肽的cgt基因克隆到表达载体p ET28a(+)后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过热变性和Ni-NTA获得重组β-CGTase纯化酶,再通过SDSPAGE检测,蛋白分子量在74 k Da左右,并初步研究了重组β-CGTase的酶学性质。结果表明:重组β-CGTase的酶促反应的最适p H为7.0,并且在p H为5.5~10.0范围稳定,最适反应温度为为65℃,重组酶在55℃保温5 h时仍保持90%以上的活性。研究一些金属离子和化学试剂对重组酶的影响发现β-CGTase是一种金属酶,Ca^(2+)对酶的催化起关键作用,尤其是在低浓度下对酶的活性有促进作用。对重组酶的酶促反应动力学研究得出Km为3.75 mg/m L,Vmax为0.33 mg/(min·m L)。该研究成功实现了β-CGTase基因的异源表达,为进一步实现β-CGTase的工业化生产和应用奠定了基础。; 谌恩华李相前吴华伟; 关键词：克隆大肠杆菌酶学性质

环糊精葡萄糖基转移酶合成AA-2G反应条件初探被引量：1: 2023年; 为了探究重组菌株pET-28a(+)-cgt-T1/BL21(DE3)产生的环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)催化合成2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸(Ascorbic acid 2-glucoside,AA-2G)的效果,用LB发酵培养基表达重组蛋白CGTase-T1,经亲和纯化柱纯化并浓缩后,测定其β-环化活性和歧化活性。以维生素C(Vitamin C,V_(C))和β-环糊精为底物,酶法合成AA-2G,并通过单因素优化实验,进一步探究了不同糖基供体、底物浓度、pH、温度、底物比例、蛋白浓度以及反应时间对AA-2G产量的影响,对酶合成AA-2G的动力学进行了分析。结果表明:此酶具有合成AA-2G的能力,未优化前AA-2G的产量为0.67 g/L。优化后,考虑到低成本和经济效益,选择可溶性淀粉和麦芽糊精为糖基供体,当糖基供体为可溶性淀粉时,底物浓度为70 g/L,反应pH4.5,反应温度37℃,底物比例3/3(VC/糖基供体),蛋白浓度5.0 mg/mL,反应时间为42 h时,该重组CGTase催化合成AA-2G的产量最高能达到12.68 g/L;当糖基供体为麦芽糊精时,底物浓度为30 g/L,反应pH5.0,反应温度37℃,底物比例4/2,蛋白浓度5.0 mg/mL,反应时间为30 h时,该重组CGTase催化合成AA-2G的产量最高能达到4.96 g/L。在最适条件下,AA-2G的产量分别是未优化反应条件下的18.93倍和7.40倍。经动力学分析发现可溶性淀粉作为糖基供体的催化效率高于麦芽糊精,因此,可溶性淀粉作为糖基供体比麦芽糊精更具有优势,合成得到AA-2G的产量更高。本研究成功将重组CGTase-T1用于AA-2G的合成,通过优化酶法合成的反应条件,使AA-2G的产量得到了大幅提高,为实现AA-2G的工业生产提供参考意义。; 何亚妹刘振杨郑婉苏瑞阳吴华伟; 关键词：环糊精葡萄糖基转移酶生物酶法

茶园根际解磷菌的筛选及其对茶叶产量、品质及土壤性质的影响: 2025年; 为了从茶园根际筛选具有产吲哚乙酸(IAA)能力的解磷菌,从湖北省英山县和恩施土家族苗族自治州茶园采集根际土壤,通过平板透明圈法筛选解磷菌,以解磷活性及产IAA能力为指标进行复筛,通过形态特征及16 S rDNA序列分析等方法对菌株进行鉴定并研究其促生特性。通过大田试验研究菌株对茶叶产量、品质及土壤性质等指标的影响。结果表明,从茶树根际土壤中筛选出的解磷菌DFP-24具有较好的产IAA能力,经鉴定为森林伯克霍尔德氏菌(Burkholderia arboris),同时菌株具有产铁载体、产1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶和固氮等促生特性。大田试验表明,施加DFP-24菌株可提高茶芽密度,显著提高茶叶全磷含量,增加茶叶游离氨基酸含量,降低酚氨比,影响茶叶品质,同时还能改善土壤性质。综上所述,菌株DFP-24具有开发微生物菌肥的应用潜力,研究结果可为茶树专用根际促生菌肥的开发和应用提供菌种资源和理论依据。; 马雪晴吴华伟曹春霞郑娇莉; 关键词：解磷菌茶叶品质促生作用肥效

一种大肠杆菌质粒载体及其应用方法: 一种大肠杆菌质粒载体及其应用方法，涉及可在基因重组技术中使用的质粒载体，以及用该质粒载体表达目的基因的方法。本发明的质粒载体，其特征在于，具有由大肠杆菌σ因子σ<Sup>32</Sup>识别和调控的启动子。应用该质粒载体...; 邵蔚蓝吴华伟; 文献传递

微波-超声波协同提取烟叶中茄尼醇的工艺研究被引量：6: 2010年; 研究了微波-超声波协同萃取烟叶中茄尼醇的适宜条件。对温度、提取时间和萃取溶剂等影响茄尼醇提取效率的条件进行了筛选,确定了最佳的处理条件为:在50℃下,超声波开,提取溶剂为丙酮,处理时间30min,固液比1:15(W/V,g:mL)。这种方法具有萃取速度快、溶剂用量少、萃取效率高等优点。; 吴华伟夏帆; 关键词：茄尼醇烟叶

水稻根系细菌对干旱胁迫的响应: 2024年; 为探究不同耐旱程度的水稻在干旱胁迫下根际土壤细菌和根系内生细菌群落结构和功能的差异,以敏感型水稻E000038和耐旱型水稻E000039为研究对象,在水稻苗期采用盆栽控水法进行干旱胁迫,采用微生物16S rRNA高通量测序技术,对根际土壤细菌和根系内生细菌群落和功能多样性进行了分析。结果表明:①干旱胁迫下,E000038根系内生细菌群落的α多样性指数发生显著变化,但其根际土壤细菌群落α多样性指数无显著变化;干旱胁迫对E000039的根际土壤细菌和根系内生细菌群落的α多样性指数均无显著影响。②主坐标分析(PCoA)表明,E000038和E000039根际土壤细菌群落组成在干旱胁迫下均与正常灌溉下的细菌群落组成存在差异;且E000038根系内生细菌群落组成在干旱胁迫下与正常灌溉下也存在显著差异,而E000039在正常灌溉和干旱胁迫下根系内生细菌群落组成相似。③细菌群落组成结果表明,相比于正常灌溉,在干旱胁迫下E000038和E000039根际土壤细菌中芽孢杆菌属(Bacillus)相对丰度均显著增加,E000038根系内生细菌中假单胞菌属(Pseudomonas)相对丰度显著下降,红球菌属(Rhodococcus)相对丰度显著上升;而E000038在正常灌溉和干旱胁迫下根系内生细菌优势菌群均为假单胞菌属,且相对丰度均高于98.0%。④细菌网络分析发现,干旱胁迫使E000038和E000039根际土壤细菌网络变得更加紧密,结构稳定性更弱。⑤根系内生菌群落功能预测分析发现,干旱胁迫下E000038中具有潜在抗旱功能酶和代谢通路的丰度显著低于E000039。综上所述,干旱胁迫显著影响了敏感型水稻E000038根际土壤细菌和根系内生细菌群落多样性,但对抗旱性水稻E000039的根际土壤细菌和根系内生细菌群落多样性无明显影响。; 郭官清葛蕾李鹏宋丽莉马孝松毕俊国刘毅吴华伟王翠; 关键词：水稻干旱胁迫抗旱性

浅谈如何提高微生物学实验的教学效果: 2017年; 微生物学是生命科学的重要分支学科,微生物学实验课是微生物学的重要组成部分。为推进高校微生物学实验教学的发展,对高校微生物学实验教学中存在的问题进行了分析,探讨了开放式微生物实验教学模式、研究型微生物学实验教学等在实验教学改革中的应用。旨在为进一步提高该课程的教学质量提供依据。; 柳忠玉吴华伟杨华林孙文秀; 关键词：微生物学实验教学效果教学改革

结晶纤维素的降解被引量：6: 2016年; 随着化石能源的日益消耗及其对环境的污染加重,寻求可再生的清洁能源已成为各国关注的焦点。木质纤维素是地球上最多的有机聚合物,对于解决能源危机具有巨大的潜力,但没有得到有效的利用,纤维素结晶区的存在是阻碍其降解的重大难题。本文介绍了结晶纤维素的结构、解结晶方法及优良的降解菌种;纤维素酶的结构和功能;降解结晶纤维素的机制;纤维素酶的基因工程和酶工程改造。突出应加大对耐热、高效的结晶纤维素降解菌株的挖掘,并深入探究碳水化合物结合结构域的相关作用机理,这对结晶纤维素的高效降解具有重要意义。; 谌恩华吴华伟李相前; 关键词：纤维素酶降解机制纤维小体可再生能源

产甘露聚糖酶细菌的分离鉴定、酶的部分纯化及酶学性质研究被引量：10: 2014年; 以魔芋粉为惟一碳源作为富集条件,利用刚果红染色法从玉米地土壤中筛选到1株产B-甘露聚糖酶的菌株,经摇瓶培养后其酶活力达到101 U/mL.经形态观察及16S rDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）.利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析和疏水层析对酶进行了部分纯化.对酶的酶学性质研究发现,该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0;在45～55℃时酶的稳定性较好,保温30 min后其残留活性在80％以上,在pH4.5～5.5时酶的稳定性较好,保持30 min后其残留活性在80％以上.; 吴华伟蔚鑫鑫陈雪秋; 关键词：甘露聚糖酶纯化酶学性质

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