周传丽
- 作品数：6 被引量：32H指数：2
- 供职机构：中国农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划转基因生物新品种培育专项云南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 转抗仔猪腹泻候选基因FUT1克隆猪的效率分析及分子鉴定被引量：2
- 2014年
- 产肠毒素大肠杆菌F18是引起仔猪断奶后腹泻的主要病原菌,α1-岩藻糖转移酶(FUT1)基因则是大肠杆菌F18与仔猪小肠黏膜黏附与否的重要候选基因,其有利基因型(不黏附)为AA。本研究前期利用体细胞核移植技术获得转AA型FUT1基因克隆猪15头,其中3头存活至断奶。为初步分析转基因克隆猪受胎率低、存活率低的原因以及鉴定转FUT1阳性克隆猪,本研究首先对代孕母猪的受胎率、妊娠期、产仔数以及转基因克隆仔猪初生重等进行统计分析,并利用PCR扩增产物直接测序方法对获得的15头转基因克隆猪进行分子鉴定。结果表明:相比自然生产母猪,转基因克隆代孕母猪受胎率较低、妊娠期较长、产仔率及活仔率均较低。15头转基因克隆猪中13头为FUT1转基因阳性克隆猪,1头存活至断奶。此外还发现,转基因阳性仔猪和阴性仔猪初生重差异显著(P=0.013)。研究结果为通过转基因以及克隆等技术手段生产及培育抗仔猪腹泻猪提供了数据参考。
- 董易春刘铮铸周传丽潘登科张勤俞英
- 关键词：转基因克隆猪胚胎移植分子鉴定
- 奶牛乳源大肠杆菌耐药性、毒素基因鉴定及PFGE分型研究被引量：16
- 2014年
- 通过采集中国北方地区某荷斯坦牛场生产群牛及乳房炎牛197份样品(195份奶样及2份洗布水样),分离出28株大肠杆菌菌株,并进行细菌药敏试验、毒力基因检测及PFGE分型,为牛场防治大肠杆菌型乳房炎提供数据支持。检测28株大肠杆菌对35种抗生素的敏感性发现,兽用临床抗生素庆大霉素和大观霉素应作为该奶牛场大肠杆菌型乳房炎的主要治疗药物。但该牛场出现了对非兽用广谱抗生素麦迪霉素的耐受性菌株,提示牛场在治疗奶牛大肠杆菌型乳房炎时应该注意用药问题。同时,洗布水样分离出的大肠杆菌的多重耐药性较强,也应引起重视,以便及时切断病菌传播途径。基于本研究在28株大肠杆菌中Ecs3703毒力基因的检出率为100%,证实所分离的大肠杆菌为肠出血性大肠杆菌(EHEC)而非肠毒素大肠杆菌(ETEC)。细菌毒力基因Irp2和CNF2的检出则暗示携带这两类毒力基因的大肠杆菌极可能为奶牛乳房炎致病菌。
- 王晓王新郝丹唐晓双周传丽王雅春张胜利张沅俞英
- 关键词：中国荷斯坦牛大肠杆菌药敏试验毒力基因PFGE分型
- 仔猪小肠黏膜上皮细胞体外分离培养及鉴定被引量：11
- 2011年
- 【目的】阐明产肠毒素大肠杆菌F18(ETEC F18)引发仔猪腹泻的机理,针对其候选基因FUT1的CDS区第307位点处的突变(G→A),建立3个仔猪小肠黏膜上皮细胞系(GG、GA和AA)。【方法】首先以胎鼠和仔猪为试验材料,确定小肠上皮细胞的最佳分离方法。采用XI型胶原酶和I型中性蛋白酶的联酶混合液,将胎鼠小肠组织机械剪碎后用联酶进行消化和直接将联酶灌注到仔猪小肠腔内消化的两种方法进行比较。针对仔猪小肠黏膜上皮细胞体外培养过程中成纤维细胞污染难以消除的问题,本研究采用局部画圈法逐步去除成纤维细胞。最后,用电镜和CK18免疫荧光染色对纯化后的原代仔猪小肠黏膜上皮细胞进行鉴定。【结果】两种小肠上皮细胞分离效率对比表明,后一种消化方式更为有效。进而取出生12 h内未吃初乳的大白仔猪,剖腹剪取其小肠段,使用联酶混合液灌注消化分离得到形态完整、容易贴壁生长的小肠绒毛细胞团。电镜和CK18免疫荧光染色结果均显示,小肠黏膜上皮细胞纯度达90%以上。经纯化处理,最后获得了FUT1基因型为GG和GA的两种小肠黏膜上皮细胞。仔猪原代小肠黏膜上皮细胞培养周期显示,7代前细胞生长状况良好,形态为典型的上皮细胞样,单层细胞呈铺路石排列,培养至第9代,细胞出现生长停滞、胞体空泡化等现象。【结论】最终获得了FUT1基因型为GG和GA的仔猪原代小肠黏膜上皮细胞。建立了仔猪小肠黏膜上皮细胞分离及培养方法,为后续的细胞建系工作奠定了良好的基础。
- 周传丽刘铮铸俞英张勤
- 关键词：仔猪小肠黏膜上皮细胞体外分离培养细胞鉴定
- F4ac型产肠毒素大肠杆菌菌液上清对仔猪小肠上皮细胞的免疫刺激作用被引量：2
- 2014年
- 【目的】猪源产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一类世界范围内流行的致仔猪腹泻的病原菌。依据养猪业生产实践中对致仔猪腹泻病原菌血清学鉴定结果可知,F4ac型ETEC的流行性最为广泛。到目前为止,对ETEC导致仔猪腹泻的机理已经有了比较透彻的阐释。但对ETEC培养液的免疫原性尚未有研究和描述。论文以F4ac型ETEC为研究对象,探索其菌液上清(即培养液)对仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的免疫刺激作用。【方法】首先收集F4ac型ETEC菌株200培养12h后的培养液,后经4℃,4 000 r/min,离心15 min收集培养液上清,将该上清液经0.22μm滤器过滤,并与DMEM/F12培养基以1﹕1的比例混合,以此混合液共孵育IPEC-J2细胞3 h,重复此处理3次获得处理组细胞;同时设新鲜的LB培养基与DMEM/F12培养基同样以1﹕1的比例共孵育3 h的IPEC-J2细胞为对照组细胞,对照处理亦重复3次。然后用TRIZOL试剂按照说明书提取对照组和攻毒组IPEC-J2细胞的总RNA,并用TaKaRa公司的PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(反转录试剂盒)按照说明书将提取的总RNA反转录成cDNA。应用文献报道或自行设计的跨内含子的引物通过实时荧光定量PCR方法,以猪的持家基因β-actin作为内参,检测IL8、TNF-α、CXCL2、IL6、IL1A、TLR4、SLPI、PLAU和MUC13共9个免疫相关基因和黏蛋白基因在攻毒组和对照组中的mRNA表达差异性。【结果】较之对照组,在攻毒组中,3个重要的促炎细胞因子基因IL8、TNF-α和CXCL2的mRNA均出现了显著性地过表达。其中,在攻毒组中,IL8的表达量为对照组的3.24倍(P<0.05);TNF-α的表达量亦为对照组的3.24倍(P<0.01);CXCL2的表达量为对照组的1.65倍(P<0.001)。在攻毒组和对照组之间,其他6个基因(IL6、IL1A、TLR4、SLPI、PLAU和MUC13)的表达差异未达到统计学上的显著水平。【结论】研究采用F4ac型ETEC菌株200的培养液上清对IPEC-J2细胞系进�
- 周传丽刘铮铸俞英张勤
- 关键词：免疫刺激作用
- 仔猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)体外感染模型的建立及ETEC F4ac受体候选基因的功能鉴定
- 周传丽
- 关键词：小肠上皮细胞原代培养
- 转抗仔猪腹泻基因α1-盐藻糖转移酶克隆猪的胰岛素样生长因子2表达分析被引量：1
- 2014年
- 为探求转基因克隆猪存在早期死亡率高及生长发育异常等原因,本研究首次以转抗仔猪腹泻基因α1-盐藻糖转移酶(fucosyl transferase 1,FUT1)阳性及阴性克隆猪的脾脏、肝脏及腿肌组织为试验材料,利用qRT-PCR技术定量检测影响胎儿及仔猪早期生长发育的印记基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)的表达情况,并以普通妊娠分娩猪为对照,分析其差异及变化。结果显示,IGF2基因在3类仔猪中均存在组织表达差异性,其中肝脏组织中表达量最高,腿肌组织中表达量最低。分析发现,IGF2基因在转FUT1阳性克隆猪脾脏组织中的表达量显著高于转FUT1阴性克隆猪(P<0.05),在腿肌组织中则显著低于阴性克隆猪(P<0.05)。此外,转FUT1阴性克隆猪的脾脏、肝脏组织IGF2表达量分别极显著低于、高于普通猪(P<0.01)。提示IGF2基因的表达变化可能与克隆猪早期生活力弱有关,但与转FUT1基因克隆猪早期死亡率高的关系还需进一步研究。
- 窦金焕李钟淑王雅春董易春周传丽刘铮铸张勤张勤
