周国辉
- 作品数：87 被引量：143H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- O型口蹄疫病毒变异株及其编码基因和应用
- 本发明公开了O型口蹄疫病毒变异株及其编码基因和应用。本发明首先分离到一株O型泛亚谱系口蹄疫病毒O/YS/CHA/05株，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。VP1氨基酸序列...
- 于力杨德成于永忠周国辉
- 表达A型口蹄疫病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建被引量：3
- 2012年
- 为构建表达A型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组腺病毒,本研究通过人工合成A型FMDVP1-2A、2B和3C融合基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用E.coli BJ5183内同源重组将目的基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带A型FMDV P1-2A-2B-3C基因的重组AdEasy-1。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rAd-A09。经PCR检测,该重组腺病毒在传代过程中目的基因稳定存在,病毒滴度在第8代时可达到108.5TCID50/mL。间接免疫荧光检测和western blot分析表明,rAd-A09在AD-293细胞中产生FMDV的结构蛋白VP0、VP1和VP3。该重组腺病毒的构建为口蹄疫新型疫苗的研究奠定了基础。
- 宋姗姗王海伟周国辉于力
- 关键词：A型口蹄疫病毒重组腺病毒衣壳蛋白
- 北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫层析试纸条的研制及初步应用被引量：1
- 2022年
- 为研制一种快速检测北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的免疫层析试纸条(ICS),本研究以红色乳胶微球偶联的PRRSV N蛋白单克隆抗体(MAb)1H4为检测抗体,并包被在结合垫上,以MAb 1H4和羊抗鼠IgG为捕获抗体,并分别包被在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,经各反应条件的优化建立了检测PRRSV的乳胶微球ICS。各反应条件优化结果显示,乳胶微球偶联的MAb即检测抗体浓度为1.5 mg/mL,检测线MAb即检测线捕获抗体的浓度为2.0 mg/mL,质控线羊抗鼠IgG即质控线捕获抗体的浓度为1.0 mg/mL。特异性试验结果显示,该方法可特异性检测我国出现的高致病性、NADC30-like、NADC34-like等北美型PRRSV代表株,与欧洲型PRRSV DV疫苗株及猪的其他常见病毒(CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PPV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对系列稀释PRRSV(10^(5.0) TCID_(50)/mL~2.5×10^(2.0) TCID_(50)/mL)的最低检测限为5×10^(2.0) TCID_(50)/mL,对2倍倍比稀释的重组N蛋白(rN,24000 ng/mL~3.75 ng/mL)的最低检测限为15 ng/mL;重复性试验结果显示,同一批次和不同批次试纸条的检测结果均无差异;对不同类型北美型PRRSV株(高致病性株、NADC30-like株、类高致病性株)感染的猪血清检测结果显示,利用该ICS可以从相应猪血清中检测到不同北美型的PRRSV。对采集的108份疑似PRRSV感染的猪肺组织及血清样品分别采用本研究建立的ICS及本研究室建立的PCR方法检测,结果显示,ICS检测的阳性率为37.03%(40/108),PCR检测的阳性率为42.59%(46/108),二者的总体符合率为83.33%。上述结果表明,该方法可以用于我国PRRSV主要流行株及临床样品的检测。本研究首次以同一株MAb分别作为检测抗体和检测线捕获抗体,建立检测PRRSV的乳胶微球ICS,为现地PRRSV流行病学调查及临床快速检测提供了新的技术手段。
- 李宛生李敏华张洪亮李超许浒付军龚帮俊郭镇洋刘建波彭金美周国辉王倩田志军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白
- 伪狂犬病病毒基因缺失及活载体疫苗研究进展被引量：12
- 2005年
- 伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种畜、禽及野生动物的一种以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。该病每年给养猪业造成的损失达数十亿美元,目前对该病主要是以疫苗防制为主。随着基因工程技术的不断更新和发展,研制更加安全、有效的基因工程疫苗对该病的防治将会有重要的意义。文章对伪狂犬病基因缺失疫苗及活载体疫苗的研究进行了综述。
- 周国辉仇华吉田志军童光志
- 关键词：伪狂犬病病毒活载体疫苗基因缺失疫苗基因工程疫苗脑脊髓炎主要症状
- 表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损腺病毒及其应用
- 本发明公开了表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损腺病毒及其应用。本发明首先精确构建了编码O型口蹄疫病毒空衣壳的亚基因组或其突变体，其核苷酸序列分别为SEQIDNo.1或SEQIDNo.2所示；将其与腺病毒表达载体可操作性连...
- 于力周国辉杨德成
- 文献传递
- 表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了表达O型口蹄疫病毒空衣壳的重组缺损型腺病毒及其构建方法和应用。本发明在保证3C蛋白酶对口蹄疫病毒衣壳蛋白的剪切及正确组装和形成的前提下，对O型FMDV的3C基因进行改造或突变，构建3C蛋白酶活性改变的表达O型...
- 于力周国辉杨德成王海伟
- 文献传递
- 聚合酶保真性降低导致口蹄疫病毒的适应性和力明显下降
- 由于RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)缺乏校正功能,RNA病毒种群以准种(quasispecies)形式存在。已有研究表明,RNA聚合酶的保真性提高即变异频率下降能够导致突变体病毒的毒力减弱。最近也有研究显示,聚合酶保...
- 谢小春王海伟曾健雄杨德成周国辉于力
- 共表达O型FMDV衣壳蛋白和绿色荧光蛋白重组腺病毒的构建
- 2012年
- 为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)的P12A3C基因及GFP基因的重组腺病毒rAdV-P12aEGFP2a3C,本研究以FMDV的2A基因序列为Linker,将报告基因EGFP插入FMDV的P12A与3C之间。重组腺病毒感染HEK-293细胞后可以观察到绿色荧光,表明EGFP蛋白获得表达。应用FMDV的VP2单克隆抗体4B2对重组病毒感染细胞进行western blot检测,反应条带与FMDV衣壳蛋白VP0和VP3的分子量大小相符,表明FMDV的完整衣壳蛋白和3C蛋白酶也均获得表达,而且EGFP的插入并未影响P1蛋白的表达和3C蛋白酶对P1的正确切割。重组腺病毒的生长特性分析表明,EGFP的插入也未影响该重组腺病毒的增殖特性。上述研究结果显示,表达FMDV衣壳蛋白P12A3C的重组腺病毒可以作为载体,以2A蛋白作为Linker表达一个小分子蛋白,为改进以腺病毒为载体的口蹄疫基因工程疫苗提供了新思路。
- 刘蒙蒙杨德成周国辉梁特于力
- 关键词：口蹄疫病毒绿色荧光蛋白
- 哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队:关注的重点及其研究进展
- <正>2013年6月,中国农业科学院启动科技创新工程,此举是农业部、财政部等部门加强农业科技创新、探索国家创新体系建设的一项重大举措。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室的牛羊病和口蹄疫部分,组建成为牛羊传染病研...
- 于力薛飞朱远茂周国辉王芳常继涛王海伟杨德成姜志刚
- 文献传递
- 哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队:关注的重点及其研究进展
- 2013年6月,中国农业科学院启动科技创新工程,此举是农业部、财政部等部门加强农业科技创新、探索国家创新体系建设的一项重大举措。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室的牛羊病和口蹄疫部分,组建成为牛羊传染病研究创新...
- 于力薛飞朱远茂周国辉王芳常继涛王海伟杨德成姜志刚
