姚媛
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究
- 2015年
- 目的研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组,免疫3次。首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血,采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平。第3次免疫后2周,每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条,42 d后剖杀,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;制备各组小鼠单个脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high、CD4+CD44high或CD8+CD44high水平;用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h,采用酶联免疫法检测脾细胞的IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果第3次免疫后2周TGR与CpG2+TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR抗体的IgG滴度均达1:200 000以上,IgG2a与IgG1的比值(IgG2a/IgG1)随时间的延长缓慢增高。TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN-γ和IL-2水平与空白组、PBS组、CpG2免疫组相比明显增高(P<0.05)。TGR免疫组与TGR+CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high、CD8+CD44high及CD4+CD44high与空白组和PBS组相比细胞比值增加(P<0.05)。TGR免疫组和CpG2+TGR免疫组的减虫率分别为9.4%,10.5%,减卵率分别为9.2%和32.8%。结论 SjTGR具有较强的免疫原性,可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化,但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应。CpG2 ODN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂。
- 宋丽君余传信殷旭仁沈双高玒张伟金一姚媛刘茜王玠柯雪丹许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫免疫原性免疫保护
- 基因工程抗体及其在寄生虫病防治中的应用研究进展
- 2013年
- 抗体在生物医学领域具有广泛的应用前景。传统多克隆抗体及单克隆抗体由于其固有的缺点使其应用价值受到限制。抗体的人源化与片段化改造催生出一系列基因工程抗体变体。本文就基因工程抗体及其在寄生虫病防治中的应用研究进展作一综述。
- 姚媛余传信
- 关键词：抗体基因工程抗体片段寄生虫病
- 血吸虫感染小鼠及家兔抗Sj23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)IgG应答模式及其免疫诊断价值被引量：3
- 2013年
- 目的探讨日本血吸虫中国大陆株23ku膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)的抗体反应模式及重组Sj23HD-HSA用于血吸虫诊断和疗效考核的价值。方法建立血吸虫尾蚴感染小鼠及家兔模式动物。采集尾蚴感染前、感染后及治愈后不同时间点小鼠及家兔血清,以酵母表达的纯重组Sj23HD蛋白为抗原,通过间接ELISA方法检测抗Sj23HD IgG应答水平的动态变化,观察Sj23HD在小鼠及家兔体内的抗体反应应答模式及其疗效考核潜能;以Sj23HD-HSA融合蛋白为抗原,以ELISA检测132份血吸虫、30份华支睾吸虫、10份并殖吸虫感染者以及80份健康人血清,观察该重组抗原用于血吸虫病诊断的价值,以抗可溶性虫卵抗原的抗体应答反应作为对照。结果血吸虫感染小鼠及家兔体内抗Sj23HD蛋白的抗体反应呈短寿应答模式,抗Sj23HD IgG反应随着感染时间的延长呈增强趋势,治愈后的初期继续增强,至治疗后2～4周达到最高水平,随后逐渐下降,至治疗后16周,部分小鼠、家兔的抗体水平可达到阴性阈值,但下降幅度存在个体差异;抗SEA抗体水平在治疗后呈轻度下降趋势。未治疗小鼠和家兔血清中抗Sj23HD、SEA的抗体水平均无明显下降。重组Sj23HD-HSA和SEA ELISA检测132份血吸虫病病人血清,特异抗体阳性率分别为88.64%和97.73%;检测10份并殖吸虫病病人血清,交叉反应率为50%和90%;检测30份华支睾吸虫病病人血清,交叉反应率为0和16.7%;80份健康人血清检测均为阴性。结论血吸虫感染小鼠、家兔血清中抗Sj23HD蛋白的抗体反应为抗原依赖的短寿抗体反应,检测参与这一特异性短寿抗体反应的抗体具有血吸虫病诊断与疗效考核潜能。与SEA相比,重组Sj23HD蛋白作为抗原用于血吸虫病实验诊断具有较好的特异性,但对于来自并殖吸虫流行区的患者仍需注意鉴别诊断。
- 张伟王玠余传信宋丽君殷旭仁钱春艳沈双金一柯雪丹姚媛高玒许永良杨静
- 关键词：疗效考核
- 日本血吸虫高速泳动家族B1蛋白基因的克隆表达与功能分析
- 2014年
- 目的克隆、表达日本血吸虫高速泳动家族B1蛋白(SjHMGB1),并研究其功能特性。方法利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增出编码SjHMGB1的完整开放阅读框DNA片段,然后将其亚克隆至原核表达载体质粒pET28a(+)中,构建重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。将重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),含重组质粒的转化子细菌经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导以表达重组SjHMGB1蛋白。通过镍螯合琼脂糖亲和胶亲和层析法制备纯化的重组SjHMGB1蛋白。通过DNA迟滞实验和动物免疫鉴定重组SjHMGB1的DNA结合和免疫学特性。通过免疫印迹试验(Western blotting)和RT-PCR确定SjHMGB1分子在日本血吸虫不同发育阶段的表达情况。以重组SjHMGB1为抗原免疫小鼠,3次免疫后每只小鼠感染45±2条血吸虫尾蚴,42 d后剖杀,计算减虫率与减卵率,观察其诱导抗血吸虫感染的免疫保护性作用。结果采用RT-PCR法从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增到长度约为530 bp的特异性DNA条带,序列分析证实为编码SjHMGB1蛋白的开放阅读框序列。将此片段亚克隆至表达质粒pET28a(+)中,成功构建了重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。含重组表达质粒SjHMGB1-pET28a的转化子细菌经IPTG诱导能表达分子量约28 kDa的可溶性SjHMGB1蛋白。采用镍螯合亲和层法制备了纯化的重组SjHMGB1蛋白。DNA迟滞试验显示纯化的Sj HMGB1蛋白可同超螺旋及线性DNA结合,重组SjHMGB1免疫小鼠能产生高效价的抗体IgG,Western blotting分析证实重组SjHMGB1蛋白能被重感染小鼠血清所识别,表明重组表达的SjHMGB1分子具有天然蛋白的功能活性与免疫学特性。RT-PCR和Western blotting分析显示SjHMGB1分子在血吸虫成虫和虫卵期大量表达,而在尾蚴阶段表达量极低。免疫保护性试验结果表明,重组SjHMGB1分子免疫不能诱导有效的抗血吸虫感染免疫保护性作用。结论获得了编码SjHMGB1基因和纯�
- 姚媛余传信宋丽君殷旭仁王玠金一沈双张伟高玒许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫DNA结合活性免疫保护作用MOBILITYBOX
- 预警哨鼠抗Sj23HD IgG抗体Western blot检测方法的改进及应用被引量：2
- 2013年
- 目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法，并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条，采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG，观察方法的稳定性和敏感性，并对2012年江苏省潜在血吸虫感染高风险水域监测预警哨鼠回收后第14、21、35d血样进行检测，同时以ELISA检测方法作为对照，对免疫检测结果与解剖查虫结果进行统计学分析。结果改进后的Western blot操作简便，比常规方法节省142周时间。预制NC膜条至少可低温保存6个月，其敏感性与新鲜制备的NC膜条的敏感性相似。使用改进后的Western blot方法检测预警哨鼠14、21和35d血清标本，阳性率分别为0．90％，3．50％和5．06％，ELISA阳性率分别为0．45％、3．00％和5．06％，差异无统计学意义（P〉0．05）。两种免疫学方法的敏感性均高于解剖查虫法。结论改进后的Western blot操作简便，敏感性高，可用于预警哨鼠血吸虫感染检测。
- 王玠余传信杨坤殷旭仁宋丽君沈双金一姚媛陶永辉许永良杨静
- 关键词：特异性IGG抗体哨鼠WESTERNBLOT
- 日本血吸虫核糖核酸酶T2的表达及其功能分析
- 2013年
- 目的制备重组日本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白(rSj RNase T2),并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5′端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片段,亚克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a。将重组表达质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化rSj RNase T2蛋白。纯化蛋白通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性,制备可溶性rSj RNase T2。以酵母RNA为底物进行消化,采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测rSj RNase T2酶活性。用纯化的rSj RNase T2免疫小鼠,采用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清特异抗体水平,观察其抗原性;采用检测Western blot抗rSj RNase T2抗体IgG与成虫可溶性虫抗原、成虫外分泌抗原、虫卵可溶性抗原和虫卵外分泌抗原的反应性,并观察Sj RNase T2在虫体中的分布。以rSj RNase T2刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,采用RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶基因mRNA的表达水平,采用ELISA检测RAW264.7细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以观察Sj RNase T2的免疫调节功能。结果重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a构建成功,经IPTG诱导,能表达重组Sj RNase T2蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,经过复性能获得部分可溶性蛋白。rSj RNase T2具有酶活性,能够水解酵母RNA。ELISA检测rSj RNase T2免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1︰200 000,该抗血清能识别来源于血吸虫虫卵及虫卵外分泌抗原中的天然RNase T2。rSj RNase T2可诱导巨噬细胞向M2型方向转化,表达高水平的IL-10、精氨酸酶及CD206表面分子。结论 rSj RNase T2表达成功。该蛋白具有天然的酶学特性和抗原性,
- 柯雪丹余传信宋丽君菊池三惠子平山谦二王玠殷旭仁金一沈双姚媛高玒高琪
- 关键词：功能分析免疫调节
- 日本血吸虫热休克蛋白70(Sj HSP70)的抗体反应特征及免疫诊断价值被引量：8
- 2014年
- 目的制备重组日本血吸虫中国大陆株热休克蛋白[rSj HSP70（Grp78）],检测其抗体反应特征及用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板逆转录合成cDNA,采用基因特异性引物,通过PCR技术扩增编码Sj HSP70（Grp78）成熟肽的基因片段,并将该片段插入到表达质粒pET28a（＋）中,构建表达质粒HSP70（Grp78）-pET28a。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达后采用镍亲和层析法制备纯化的可溶性rSj HSP70（Grp78）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）及Western blot检测rSj HSP70（Grp78）的抗体反应特异性及抗rSj HSP70（Grp78）IgG在血吸虫感染小鼠血清中动态变化,以分析其早期诊断与疗效考核价值,并比较rSj HSP70（Grp78）-ELISA与SEA-ELISA检测血吸虫感染者血清抗体IgG的敏感性与特异性。结果编码Sj SP70（Grp78）成熟肽基因片段克隆成功,并获得纯化的分子质量单位约69ku的重组表达Sj HSP70（Grp78）蛋白。Western blot显示Sj HSP70（Grp78）蛋白能被日本血吸虫感染的小鼠及人血清识别,但不与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清及健康人、鼠血清反应。感染小鼠血清抗Sj HSP70（Grp78）IgG水平与血吸虫感染度呈正相关,并随着感染时间延长呈增强趋势,在感染后16~18周达到峰值,随后开始回调,但始终维持在较高水平。治疗组小鼠经药物治疗后第2周（感染后第8周）,体内抗体水平迅速上升并达到高峰,经过短暂下降后再次上升,出现第二个高峰,随后逐渐回调,至治疗16周（感染后第22周）,部分小鼠抗体水平已接近阴性阈值。部分个体在血吸虫感染后1周即可检测到血清抗rSj HSP70（Grp78）IgG。分别以rSj HSP70（Grp78）和SEA血吸虫、华支睾吸虫及卫氏并殖吸虫感染者血清及健康人血清,敏感性分别为82.9%和95.7%,特异性分别为94.3%和85.7%,与健康人血清的�
- 高玒余传信宋丽君王玠殷旭仁沈双姚媛许永良杨静
- 关键词：热休克蛋白70抗体反应免疫诊断
