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烟曲霉免疫优势抗原硫氧还蛋白还原酶GliT的鉴定及其特异性抗体在非粒缺IA患者中早期诊断价值的初步评估: 目的 GliT(thioredoxin reductase GliT,TR)的鉴定,及其特异性抗体在非粒缺IA患者中早期诊断价值的初步评估。方法用生物信息学技术分析TR的同源性;用基因克隆和原核表达技术获得重组TR;经质...; 史利宁陆静芬马春芳孔倩倩李芳秋

白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 2012年; 目的制备抗白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)单克隆抗体,用以研究胞壁蛋白Fba1在侵袭性念珠菌感染(IC)中的致病作用。方法取重组白念珠菌Fba1蛋白免疫BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA测定单克隆抗体的效价,western blot和免疫荧光技术鉴定其特异性,用IsoStrip鉴定其抗体类型。结果筛选到1株稳定分泌抗Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体类型为IgG2a,轻链为κ型。鉴定结果表明,ELISA效价为1×106,能与念珠菌裂解物中天然Fba1和基因重组Fba1特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单克隆抗体与白念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌均发生反应。结论建立了1株持续分泌高效价抗念珠菌属特异性Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为研究Fba1在IC中的致病作用提供了实验材料。; 李芳秋陆静芬史利宁胡毓安王颖马春芳孔倩倩; 关键词：念珠菌单克隆抗体

白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定被引量：6: 2012年; 目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定。结果成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。结论成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。; 孔倩倩廖红李芳秋马春芳史利宁胡毓安; 关键词：白念珠菌基因克隆原核细胞表达

念珠菌优势抗体检测方法的建立及临床诊断价值评估被引量：9: 2013年; 目的侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)是免疫功能损伤或低下患者常见的感染和死亡原因,近年来检测IC患者血清中特异性抗体的血清学诊断方法成为研究热点。本文旨在建立检测念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)、果糖二磷酸醛羧酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)特异性抗体的ELISA方法,评估其在IC早期诊断中的应用价值。方法利用基因重组技术获得的Eno、Fba1重组蛋白作为包被抗原,建立测定人血清相应抗体的ELISA,并对方法的敏感性、特异性进行考查。结果建立了检测IC患者血清抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA,cut-off值分别为吸光度(A)值0.370和0.610。ELISA结果显示,IC患者血清中的抗Eno、抗Fba1抗体水平明显高于健康对照和非IC患者对照(P<0.001)。抗Eno和抗Fba1对诊断IC的敏感性和特异性分别为72.3%(73/101)和98%(196/200),87.1%(88/101)和96%(192/200),联合检测可提高敏感性至91.0%。且与细菌感染及其他真菌感染患者(如曲霉病)无交叉反应。IC患者中40.6%(41/101)可以在血培养阳性前检测到抗Eno、49.5%(50/101)可以在血培养阳性前检测到抗Fba1。结论建立了检测抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA法,检测念珠菌菌丝相分泌蛋白IgG抗体特异性和灵敏度良好,在念珠菌感染诊断中具有潜在临床应用价值。; 马春芳陆静芬孔倩倩韩丹丹廖红李芳秋; 关键词：念珠菌烯醇化酶 ELISA

白色念珠菌H3K4甲基转移酶N端肽段的原核表达及应用: 近年来，随着大量免疫抑制剂、化疗药物和广谱抗生素的广泛应用，侵袭性念珠菌感染（invasive candidiasis，IC）的发病率和死亡率不断上升。但因缺乏特异的临床症状，且血培养和组织病理学检查这两种确诊方法缺乏敏...; 孔倩倩; 关键词：白色念珠菌原核表达多克隆抗体血清学诊断; 文献传递

抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT抗体对侵袭性曲霉病的诊断价值被引量：3: 2013年; 目的建立检测抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT(TRG)抗体的ELISA法,评价其对侵袭性曲霉病(IA)的诊断价值。方法选择非中性粒细胞缺乏症IA患者42例、中性粒细胞缺乏症IA患者34例、血培养为其他真菌或细菌的非IA患者155例及体检健康者200例作为研究对象。用重组TRG作为包被抗原建立检测血清抗TRG抗体的ELISA法,检测研究对象血清抗TRG抗体水平,并与半乳甘露聚糖(GM)试验比较。建立兔IA模型观察抗TRG抗体产生的情况。结果 ELISA法检测抗TRG抗体的cut off值为0.514。非中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.827(0.571,1.234),抗TRG抗体阳性率为81.0%(34/42);中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.445(0.250,0.924),阳性率为41.2%(14/34)。非中性粒细胞缺乏症IA患者、中性粒细胞缺乏症IA患者组血清抗TRG抗体水平高于健康人+非IA患者对照组[0.191(0.134,0.293)],U分别为2 669.5、855,P均<0.01。对于非中性粒细胞缺乏症IA患者,抗TRG抗体ELISA检测法的敏感性高于GM试验(81.0%vs 52.3%,χ2=6.72,P<0.01);对于中性粒细胞缺乏症IA患者,GM试验的敏感性高于抗TRG抗体ELISA检测法(85.3%vs 41.2%,χ2=6.72,P<0.01)。2者联合检测,可使诊断非中性粒细胞缺乏症和中性粒细胞缺乏症IA的敏感性分别提高至88.1%(37/42)和91.2%(31/34)。血清抗TRG抗体在IA初期阶段持续升高,抗真菌治疗有效后,抗TRG抗体水平逐渐降至正常。兔IA模型显示感染烟曲霉1周后即出现抗TRG抗体,且抗体滴度快速增高。结论抗TRG抗体是辅助诊断非中性粒细胞缺乏症IA患者的潜在的标志物。; 史利宁陆静芬马春芳孔倩倩李芳秋; 关键词：侵袭性曲霉病中性粒细胞缺乏症

白色念珠菌H3K4甲基转移酶N端肽段抗体的ELISA检测方法建立: 2013年; 目的建立检测人血清中抗白色念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段（N—terminal region of histone 3 lysine 4 methyhransferase，Setl-208p）IgG类抗体的ELISA方法，评估其在侵袭性念珠菌病（invasive candidiasis，IC）患者中的早期诊断价值。方法收集IC患者（105例）、定植患者（37例）、细菌感染患者（25例）、其他真菌感染患者（10例）以及健康体检者（200例）血清，用Setl-208p作为包被抗原，血清1：500稀释，以羊抗人IgG-HRP为二抗，测定人血清中相应的抗Setl-208p抗体水平，确定cut-off值并考查方法的敏感度、特异度和准确度。结果以重组Setl-208p抗原建立的ELISA法精密度良好，批内变异系数（coefficient of variation，CV）为5．5％，批间CV为10．4％。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为91．8％，根据ROC曲线，选择吸光度（absorbance，A）值0．40作为cut off值，对IC的诊断敏感度为79．2％，特异度为90％，且与细菌感染及其他真菌感染病人（如曲霉）无非特异交叉反应。此外，IC患者中抗Setl-208p抗体阳性率（76．1％，80／105）显著高于念珠菌定植者抗Setl-208p抗体阳性率（32．4％，12／37）（χ^2=22．9，P〈0．01）。结论建立了检测抗白念珠菌抗Setl-208p抗体的ELISA法，在IC早期诊断中具有潜在应用价值。; 孔倩倩马春芳蔡迁廖红韩丹丹史利宁李芳秋; 关键词：念珠菌 ELISA 血清学诊断

133例念珠菌血症临床与实验室分析被引量：10: 2013年; 目的探讨医院内侵袭性念珠菌病(IC)的流行特征、耐药情况及血清学检测结果,为念珠菌感染的病原学诊断及合理用药提供依据。方法收集2009～2011年间南京军区南京总医院全部血培养念珠菌阳性病例进行回顾性分析。结果共检出念珠菌血症133例。菌株主要为热带念珠菌(28.6%)、白念珠菌(23.3%)和近平滑念珠菌(19.5%)。对抗真菌药物的敏感率依次为:伏立康唑(97.8%)、伊曲康唑(69.2%)、氟康唑(45.4%)、酮康唑(38.9%)。31例检测了血清(1,3)-β-D-葡聚糖(BG)水平,阳性率为48.3%(15/31);102例检测了血清抗烯醇化酶(Eno)抗体,阳性率为60.8%(57/102);23例同时进行抗Eno抗体和BG检测,阳性率为73.9%(17/23)。结论引起念珠菌血症的病原体主要为热带念珠菌、白念珠菌和近平滑念珠菌。对氟康唑均有不同程度的耐药。联合血清学检测有助于辅助诊断念珠菌血症。; 马春芳孔倩倩李芳秋蔡迁王颖黄梅韩丹丹; 关键词：念珠菌血症流行病学

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