孔文涛
- 作品数：17 被引量：59H指数：4
- 供职机构：山东大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- Paenibacillus sp.K1 β-半乳糖苷酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2008年
- 从鲜牛奶中分离到1株产-βgalactosidase的细菌,经16S rDNA序列比对鉴定为类芽孢菌Paenibacillussp.K1。提取该菌株的染色体DNA,以pUC18(lac-)为载体,构建其DNA文库;在含有X-gal的LB平板上筛选该文库,得到6个蓝色菌落;对阳性克隆中插入的DNA片段序列测定,鉴定出1个编码全长为2 028 bp并携带有组成型启动子的β-半乳糖苷酶基因。将该基因导入大肠杆菌BL21(DE3)中,实现了β-半乳糖苷酶高效表达,其酶活为25.06 U/mL,高于原始菌株的4.55 U/mL,并进一步用亲和层析将该酶进行了纯化。
- 陆文伟孔文涛孙芝兰孔健季明杰
- 关键词：类芽孢杆菌Β-半乳糖苷酶DNA文库
- Paenibacillus sp.K1乳糖酶基因bga在乳酸乳球菌中的表达被引量：4
- 2008年
- 为了提高乳酸乳球菌利用乳糖的能力,缓解乳糖不耐症,以实验室构建的含有乳糖酶基因的质粒pUC-bga为模板,通过PCR扩增得到乳糖酶基因bga,将其分别与载体pSEC和pMG36e连接,获得重组质粒pSEC-bga和pMG36e-bga,重组质粒分别电转Lactococcus lactisNZ9000和Lactococcus lactisMG1614,并在乳酸乳球菌细胞内实现了活性表达。高压液相色谱(HPLC)分析其对培养基中乳糖的利用能力,结果重组菌L.lactisNZ9000-Bga对乳糖的利用能力比对照菌株高一倍,为生产低乳糖的发酵乳制品奠定了基础。
- 孙芝兰孔文涛孔健
- 关键词：乳糖酶基因乳酸乳球菌
- 乳酸乳球菌nisin抗性基因的克隆及作为筛选标记的研究
- 2008年
- 在添加500 U/mL nisin和溴甲酚紫的GM17选择性培养基上,分离到5株nisin抗性菌株。根据形态观察,生理生化特性和16S rDNA基因序列比对被鉴定为乳酸乳球菌。根据已报道nisin抗性基因设计引物,分别以这5株菌的染色体和质粒DNA为模板进行PCR扩增,结果从1株抗性菌株的染色体上得到目的基因产物。通过序列测定和同源性比对,证明为nisin抗性基因(nsr)。将nsr基因克隆到乳酸菌-大肠杆菌穿梭质粒pTRKH2上,重组质粒命名为pT-nsr。pT-nsr电转化乳酸乳球菌MG1614,获得的重组菌MG1614/pT-nsr在含有500 U/mL nisin的培养基中生长情况良好。这表明nsr基因赋予宿主菌抗nisin特性,并且与红霉素抗性功能相同,因此nsr基因可以作为筛选标记用于食品级载体的构建。
- 郭婷婷孔文涛孔健季明杰
- 关键词：乳酸乳球菌
- 发酵乳杆菌β-半乳糖苷酶转糖基活性研究被引量：7
- 2008年
- 从传统发酵乳制品中筛选到1株转糖基活性较高的乳杆菌，经16SrDNA菌种鉴定为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum，EU621851）K4。以乳糖为底物，研究β-半乳糖苷酶粗酶液在不同pH、乳糖浓度、反应温度和时间的转糖基活性。结果表明在pH5．5、乳糖20％、温度50℃条件下反应48h，转糖基活性最高，能生成多种低聚半乳糖。研究发现在低乳糖含量（5％）和pH5～7范围内都具有明显的转糖基活性。用牛奶为原料进行转糖基能力测定，结果该酶既能降低牛乳中的乳糖含量，又能生成低聚半乳糖。因此，菌株Lb．fermentum K4在乳制品发酵中具有潜在的应用价值。
- 陆文伟孔文涛孔健季明杰
- 关键词：发酵乳杆菌半乳糖苷酶低聚半乳糖
- 一株产生beta、alpha两种半乳糖苷酶的伊利诺类芽孢杆菌及应用
- 本发明公开了一株产生beta、alpha两种半乳糖苷酶的伊利诺类芽孢杆菌及应用，所述菌株命名为伊利诺类芽孢杆菌(Paenibacillus illinoisensis)KWT5，已于2012年11月27日保藏于“中国微生...
- 孔健刘陶陶孔文涛陆文伟孙芝兰
- 文献传递
- 产β-半乳糖苷酶芽孢杆菌的筛选及产酶条件的优化被引量：4
- 2009年
- [目的]筛选产β-半乳糖苷酶的芽孢杆菌并对其产酶条件进行优化。[方法]从土壤中筛选出一株具有β-半乳糖苷酶活性的菌株,对其进行鉴定并对其发酵产酶条件进行优化。[结果]该菌株被初步鉴定为巨大芽孢杆菌。该菌株的最佳碳源是乳糖,最佳氮源是牛肉膏和蛋白胨,Na+对产酶有明显的促进作用。当乳糖含量为1.20%,牛肉膏含量为0.63%,蛋白胨含量为1.04%时,该菌株所产β-半乳糖苷酶酶活可达3.68 U/ml。初始pH值为8.0,培养温度为45℃,接种量为2%,振荡培养17 h,该菌株所产β-半乳糖苷酶的酶活最高,为5.49 U/ml。[结论]该菌株在高温条件下生长旺盛,适宜生长pH值范围广,在生产实践中具有一定的应用价值。
- 郭志华孔文涛孔健
- 关键词：Β-半乳糖苷酶芽孢杆菌产酶条件
- 绿色巴夫藻cDNA文库的构建及EST序列分析被引量：2
- 2006年
- 将绿色巴夫藻（Pavlova viridis）培养液逐种加入氨苄青霉素、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星3种抗生素处理，经检验后无杂菌污染。以该藻种为实验材料，以λTriplEx2为载体，利用SMART技术构建其cDNA文库。经测定文库滴度为6×10^6pfu／mL，重组率为98％。利用PCR方法检测cDNA文库插入DNA片段的大小，其长度为0．5～2kb，表明该文库达到建库要求，可用来筛选低丰度mRNA的基因克隆。对cDNA文库中的阳性克隆进行随机PCR扩增，挑选插入DNA片段较大的克隆，进行5’末端单向序列测定，测序结果与NCBI数据库进行BLAST比对，获得了200个有研究价值的EST序列和cDNA克隆，为进一步研究和开发绿色巴夫藻的功能基因奠定了基础。
- 牛艳孔文涛杨婧孔健
- 关键词：绿色巴夫藻多不饱和脂肪酸
- 乳酸乳球菌电转化条件的研究
- 以质粒pTRKH2为材料,对乳酸乳球菌MG1614进行电转化条件的研究。实验结果表明,在电转化过程中,电场强度、电阻大小、细胞生长状态和电击后菌株复苏时间均对转化效率有明显影响,得到了乳酸乳球菌的最佳电转化条件为:对数生...
- 孙磊孔文涛孔健
- 关键词：乳酸乳球菌电转化
- 文献传递
- 一种食品级诱导表达载体、系统及其构建方法和应用
- 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种新的食品级诱导表达系统，不仅可以响应低浓度锌离子，弥补现有技术中乳酸菌NICE系统诱导剂成本高限制应用的缺陷；还具有严谨的调控体系，避免转录泄露，蛋白表达量高；同时，本发明提供的表...
- 郭婷婷孔健孔文涛徐晓宁张令闻崔越
- 绿色巴夫藻cDNA文库的构建及EST序列分析
- 色巴夫藻为实验材料,以λTriplEx2为载体,利用SMART技术构建绿色巴夫藻cDNA文库;经测定文库的滴度为7.5x105pfu/ml,重组率为92﹪;利用PCR方法扩增插入片段的大小,其长度在500bp-1.5kb...
- 孔健孔文涛牛艳杨静张克炜
- 关键词：绿色巴夫藻CDNA文库功能基因
