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孔洁
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
上海交通大学医学院上海市肿瘤研究所
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发文基金:
国家自然科学基金
国家重点基础研究发展计划
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
倪涛
上海交通大学医学院上海市肿瘤研...
沈秋瑾
上海交通大学医学院上海市肿瘤研...
蒋华
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上海交通大学医学院上海市肿瘤研...
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上海交通大学医学院上海市肿瘤研...
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蒋华
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沈秋瑾
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倪涛
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肿瘤
年份
1篇
2011
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人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定
被引量:1
2011年
目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。
沈秋瑾
孔娟
邓云
蒋华
胡素文
孔洁
倪涛
游海燕
李宗海
屠红
张志刚
覃文新
关键词:
细胞培养技术
哺乳动物细胞
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