孙洪亮
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞构建组织工程瓣膜及其抗血栓作用被引量：5
- 2006年
- 目的:分析骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞构建组织工程瓣膜的可行性,评价其抗血栓功能。方法:实验于2005-08/2006-04在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。①人骨髓来源为中山医院胸外科手术摘除的一段肋骨(患者知情同意);取健康志愿者静脉血进行血小板黏附观察;新鲜猪心瓣膜取自上海复新屠宰场。②利用胰酶-乙二胺四乙酸、核酸酶处理猪心瓣膜制备脱细胞支架。将摘除的一段肋骨无菌条件下用含肝素的磷酸盐缓冲液充分冲洗骨髓腔,进行骨髓间充质干细胞的分离培养及体外诱导分化。③经体外诱导成的内皮细胞后,种植于瓣膜支架,构建组织工程瓣膜。体外培养1周后,取组织工程瓣膜及未种细胞的空支架做血小板黏附试验。以CD31、vWF对细胞进行鉴定,采用苏木精-伊红染色、免疫荧光及扫描电镜对组织工程瓣膜进行评价。结果:①骨髓间充质干细胞定向诱导为内皮细胞及其性质鉴定:骨髓间充质干细胞定向诱导为内皮细胞后,CD31及vWF染色由阴性转为阳性,呈现出“铺路石”样形态。②瓣膜组织形态观察结果:猪心瓣膜的细胞成分完全去除,胞外基质保存良好,组织工程瓣膜表面形成一连续的内皮细胞单层。③血小板黏附情况:扫描电镜显示空支架表面有大量血小板聚集和黏附,而组织工程瓣膜表面无此现象,显示了良好的抗血栓性能。结论:骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞可以用来构建具有良好的抗血栓性能组织工程瓣膜。
- 方宁涛张宇浩孙洪亮谢尚喆高红阳裴鹏潘銮凤
- 关键词：骨髓干细胞
- 十二烷基肌氨酸钠法制备带瓣管道支架及其生物学性能分析被引量：2
- 2007年
- 目的尝试用十二烷基肌氨酸钠作为脱细胞试剂,制备脱细胞组织工程支架材料,并分析其生物学性能。方法用0.25%十二烷基肌氨酸钠溶液及核酸酶对猪的带瓣膜管道进行脱细胞处理,并对其进行 DNA、可溶性蛋白含量测定,HE、Movat 染色和电镜观察及生物力学测试;大鼠皮下包埋实验分析生物相容性。结果经脱细胞处理后,带瓣膜管道的瓣叶和管壁中 DNA 含量仅为正常的1.35%和2.81%,可溶性蛋白含量仅为正常的8.46%和12.65%,细胞成分几乎完全去除。HE 和 Movat 染色及电镜观察显示组织结构完整、细胞结构完全消失,胶原、弹性纤维、蛋白聚糖等主要基质成分充分保留;瓣膜生物力学性能与正常瓣膜差异无统计学意义;支架生物相容性良好,并具有低免疫原性和可降解性。结论十二烷基肌氨酸钠是一种理想的新型脱细胞试剂,以此可以建立一套低毒、高效、对组织结构无损伤的脱细胞方法,并制备出生物学性能优异的脱细胞支架材料。
- 方宁涛孙洪亮谢尚喆吴春根王松梅高红阳潘銮凤
- 应用4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色法快速观察生物支架材料体外内皮化程度被引量：2
- 2006年
- 目的:建立一种新的形态学方法,以简便快捷地观察生物支架材料体外内皮化的程度。方法:实验于2005-07/2006-02在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。①新鲜的猪心瓣膜经过十二烷基磺酸钠和脱氧胆酸处理,获得去细胞生物支架。②采用消化法获得脐静脉内皮细胞。③将脐静脉内皮细胞(2×105/cm2)种植于支架上,静态培养10d。用0.5mg/L的4,6-联脒-2-苯基吲哚溶液对再内皮化支架进行直接的大体染色及染色后冰冻切片,同时用苏木精-伊红染色,免疫荧光染色和扫描电镜对支架的内皮化情况进行平行观察。结果:①猪心瓣膜的细胞成分完全脱去,胞外基质保存完好。②原代分离的脐静脉内皮细胞,培养5d后融合成扁平单层,梭形或多角形,具有典型的铺路石样形态;CD31免疫荧光染色细胞表面呈现黄绿色荧光。③脐静脉内皮细胞种植10d后,支架经4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色显示内皮化程度达90%以上,观察结果与电镜观察相同;冰冻切片观察显示支架表面有一融合的内皮细胞单层,与免疫荧光染色及常规苏木精-伊红染色结果相吻合。结论:4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色法可直接观察生物支架再内皮化程度,简便、准确直观,是体外构建组织的一种有效的形态学检测方法。
- 孙洪亮方宁涛谢尚喆高红阳潘銮凤
- 关键词：心脏瓣膜
